本文選題：糖尿病腎病 + 轉(zhuǎn)化生長因子β1��； 參考：《第三軍醫(yī)大學》2016年碩士論文

【摘要】：轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)是一種分泌型多肽分子,屬于TGF超家族。人類體內(nèi)TGF-β有3種亞型TGF-β1、2、3,其中TGF-β1在細胞中含量最為豐富,是一種多功能細胞生長因子。在糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)發(fā)生過程中,腎小球系膜細胞表型轉(zhuǎn)化是最為突出的早期表現(xiàn),系膜細胞增殖、大量合成細胞外基質(zhì)并異常聚積,由此導致的腎小球硬化是DN的主要病理特征,而TGF-β1活化是導致系膜細胞轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。DNA甲基化作為重要的表觀遺傳修飾方式之一,在調(diào)節(jié)DN患者腎臟纖維化和DN相關(guān)基因表達方面起到至關(guān)重要的作用。既往研究提示關(guān)鍵基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)與轉(zhuǎn)錄活性有關(guān),而導致DN患者腎纖維化的關(guān)鍵因子,TGF-β1啟動子區(qū)DNA甲基化和DN之間的關(guān)系尚未見報道。本課題擬探討糖尿病腎病患者TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)甲基化水平變化以及與血清TGF-β1含量之間的關(guān)系,先檢測糖尿病腎病(DN)患者TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)DNA甲基化水平變化,同時觀察TGF-β1蛋白水平、炎癥因子及致纖維化因子水平、臨床生化指標、糖尿病腎病患者腎小球病理改變情況,最后將TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)DNA甲基化水平變化與血清TGF-?1等相關(guān)指標進行相關(guān)分析。方法:選取2013年6月到2015年5月于第三軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院住院的2型糖尿病患者(依據(jù)1999年WHO修訂的糖尿病診斷及分型標準)101例[估計腎小球濾過率(e GFR)≥30毫升/分鐘/1.73 m2],同時排除慢性腎炎、尿路感染、心力衰竭、原發(fā)性高血壓等疾病。根據(jù)尿微量白蛋白/肌酐(UACR)比值分為單純糖尿病組(DM組,UACR30μg/mg,n=42),糖尿病腎病組(DN組,30μg/mgUACR300μg/mg,n=49),氯沙坦治療糖尿病腎病組(LOS組,30μg/mgUACR300μg/mg,n=20),所有入組DN患者行腎穿刺活檢證實為糖尿病腎病。參照2010年Tervaet等提出的DN病理診斷及分型標準對DN組及LOS組患者病理變化進行分級。30名于我院同期體檢健康志愿者作為對照組(Con組),均排除糖尿病和其他系統(tǒng)疾病。本臨床研究獲得第三軍醫(yī)大學新橋醫(yī)院倫理委員會的批準,所有受試者均簽署知情同意書。參數(shù)檢測:抽提受試者外周血白細胞DNA,亞硫酸氫鈉修飾處理DNA。MSP初篩各組TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)甲基化率,BSP檢測TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)甲基化水平。檢測血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、空腹血糖(FBS)、餐后血糖(PBS)、糖化血紅蛋白(Hb A1c)、血清TGF-β1、C反應蛋白(CRP)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、尿微量白蛋白/肌酐(UACR)、尿單核細胞趨化蛋白-1/肌酐(UMCR)、尿Ⅳ型膠原(Col-Ⅳ),使用公式186.3×(Scr/88.4)-1.154×年齡-0.203[×0.742(若為女性)]計算e GFR。結(jié)果:1.MSP法初篩TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)DNA甲基化水平的變化,Con組甲基化率為73.3%,DM組下降為42.8%,DN組進一步下降為12.2%,組間比較均有顯著性差異。LOS組甲基化率為20%,與DN組比較也有顯著性差異。2.用BSP法進一步檢測TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)DNA甲基化水平的變化,發(fā)現(xiàn)Con組甲基化水平為66.7±9.1%,DM組為35.6±6.0%,DN組為12.5±8.1%,三組間均有顯著性差異。LOS組為18.7±6.2%,比DN組甲基化水平有顯著升高。3.ELISA檢測血清TGF-β1含量變化,Con組為296.38±74.37 ng/L,DM組為1367.22±126.13 ng/L,DN組為2885.73±411.36 ng/L,三組間有顯著性差異。LOS組血清TGFβ1含量為1523.82±173.71 ng/L,與DN組比較有顯著減少(P0.01)。4.血清中炎癥細胞因子檢測發(fā)現(xiàn),C反應蛋白(CRP),Con組為6.53±0.25 mg/L,DM組為11.15±0.83 mg/L,DN組為19.03±2.57 mg/L,LOS組為12.84±1.62 mg/L;白細胞介素-6(IL-6),Con組為2.69±0.15 ng/L,DM組為5.02±0.19 ng/L,DN組為7.47±1.09 ng/L,LOS組為5.41±0.51 ng/L;白細胞介素-8(IL-8),Con組為54.84±2.36 ng/L,DM組為147.68±5.70 ng/L,DN組為289.09±30.79 ng/L,LOS組為160.13±14.61 ng/L;腫瘤壞死因子?(TNF?),Con組為7.57±0.75 ng/L,DM組為15.83±0.63 ng/L,DN組為45.57±7.68 ng/L,LOS組為22.64±7.61 ng/L。這些指標在Con組、DM組、DN組三組間均有顯著差異,LOS組顯著低于DN組。5.尿液分析發(fā)現(xiàn),尿IV型膠原(Col-Ⅳ),Con組為39.59±12.56 pg/ng,DM組為151.40±20.62 pg/ng,DN組為374.16±81.09 pg/ng,LOS組為170.63±13.43 pg/ng;尿單核細胞趨化細胞蛋白-1/肌酐比值(UMCR),Con組為7.73±0.45μg/L,DM組為37.14±9.03μg/L,DN組為93.59±27.68μg/L,LOS組為50.76±10.46μg/L。這些指標在Con組、DM組、DN組三組間均有顯著差異,LOS組顯著低于DN組。6.Pearson相關(guān)分析得出血清TGF-β1水平與FBS(r=0.942)、PBS(r=0.682)、BUN(r=0.479)、Scr(r=0.756)、CRP(r=0.731)、IL-6(r=0.653)、IL-8(r=0.675)、TNF?(r=0.729)、UACR(r=0.718)、UMCR(r=0.794)、Col-Ⅳ(r=0.746)呈正相關(guān)(均P0.01),與e GFR(r=-0.805)和TGF-β1基因調(diào)控區(qū)甲基化水平(r=-0.925)呈負相關(guān)(均P0.01)。以UACR、FBS、PBS、UMCR、e GFR、TGF-β1基因調(diào)控區(qū)甲基化水平作為自變量,血清TGF-β1含量作為因變量,進行多元逐步回歸分析,提示e GFR(β=-0.690,P0.01)和基因甲基化(β=-0.302,P0.01)和血清TGF-β1相關(guān),提示它們是影響血清TGF-β1蛋白表達的因素。7.血清TGF-β1蛋白水平與甲基化呈負相關(guān)(rs=-0.925,P0.01),與腎臟病理改變的嚴重程度呈正相關(guān)(rs=0.847,P0.01)。同時DN組甲基化水平和病理分級相關(guān)(χ2=23.667,P=0.04)。結(jié)論:1.隨著糖尿病病程的延長,TGF-β1基因調(diào)控區(qū)甲基化水平逐漸降低,以DN組最低。同時,血清TGF-β1含量逐漸升高,以DN組最高,提示高糖可能通過誘導TGF-β1基因調(diào)控區(qū)去甲基化,促進TGF-β1基因表達。2.血管緊張素II-1型受體抑制劑(氯沙坦)治療使血清TGF-β1降低,可能與抑制TGF-β1基因表達調(diào)控區(qū)去甲基化機制有關(guān)。
[Abstract]:Transforming growth factor - 尾 ( TGF - 尾 ) is a kind of secreted polypeptide molecule , and belongs to the TGF superfamily . The expression of TGF - 尾1 in diabetic nephropathy ( DN ) is the most prominent expression of TGF - 尾1 in diabetic nephropathy ( DN ) . Results : 1 . The level of DNA methylation of TGF - 尾1 gene was significantly higher in the patients with DN than that in DN group . The DN group was 7.47 鹵 1.09 ng / L , the LOS group was 5.41 鹵 0.51 ng / L , IL - 8 , Con group was 54.84 鹵 2.36 ng / L , the DM group was 147.68 鹵 5.70 ng / L , the DN group was 289.09 鹵 30.79 ng / L , the LOS group was 160.13 鹵 14.61 ng / L , the tumor necrosis factor ( TNF ? ) ? The levels of serum TGF - 尾1 were significantly lower in the group of Con A , DM group and DN group than in DN group . The levels of serum TGF - 尾1 were significantly lower than those of DN group . The level of TGF - 尾1 was negatively correlated with methylation ( rs = - 0.925 , P0.01 ) . At the same time , the methylation level and pathological grade of DN group were correlated ( 蠂2 = 23.667 , P = 0.04 ) . Conclusion : 1 . With the prolongation of diabetes course , the methylation level of TGF - 尾1 gene is decreasing gradually in DN group . At the same time , the content of TGF - 尾1 in serum is the highest in DN group . It is suggested that high glucose may induce TGF - 尾1 gene expression . 2 . Angiotensin II - 1 receptor inhibitor ( losartan ) can decrease the serum TGF - 尾1 gene expression and may be related to the inhibition of TGF - 尾1 gene expression regulation region demethylation mechanism .
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9

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