本文選題：ANG + ANG-shRNA慢病毒載體　； 參考：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2017年10期

【摘要】：通過(guò)干擾血管生成素(ANG)mRNA的表達(dá),揭示ANG在糖尿病視網(wǎng)膜病變過(guò)程中的作用,本研究根據(jù)NCBI中查詢的ANG序列設(shè)計(jì)陰性對(duì)照序列(NC)和3條ANG-shRNA序列(ANG-shRNA-1,ANG-shRNA-2,ANG-shRNA-3)構(gòu)建至慢病毒載體GV248中,并進(jìn)行病毒包裝,轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞進(jìn)行滴度的測(cè)定。將包裝好的慢病毒感染大鼠肝癌細(xì)胞(RH-35),測(cè)定感染效率,提取RNA,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)篩選出干擾效率最高的ANG-shRNA序列。結(jié)果顯示,通過(guò)qPCR對(duì)3條序列慢病毒干擾效率的篩選發(fā)現(xiàn),NC組ANG的表達(dá)高于空白對(duì)照組(p0.01),ANG-shRNA-1、ANG-shRNA-2和ANG-shRNA-3組分別與NC組相比ANG表達(dá)均下降至99%、95%和94%。最終結(jié)果表明,在mRNA水平上3條ANG-shRNA序列干擾效率均高于90%,其中ANG-shRNA-1序列的干擾效率最高達(dá)到99%,因此3條干擾序列均可用到活體實(shí)驗(yàn)中。
[Abstract]:By interfering with the expression of angiopoietin (Ang) mRNA and revealing the role of Ang in diabetic retinopathy, we constructed the lentiviral vector GV248 by designing a negative control sequence (NC) and three NG-AshRNA sequences (ANG-shRNA-1, ANG-shRNA-2NG-shRNA-3) according to the ANG sequence queried in NCBI. The virus was packaged and transfected into 293T cells for titer determination. The infected rat hepatoma cells (RH-35) were infected with lentivirus, the infection efficiency was measured, the RNAs were extracted, and the ANG-shRNA sequence with the highest interference efficiency was screened by real-time fluorescent quantitative PCR (qPCR). The results showed that the expression of Ang in NC group was significantly higher than that in control group (p0.01). Compared with NC group, the expression of Ang in ANG-shRNA-1 and ANG-shRNA-3 group was significantly lower than that in NC group (95% and 94%, respectively). The results showed that the interference efficiency of three ANG-shRNA sequences was higher than that of 90 at mRNA level, and the highest interference efficiency of ANG-shRNA-1 sequence was 99, so all three interference sequences could be used in vivo.
【作者單位】： 華北理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院;華北理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【基金】：河北省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(14277727D)資助
【分類號(hào)】：R587.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 李婷婷;胡健艷;吳強(qiáng);;靶向G蛋白偶聯(lián)受體91的小發(fā)夾RNA慢病毒載體的構(gòu)建及功能初步檢測(cè)[J];眼科新進(jìn)展;2014年08期

2 蘇一鳴;朱紹興;蔡鵬;;人神經(jīng)生長(zhǎng)因子β亞基慢病毒載體的構(gòu)建[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年20期

3 李梅芳;張蓉;李連喜;俞立波;屠印芳;陸俊茜;包玉倩;賈偉平;;人FAM172A基因慢病毒載體的構(gòu)建及其在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2014年04期

4 崔玉倩;趙涵;馬增香;趙世斗;徐海靜;王文婷;郭海鵬;陳子江;;小鼠Tox3基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及其在卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2014年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 梁宏達(dá);趙穎杰;王吉波;潘琳;劉湘平;楊X;隋愛華;;慢病毒介導(dǎo)的靶向腫瘤壞死因子-α基因RNA干擾治療實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 梁俊;體外研究慢病毒載體介導(dǎo)人DNMT1基因?qū)LE患者CD4~+T淋巴細(xì)胞的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 于建超;慢病毒介導(dǎo)的SCL基因體外轉(zhuǎn)染ICC效果研究[D];石河子大學(xué);2016年

2 王亮;慢病毒介導(dǎo)shRNA沉默F(xiàn)gl2基因?qū)π募∥⒀軆?nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的影響及其機(jī)制的研究[D];南昌大學(xué);2011年

3 高雪明;IL-37的表達(dá)、純化及其抑制膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的作用[D];寧波大學(xué);2014年

4 牟曉莉;睪酮對(duì)小鼠卵泡體外發(fā)育的影響及小鼠Denndla基因慢病毒載體的構(gòu)建[D];山東大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：2104089