紅景天苷對糖尿病大鼠腎臟Nrf2、γ
本文關鍵詞:紅景天苷對糖尿病大鼠腎臟Nrf2、γ-GCS、PPAR-γ表達的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
《河北醫(yī)科大學》 2014年
紅景天苷對糖尿病大鼠腎臟Nrf2、γ-GCS、PPAR-γ表達的影響
張雪松
【摘要】:目的:目前,糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy, DN)已成為終末期腎臟病的主要原因之一,對DN發(fā)生發(fā)展機制的研究就顯得尤為重要,但至今尚未完全闡明,其機制可能與遺傳、糖代謝、血流動力學、炎癥及細胞因子等因素有關。探討其相關機制可以為糖尿病腎病防治提供新的理論依據(jù)。已有研究證實,氧化應激與糖尿病腎病的發(fā)病密切相連。高糖狀態(tài)所致的氧化應激可促使活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生過多,誘導炎性介質和細胞因子生成,使細胞外基質(Extracellular matrix,ECM)合成增加,加速腎小球硬化。長期的高血糖使紅細胞的攜氧能力下降,組織細胞H2O2、O2-等生成增多,谷胱甘肽(GSH)減少,影響腎臟的結構和功能。Nrf2/ARE信號通路是機體重要的內源性保護通路,該通路被認為是調控體內眾多抗氧化成分的關鍵通路,具有平衡內環(huán)境的氧化-還原狀態(tài)、抗炎等生物作用。Nrf2/ARE信號通路激活使下游Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因轉錄增加,如谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS),增加機體對氧化應激的抵抗。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)是核轉錄因子超家族的成員,其中PPAR-γ與腎臟關系十分密切。PPAR-γ的激活與抑制對維持機體功能狀態(tài)具有重要意義。目前已知的拮抗劑較局限,如BADGE、GW9662等藥物;PPAR-γ的激動劑主要包含兩類,即天然配體與合成配體,前者如15d-PGJ2等,后者主要包括噻唑烷二酮類藥物等。并且已有研究顯示Nrf2/ARE信號通路與PPAR-γ具有某些內在聯(lián)系。紅景天苷作為一種中藥提取物,有著廣泛的藥理作用,如抗氧化、抗炎、抗腫瘤等。在動物實驗研究中,紅景天苷是否可以通過激活Nrf2/ARE信號通路與PPAR-γ因子減輕糖尿病腎臟的氧化應激反應,減少蛋白尿,文獻報道十分少見。本實驗通過建立糖尿病大鼠模型,給予紅景天苷干預,探討Nrf2/ARE信號通路與PPAR-γ因子之間的關系,揭示紅景天苷在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中的作用,從而為治療糖尿病腎病提供新思路。 材料與方法:選擇SPF級健康雄性SD大鼠30只,體重200±20g,隨機選擇10只,即正常組(NC組),其余20只制造糖尿病大鼠模型。購買大鼠后先行適應性喂養(yǎng),在腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)之前需空腹12小時,造糖尿病大鼠模型即給予STZ65mg/kg。72小時后測血糖≥16.7mmol/L,尿糖≥3+即為造模成功。NC組給予等量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射。造模成功隨機分為兩組,即DM組、SAL組。次日開始進行治療,即給予紅景天苷30mg/kg·d灌胃。各組大鼠分籠喂養(yǎng),予普通飼料、自由進食水,光照溫度濕度一定,共觀察12周。分別于6周、12周,隨機選取5只大鼠,留取24小時尿液,檢測蛋白定量,稱取體重后腹腔注射10%水合氯醛麻醉,心臟取血,檢測血糖、肌酐、尿素氮。雙腎去包膜稱重后,留取右腎,檢測CAT、GSH指標及應用RT-PCR方法檢測Nrf2、γ-GCS、PPAR-γ的表達。留取左腎,制作病理切片,分別采用HE和PAS染色方法,在光鏡下觀察大鼠腎臟組織病理變化;應用免疫組織化學方法檢測腎臟中Nrf2、γ-GCS、PPAR-γ的表達,結果應用圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。實驗數(shù)據(jù)若計量資料用均數(shù)±標準差(X±S)表示,每組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗,若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)性和方差齊則采用非參數(shù)檢驗,應用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件處理實驗數(shù)據(jù),以P0.05有統(tǒng)計學意義。 結果:統(tǒng)計三組大鼠體重與腎指數(shù)(腎重/體重)、24小時尿蛋白定量及血生化指標,以P0.05具有統(tǒng)計學意義。其中,糖尿病大鼠隨著病程進展逐漸出現(xiàn)多飲、多食、多尿、消瘦、精神萎靡、反應遲鈍等癥狀,24小時尿蛋白增加,SAL組大鼠尿蛋白定量較DM組減少,血糖、血肌酐及尿素氮亦較DM組下降(P0.05),具有統(tǒng)計學意義。光鏡下觀察各組腎臟組織HE及PAS染色,NC組大鼠腎臟未見病變,隨著高血糖的持續(xù)存在,其余兩組在第6周時腎組織可有細胞及基質輕度增生,病變隨時間推移逐漸加重,于第12周系膜基質增生更為明顯。SAL組腎臟病變程度較DM組有所減輕。應用圖像分析系統(tǒng)分析免疫組織化學染色切片,結果顯示:Nrf2、γ-GCS主要表達于腎小球、腎小管上皮細胞胞漿中,表達強度為:SAL組DM組NC組(P0.05);PPAR-γ主要在集合管、近端腎小管、遠端腎小管的上皮細胞胞漿中表達,腎小球少見表達,該因子表達強度為: NC組DM組SAL組(P0.05)。氧化應激指標方面,腎臟中CAT與GSH在造模成功后6、12周后顯著減低,SAL組水平明顯高于DM組(P0.05)。RT-PCR結果顯示Nrf2、γ-GCS、PPAR-γ的表達趨勢與免疫組織化學結果一致。 結論:糖尿病大鼠造模成功后,,氧化應激增強,Nrf2/ARE信號通路激活,其下游抗氧化蛋白γ-GCS表達增強,PPAR-γ的表達降低;SAL可以增強Nrf2/ARE信號通路的激活狀態(tài),誘導γ-GCS表達,并可抑制PPAR-γ表達,達到降低血糖、減少蛋白尿、減輕腎臟氧化應激損傷的作用。
【關鍵詞】:
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2014
【分類號】:R587.2;R692
【目錄】:
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本文關鍵詞:紅景天苷對糖尿病大鼠腎臟Nrf2、γ-GCS、PPAR-γ表達的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號:222257
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