本文選題：恩貝酸 + 肥胖��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：背景:肥胖是一種代謝性疾病,由多種因素引起。其特點(diǎn)是體內(nèi)脂肪細(xì)胞體積的增大和細(xì)胞數(shù)量的增加,由此導(dǎo)致脂肪質(zhì)量占身體總質(zhì)量的百分比異常增高,并且脂肪過多沉積在附睪周圍、腸系膜和腎周等部位[1]。肥胖會(huì)使多種疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)明顯增加,如心腦血管疾病、脂肪肝、糖尿病等[2]。恩貝酸(embelin)是從植物中提取的一種醌類化合物。已有文獻(xiàn)研究表明對于高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肥胖模型,Embelin能夠抑制肥胖和由于肥胖導(dǎo)致的高血脂和氧化應(yīng)激[3]。本研究主要探討了Embelin是否通過抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化分化來抑制肥胖,并初步探究其機(jī)制。方法:1、骨髓基質(zhì)細(xì)胞系C3H10T1/2和間充質(zhì)干細(xì)胞系ST2分別用二甲基亞砜(DMSO)和不同濃度的Embelin處理后,用成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng),誘導(dǎo)細(xì)胞成脂分化,通過油紅O染色檢測分化程度,通過q RT-PCR和Western blotting從m RNA豐度和蛋白表達(dá)水平檢測成脂分化標(biāo)記基因的水平,從而確定Embelin對骨髓基質(zhì)細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化過程的影響;2、骨髓基質(zhì)細(xì)胞C3H10T1/2分別用DMSO和Embelin處理,通過細(xì)胞免疫熒光檢測β-連環(huán)蛋白(β-catenin)入核的改變,從而確定Embelin對wnt通路的作用;3、C3H10T1/2細(xì)胞分別用二甲基亞砜(DMSO)和不同濃度的Embelin處理后,成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)成脂,提取核蛋白,通過Western blotting檢測細(xì)胞核中β-catenin和T細(xì)胞因子(T cell factor,TCF)-4蛋白水平,確定Embelin對wnt通路的作用;4、C3H10T1/2細(xì)胞分別用二甲基亞砜(DMSO)或10μM的Embelin處理后,q RT-PCR檢測Wnt通路配體Wnt10b、共受體Lrp5、抑制因子Sfrp1和Dkk1的m RNA水平,以此確定Embelin影響Wnt通路的機(jī)制;5、雄性C57BL/6小鼠,4周齡,用高脂飼料喂養(yǎng)構(gòu)建小鼠肥胖模型,同時(shí)皮下注射不同劑量的Embelin,造模過程中記錄各組小鼠體重,成模后用骨密度儀測量體脂率,取血清檢測葡萄糖、甘油三酯、游離脂肪酸和總膽固醇水平,以此確定Embelin對肥胖的影響;6、實(shí)驗(yàn)組與對照組小鼠處死后,分離各個(gè)部位脂肪組織,提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄,通過q RT-PCR檢測不同部位脂肪組織中成脂分化標(biāo)記基因和關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平;7、取實(shí)驗(yàn)組與對照組小鼠的脂肪組織,制作石蠟切片,HE染色,觀察脂肪組織中脂肪細(xì)胞的體積。結(jié)果:1、油紅O染色表明Embelin對骨髓基質(zhì)細(xì)胞系C3H10T1/2和ST2成脂分化有抑制作用,q RT-PCR和Western blotting結(jié)果表明Embelin能抑制成脂分化標(biāo)記基因過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、CCATT增強(qiáng)結(jié)合蛋白(CCAAT enhancer binding proteinα,C/EBP-α)、脂肪細(xì)胞表征因子a P2(Adipocyte fatty acid-binding Protein 2)和Adipsin的表達(dá),且有劑量依賴效應(yīng);2、細(xì)胞免疫熒光表明在C3H10T1/2中Embelin可以促進(jìn)β-catenin入核,提取核蛋白,Western blotting結(jié)果表明核內(nèi)β-catenin和TCF-4水平上升,且有劑量依賴效應(yīng),說明Embelin可以激活wnt通路。C3H10T1/2細(xì)胞經(jīng)Embelin處理后,q RT-PCR檢測Wnt通路相關(guān)基因的表達(dá),包括Wnt通路的配體wnt10b、共受體Lrp5、Wnt通路抑制因子sfrp1和Dkk1,發(fā)現(xiàn)Dkk1的m RNA水平明顯下降,說明Embelin下調(diào)Wnt通路抑制因子Dkk1的表達(dá),進(jìn)而激活Wnt通路;3、飼喂高脂飼料組小鼠較飼喂普通飼料組小鼠體重明顯上升,造模成功,而高脂飼料喂養(yǎng)同時(shí)皮下注射Embelin組的體重較高脂同時(shí)注射溶劑組明顯下降,骨密度儀檢測體脂率也表明Embelin能夠明顯降低脂肪占體重的百分比,且有劑量依賴效應(yīng),表明Embelin能夠抑制小鼠肥胖;測定血清中葡萄糖、游離脂肪酸、總膽固醇和甘油三酯水平,結(jié)果表明Embelin組均比溶劑組低,進(jìn)一步說明Embelin能夠抑制小鼠肥胖;4、取各組小鼠脂肪組織制作石蠟切片,HE染色表明,注射Embelin后,小鼠的脂肪細(xì)胞體積變小,說明Embelin能夠在體內(nèi)抑制脂肪組織中脂肪細(xì)胞的肥大;5、提取各組小鼠脂肪組織總RNA,用q RT-PCR檢測成脂標(biāo)記基因和關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá),注射Embelin組a P2、C/EBP-α、PPARγ和Adipsin表達(dá)水平均低于模型組,也說明Embelin能夠在體內(nèi)抑制成脂分化。結(jié)論:1、在體外,Embelin能夠通過下調(diào)Wnt通路抑制因子Dkk1的表達(dá)從而激活wnt通路,抑制骨髓基質(zhì)細(xì)胞成脂分化;2、在體內(nèi),Embelin能夠通過抑制間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化來抑制小鼠肥胖。
[Abstract]:Background : Obesity is a metabolic disease caused by a variety of factors . It is characterized by an increase in the volume of fat cells in the body and an increase in the number of cells , thereby causing an abnormal increase in the percentage of fat mass in the total mass of the body , and excessive deposition of fat around the cryptorchidism , mesenteric and perirenal parts . Obesity can increase the risk of multiple diseases , such as cardiovascular and cerebrovascular diseases , fatty liver , diabetes , etc . embelin is a kind of quinone compound extracted from plants . It has been found that Embelin can inhibit obesity and high blood lipid and oxidative stress caused by obesity . The effects of Embelin on the differentiation of bone marrow stromal cells into adipocytes were determined by using DMSO and Embelin treatment . The expression of adipogenic differentiation marker gene and key transcription factor in adipose tissue of bone marrow stromal cell line C3H10T1 / 2 was detected by means of q RT - PCR . The results showed that Embelin could inhibit the expression of 尾 - catenin in bone marrow stromal cell line C3H10T1 / 2 and ST2 . The results showed that Embelin could inhibit the expression of 尾 - catenin in bone marrow stromal cell line C3H10T1 / 2 and ST2 . Conclusion : In vitro , Embelin can inhibit the fat cells in adipose tissue by downregulating the expression of fat cells in adipose tissue . Conclusion : In vitro , Embelin can inhibit the proliferation of fat cells in adipose tissue . In vivo , Embelin can inhibit the differentiation of adipose cells in bone marrow stromal cells .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2

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本文編號：2085064