本文選題：17α-羥化酶/17 + 20-裂鏈酶陷癥�。� 參考：《鄭州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景:17α-羥化酶/17,20-裂鏈酶缺陷癥是先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥(congenital adrenal hyperplasia,CAH)的一種罕見類型,其由于CYP17A1基因突變導(dǎo)致P450c17酶功能缺陷,從而產(chǎn)生高血壓、低血鉀、男性假兩性畸形或女性性幼稚等臨床癥狀。人類CYP17A1基因位于第10號(hào)染色體長臂(10q24.3),它共有8個(gè)外顯子,編碼508個(gè)氨基酸。目前人類基因突變數(shù)據(jù)庫中(http://www.hgmd.org/)已發(fā)現(xiàn)90余種不同的CYP17A1的基因突變類型。國內(nèi)外對(duì)17α-羥化酶缺陷癥的研究主要集中在兩方面:1.通過對(duì)CYP17A1基因進(jìn)行基因測(cè)序,在確定基因突變位點(diǎn)后,通過構(gòu)建含有突變位點(diǎn)的重組體,從細(xì)胞水平鑒定基因突變位點(diǎn)對(duì)P450c17酶蛋白功能的影響;2.利用各種生物信息學(xué)軟件以及信息資料庫構(gòu)建P450C17的計(jì)算機(jī)三維結(jié)構(gòu)模型,從而預(yù)測(cè)分析基因突變位點(diǎn)對(duì)蛋白的空間結(jié)構(gòu)及功能的影響。目的:該研究的目的是研究我院收治的一例17α-羥化酶/17,20-裂鏈酶缺陷癥患者的CYP17A1基因突變類型。對(duì)象及方法:1.先證者:15歲,社會(huì)性別為女性,基因型46,XY,鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院于2013年收住院,患者表現(xiàn)為原發(fā)性高血壓、假兩性畸形和外陰女性幼稚型�；颊哐狝CTH水平升高,但血、尿皮質(zhì)醇水平明顯降低;性激素六項(xiàng)顯示血FSH、LH水平升高,而雄激素、雌激素水平均明顯降低;且硫酸脫氫表雄酮、17α-羥孕酮水平亦明顯降低。在患者及其家屬知情同意下,同時(shí)抽取患者及其父母、祖父母、外祖父母外周血各2ml。2.用苯酚-氯仿-異戊醇抽提法提取患者及其家屬全血基因組DNA。3.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物純化和DNA測(cè)序:設(shè)計(jì)分別包含外顯子1、外顯子2和外顯子3、外顯子4、外顯子5、外顯子5、外顯子6、外顯子7、外顯子8的7對(duì)引物,用ABI Verity 96well PCR擴(kuò)增儀分別擴(kuò)增8個(gè)外顯子及外顯子和內(nèi)含子連接區(qū),并采用Syngene Gene Genius凝膠成像儀進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的純度,用PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒(SK1141生工生物工程(上海)股份有限公司)進(jìn)行PCR產(chǎn)物回收,回收后產(chǎn)物用ABI3730XL測(cè)序儀進(jìn)行雙向測(cè)序。一旦發(fā)現(xiàn)突變的存在,該基因組DNA的PCR片段將會(huì)被放大100倍并同時(shí)進(jìn)行分析以排除基因多態(tài)性。4.測(cè)序結(jié)果分析:測(cè)序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比(Gene Bank ID:1586)。結(jié)果:1.同義突變:①第1外顯子第46位密碼子存在堿基替換(CAC→CAT,H46H)②第1外顯子第65位密碼子存在堿基替換(TCG→TCT,S65S)。2.無義突變:患者第1外顯子非編碼區(qū)存在堿基替換(T→C)。3.錯(cuò)義突變:第4外顯子第236位密碼子存在堿基替換(GTT→GAT),導(dǎo)致氨基酸V236D,該突變來自于先證者母親,其外祖父同樣存在該突變,而其父親、祖父母及外祖母為正常序列。4.堿基缺失及移碼突變:第6外顯子第329位密碼子發(fā)生堿基缺失移碼突變(TAC→AA),并提前終止(418TGA)。該突變來源于先證者父親,其祖父同樣存在該突變,而先證者母親、祖母及外祖父母為正常序列。結(jié)論:通過對(duì)先證者及其父母、祖父母、外祖父母基因分析,發(fā)現(xiàn)1個(gè)錯(cuò)義突變(V236D)和一個(gè)堿基缺失移碼突變(Y329K,418X),均為雜合突變。其中Y329K,418X屬于中國人群常見的突變類型之一。V236D尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。通過這兩種雜合突變,共同導(dǎo)致P450c17酶發(fā)生功能該百年,從而造成患者表現(xiàn)型的改變。
[Abstract]:Background : 17偽 - hydroxylase / 17,20 - lyase deficiency is a rare type of congenital adrenal hyperplasia ( CAH ) . Results : 1 . synonymous mutation : 鈶，

本文編號(hào)：2093087