【摘要】：研究背景： 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、系統(tǒng)性的自身免疫疾病,以對稱性的多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn),最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能障礙,并累及關(guān)節(jié)外多種組織和器官,是人類喪失勞動力和致殘的主要原因之一。目前RA的發(fā)病機(jī)制不是很明確,環(huán)境因素、遺傳易感性、免疫功能紊亂被認(rèn)為與其關(guān)系密切。micro RNAs(mi RNAs)是由高等真核生物基因組編碼的一類不編碼蛋白質(zhì)的小分子RNA,通過與靶m RNA堿基互補(bǔ)配對來降解靶m RNA或阻礙其翻譯,在轉(zhuǎn)錄后水平對基因表達(dá)起負(fù)性調(diào)控作用。大量研究表明mi RNAs在細(xì)胞發(fā)育,造血過程,器官形成,細(xì)胞增殖、凋亡和腫瘤發(fā)生,免疫調(diào)節(jié)等過程中起著重要作用。近年來,mi RNAs在腫瘤、炎癥及自身免疫性疾病中的異常表達(dá)已成為研究熱點。目的：1.通過檢測活動期女性RA患者和健康女性外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中mi R-146a、mi R-23b表達(dá)水平,了解其在RA患者和健康人群之間的表達(dá)差異,分析RA患者是否存在mi R-146a和mi R-23b表達(dá)異常,并分析二者與RA患者重要的炎性因子白介素-17(interleukin-17,IL-17)的相關(guān)性,以及二者與臨床實驗室相關(guān)指標(biāo)血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C-反應(yīng)蛋白(C-reaction protein,CRP)、抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗體、類風(fēng)濕因子(rheumatoid factors,RF)、疾病活動評分(DAS)之間的相關(guān)性,以明確RA患者PBMCs中mi R-146a和mi R-23b的表達(dá)水平及其與疾病相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。2.通過測定雌激素處理后的PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的變化,探討雌激素對mi R-146a、mi R-23b和IL-17表達(dá)的影響,以及mi R-146a、mi R-23b分別與IL-17的相關(guān)性,揭示雌激素是否對mi R-146a和mi R-23b的表達(dá)具有調(diào)控作用,闡釋雌激素對RA的作用機(jī)理。方法1.以34例女性活動期RA患者作為研究對象,收集其空腹外周靜脈血,肝素抗凝,分離血漿于-80℃凍存?zhèn)溆?同時無菌分離PBMCs。收集RA患者的臨床資料。以40例女性健康體檢者作為正常對照(normal control,NC)組。2.將一部分無菌分離的PBMCs即刻用于提取總RNA。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)測定mi R-146a和mi R-23b表達(dá)水平作為二者的基礎(chǔ)表達(dá)值,比較其在RA組與正常對照組之間的差異。3.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定血漿中IL-17的濃度,比較IL-17在兩組間的差異,分析mi R-146a和mi R-23b基礎(chǔ)表達(dá)水平與血漿IL-17、ESR、CRP、抗CCP抗體、RF、DAS等臨床指標(biāo)的相關(guān)性。4.另一部分無菌分離的PBMCs用于細(xì)胞培養(yǎng)。采用濃度為1×10-7mol/L雌二醇(estradiol,E2)分別處理RA組和正常對照組PBMCs6h(同時設(shè)未加E2處理的空白孔作為空白對照),分別收集培養(yǎng)上清和細(xì)胞。培養(yǎng)上清于-80℃凍存?zhèn)溆�。提取PBMCs總RNA,RT-q PCR測定mi R-146a和mi R-23b水平,比較mi R-146a、mi R-23b在RA和NC各組內(nèi)E2處理組與未處理組(空白對照組)之間的差異。5.經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定培養(yǎng)上清中IL-17的濃度,比較E2處理組與未處理組之間的差異,分析mi R-146a、mi R-23b表達(dá)水平與培養(yǎng)上清中IL-17濃度的相關(guān)性。結(jié)果： 1.女性RA患者組與正常對照組比較,PBMCs中mi R-146a基礎(chǔ)表達(dá)水平[5.12E-03(2.16E-03,14.41E-03)vs 3.48E-03(2.24E-03,5.15E-03),P=0.040],mi R-23b基礎(chǔ)表達(dá)水平[0.24E-03(0.13E-03,0.67E-03)vs 0.16E-03(0.08E-03,0.31E-03),P=0.041]及血漿IL-17濃度[1.80 pg/ml(0.84,4.89 pg/ml)vs 0.85 pg/ml(0.24,3.51 pg/ml),P=0.047]均顯著增高。2.女性RA患者PBMCs中mi R-146a基礎(chǔ)表達(dá)水平與ESR呈正性相關(guān)(R=0.377,P=0.030),與血漿IL-17(R=-0.184,P=0.332)、CRP(R=0.067,P=0.717)、抗CCP抗體(R=-0.116,P=0.520)、RF(R=0.000,P=0.999)、DAS(R=0.289,P=0.097)無顯著相關(guān)性。女性RA患者PBMCs中mi R-23b基礎(chǔ)表達(dá)水平與血漿IL-17(R=0.000,P=0.999)、CRP(R=-0.065,P=0.722)、ESR(R=0.041,P=0.820)、抗CCP抗體(R=0.022,P=0.902)、RF(R=-0.005,P=0.979)、DAS(R=-0.149,P=0.401)均無顯著相關(guān)性。3.PBMCs經(jīng)濃度為1×10-7mol/L的E2處理6h后(1)RA患者:處理組與未處理組比較,mi R-146a表達(dá)水平[4.88E-03(2.88E-03,14.13E-03)vs 4.78E-03(1.82E-03,13.74E-03),P=0.360],mi R-23b表達(dá)水平[0.24E-03(0.08E-03,0.78E-03)vs 0.24E-03(0.08E-03,0.66E-03),P=0.755]及IL-17濃度[0.86 pg/ml(0.72,1.01 pg/ml)vs 0.75pg/ml(0.65,0.87 pg/ml),P=0.078]均沒有顯著差異。結(jié)果表明,雌激素對RA患者PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的表達(dá)均沒有明顯影響。(2)正常對照:處理組與未處理組比較,mi R-146a表達(dá)水平[2.75E-03(2.01E-03,4.91E-03)vs 3.00E-03(1.99E-03,5.20E-03),P=0.563],mi R-23b表達(dá)水平[0.12E-03(0.06E-03,0.23E-03)vs 0.13E-03(0.05E-03,0.30E-03),P=0.485]及IL-17濃度[0.76 pg/ml(0.65,0.86 pg/ml)vs 0.76pg/ml(0.72,0.86 pg/ml),P=0.355]均沒有顯著差異。結(jié)果表明,雌激素對健康人群PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的表達(dá)也沒有明顯影響。(3)RA患者PBMCs經(jīng)雌激素處理后,mi R-146a表達(dá)水平與培養(yǎng)上清IL-17濃度之間(R=-0.257,P=0.355),mi R-23b與IL-17之間(R=-0.414,P=0.125)沒有顯著相關(guān)性。(4)正常對照組PBMCs經(jīng)雌激素處理后,mi R-146a表達(dá)水平與培養(yǎng)上清IL-17濃度之間(R=0.433,P=0.064)、mi R-23b與IL-17之間(R=-0.233,P=0.338)沒有顯著相關(guān)性。結(jié)論： 1.女性活動期RA患者PBMCs中mi R-146a、mi R-23b基礎(chǔ)表達(dá)水平及血漿IL-17濃度高于正常對照,表明RA患者存在mi R-146a、mi R-23b及IL-17的異常表達(dá),提示增高的mi R-146a、mi R-23b及IL-17可能與RA的病理過程有關(guān)。2.女性活動期RA患者PBMCs中mi R-146a基礎(chǔ)表達(dá)水平與ESR呈正相關(guān),提示PBMCs中增高的mi R-146a可能與RA疾病活動性相關(guān)。3.1×10-7mol/L濃度的雌激素在6h時間點上對RA患者及健康人群PBMCs中mi R-146a、mi R-23b和IL-17的表達(dá)均沒有明顯影響,且mi R-146a與IL-17、mi R-23b與IL-17之間沒有相互協(xié)同或拮抗的作用。
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【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R593.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2335133