【摘要】：目的:齊墩果酸對腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導的人成纖維細胞樣滑膜細胞(Human fibroblast-like synoviocytes,HFLS)炎癥因子表達的影響及其可能的分子機制,為齊墩果酸在類風濕關節(jié)炎中的應用提供理論依據。方法:1、體外培養(yǎng)并傳代人成纖維細胞樣滑膜細胞。2、實驗方法:四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT)檢測HFLS活性,western blot蛋白檢測法檢測細胞p38MAPK及NF-κB p65的表達,RT-PCR檢測白介素-6(Interleukin 6,IL-6)和白介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)的表達,ELISA法檢測HFLS上清液中IL-6和IL-1β的生成。3、實驗分組:根據研究目的將實驗分為3部分:(1)檢測齊墩果酸對基礎狀態(tài)下HFLS的影響,將細胞分為6組:對照組及不同濃度齊墩果酸組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L);(2)檢測齊墩果酸對TNF-α誘導的HFLS炎癥因子表達的影響,分為5組:對照組,TNF-α組及TNF-α+不同濃度齊墩果酸組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(3)檢測p38MAPK及NF-κB的蛋白表達變化,將細胞分為5組:對照組,TNF-α組,TNF-α+不同濃度齊墩果酸組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(4)檢測p38MAPK及NF-κB阻斷劑對HFLS上清液中炎癥因子生成的影響,分為5組:對照組,TNF-α組,TNF-α+齊墩果酸(20μmol/L)組,TNF-α+p38MAPK阻斷劑組,TNF-α+NF-κB阻斷劑組。結果:1、5μmol/L-20μmol/L的齊墩果酸對基礎狀態(tài)的HFLS的活性無明顯影響(P0.05)。當濃度大于40μmol/L后,齊墩果酸明顯抑制細胞活性(P0.05)。2、與對照組比較,TNF-α明顯促進IL-6及IL-1β的mRNA表達,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、與TNF-α組比較,不同濃度齊墩果酸對TNF-α誘導的IL-6及IL-1β的mRNA表達均有抑制作用,并呈濃度依賴性(P0.05)。4、與對照組比較,TNF-α能促進p38MAPK的磷酸化,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與TNF-α組比較,齊墩果酸能抑制TNF-α誘導的p38MAPK磷酸化(P0.05),且呈濃度依賴性。5、與對照組比較,TNF-α能促進NF-κB核蛋白的表達,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與TNF-α組比較,齊墩果酸能抑制TNF-α誘導的NF-κB核蛋白的表達(P0.05)。6、加入p38MAPK阻斷劑SB203580和NF-κB抑制劑Bay11-7082后,與TNF-α組比較,IL-6及IL-1β的生成明顯減少(P0.05)。結論:1、TNF-α能促進HFLS細胞IL-6及IL-1β的表達和分泌,并促進p38MAPK的磷酸化及NF-κB核轉位。2、齊墩果酸能抑制TNF-α誘導的HFLS炎癥因子的表達(IL-6及IL-1β),并抑制TNF-α誘導p38MAPK的磷酸化及NF-κB核轉位。3、齊墩果酸通過抑制p38MAPK及NF-κB信號通路,從而抑制HFLS細胞炎癥因子的表達。
【圖文】：

西 南 醫(yī) 科 大 學 碩 士 學 位 論 文養(yǎng)及傳代文獻進行細胞的復蘇及傳代[4]，，簡單敘述如下浴箱中進行約 1min 的解凍后，放入超凈工作，放入到事先準備好的培養(yǎng)皿中，并加入完全養(yǎng)皿放入二氧化碳孵箱中。第二天將細胞取出長，為細胞換液后，此后每隔 2 天換液 1 次。，進行細胞傳代。

人成纖維細胞樣滑膜細胞（光鏡×100倍）
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R593.22

【參考文獻】

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本文編號：2518309