本文選題：糖尿病 + 持久性有機(jī)污染物　； 參考：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:糖尿病為第二大慢性非傳染疾病,糖尿病及其急慢性并發(fā)癥嚴(yán)重地影響著糖尿病患者的生活質(zhì)量及壽命,但目前糖尿病的發(fā)病機(jī)制尚不明確,研究表明糖尿病為遺傳因素和環(huán)境因素之間復(fù)雜的相互作用所導(dǎo)致。越來(lái)越多的證據(jù)表明,環(huán)境污染與糖尿病發(fā)病關(guān)系密切。持久性有機(jī)污染物(Persistent Organic Pollutants,POPs)中的多氯聯(lián)苯(Polychlorinated biphenyls,PCBs)、全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulphonate,PFOS)具有生物蓄積性、持久性、高毒性及遠(yuǎn)距離遷移性等特點(diǎn),研究發(fā)現(xiàn)全球范圍內(nèi)能在人體、動(dòng)物、環(huán)境中檢測(cè)到它們的存在,且與多種疾病比如糖尿病、甲狀腺疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系,但持久性有機(jī)污染物中的PCBs、PFOS能否導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生及具體機(jī)制目前仍不明了。糖尿病發(fā)生的中心環(huán)節(jié)是長(zhǎng)期低度炎癥反應(yīng)的發(fā)生,且固有免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)為重要環(huán)節(jié),核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(即NLRP3)為固有免疫反應(yīng)中的一員,被細(xì)胞內(nèi)外的危險(xiǎn)信號(hào)分子通過(guò)多種途徑激活,比如活性氧(ROS)的產(chǎn)生等,進(jìn)而活化半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-1)信號(hào)途徑,促進(jìn)炎癥因子的產(chǎn)生。有研究發(fā)現(xiàn)能在糖尿病患者體內(nèi)檢測(cè)到高濃度的環(huán)境污染物,比如PCBs、PFOS、二VA英、雙酚A等,且也能檢測(cè)到高濃度的炎癥因子,但PCB118、PFOS能否通過(guò)ROS機(jī)制激活胰島β細(xì)胞NLRP3炎癥小體導(dǎo)致胰島β細(xì)胞炎癥反應(yīng),進(jìn)而參與糖尿病的發(fā)生目前尚不清楚。本研究旨在探討持久性有機(jī)污染物中的多氯聯(lián)苯118(pcb118)、全氟辛烷磺酸(pfos)對(duì)小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞中ros、nlrp3炎癥小體信號(hào)分子、炎癥因子表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制。方法:1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象及處理因素:實(shí)驗(yàn)對(duì)象為小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞,體外培養(yǎng)該細(xì)胞,干預(yù)因子為不同濃度的pcb118、pfos,抑制劑為活性氧抑制劑n-乙酰半胱氨酸(nac)。2、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn):使用不同濃度的pcb118(5nmol/l、10nmol/l、20nmol/l、40nmol/l、80nmol/l、160nmol/l、320nmol/l)、pfos(1nmol/l、10nmol/l、100nmol/l、1000nmol/l、10000nmol/l)分別干預(yù)小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞48h及72h,使用cellcountingkit-8(cck-8試劑盒)分別檢測(cè)pcb118、pfos對(duì)該細(xì)胞的毒性作用。3、實(shí)驗(yàn)分組:pcb118干預(yù)時(shí),將小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞分為二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,dmso)溶劑對(duì)照組、不同濃度pcb118組(5nmol/l、10nmol/l、20nmol/l)及pcb118+nac組(于表達(dá)變化最強(qiáng)的濃度組中預(yù)先加入10umol/l的活性氧抑制劑nac抑制活性氧的產(chǎn)生,了解ros在pcb118激活小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞中nlrp3炎癥小體的作用);pfos干預(yù)時(shí),將小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞分為甲醇溶劑對(duì)照組、不同濃度pfos組(1nmol/l、10nmol/l、100nmol/l)及pfos+nac組(于表達(dá)變化最強(qiáng)的濃度組中預(yù)先加入10umol/l的活性氧抑制劑nac抑制活性氧的產(chǎn)生,了解ros在pfos激活小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞中nlrp3炎癥小體的作用)。4、檢測(cè)方法:⑴各組小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)機(jī)隨機(jī)加入不同的作用物培養(yǎng)48h及72h,使用cck-8試劑盒檢測(cè)不同濃度pcb118、pfos對(duì)小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞的毒性作用。⑵各組小鼠胰島β-tc-6細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)機(jī)隨機(jī)加入不同的干預(yù)物培養(yǎng)48h:(1)裝載2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽探針(2',7'-dichlorofluorescindiacetate,dcfh-da),用全光譜分光光度計(jì)檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ros的表達(dá)水平。(2)采用蛋白免疫印跡(western-blot)法檢測(cè)各組nlrp3、pro-caspase-1、caspase-1、pro-il-1β、il-1β蛋白的表達(dá)。(3)取細(xì)胞培養(yǎng)液離心后采用elisa法檢測(cè)il-6、il-18、c-c趨化因子配體2(ccl-2)炎癥因子的表達(dá)水平。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用統(tǒng)計(jì)分析軟件spss17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示,各組內(nèi)比較采用的是方差齊性檢驗(yàn),各組間比較采用的是單因素方差分析,各組間的多重比較采用的是lsd-t方法,檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05,p0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示,pcb118干預(yù)細(xì)胞48h時(shí),各濃度對(duì)細(xì)胞沒(méi)有明顯的毒性,各濃度間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);干預(yù)72h,濃度大于等于80nmol/l時(shí),對(duì)細(xì)胞有明顯毒性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);pfos干預(yù)細(xì)胞48h、72h,濃度為10000nmol/l時(shí),對(duì)細(xì)胞有明顯毒性,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.不同濃度的pcb118、pfos對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞內(nèi)的ros、nlrp3炎癥小體信號(hào)分子表達(dá)的影響:與溶劑對(duì)照組相比,pcb118、pfos均可上調(diào)ros及nlrp3、caspase-1、il-1β蛋白的表達(dá)(p0.05),下調(diào)pro-caspase-1、pro-il-1β蛋白的表達(dá)(p0.05),且呈濃度依賴性。與高濃度的pcb118、pfos組相比,nac預(yù)處理可阻止pcb118、pfos誘導(dǎo)的ros及nlrp3、caspase-1、il-1β蛋白表達(dá)的上調(diào)(p0.05)和pro-caspase-1、pro-il-1β蛋白表達(dá)的下調(diào)(p0.05)。3.與溶劑對(duì)照組相比,pcb118、pfos均可上調(diào)il-6、il-18、ccl-2炎癥因子的表達(dá)(p0.05),nac預(yù)處理可阻止pcb118、pfos誘導(dǎo)的il-6、il-18、ccl-2炎癥因子表達(dá)的上調(diào)(p0.05)。結(jié)論:多氯聯(lián)苯118、全氟辛烷磺酸可通過(guò)活性氧機(jī)制激活胰島β細(xì)胞NLRP3炎癥小體、參與胰島β細(xì)胞炎癥反應(yīng)的發(fā)生。
[Abstract]:Objective : Diabetes mellitus is the second major chronic non - infectious disease , and diabetes mellitus and its acute and chronic complications seriously affect the quality of life and life of diabetic patients . The effects of different concentrations of pcb118 ( 5 nmol / l , 10 nmol / l , 20 nmol / l , 10 nmol / l , 80 nmol / l , 100 nmol / l , 10 nmol / l ) , pfos ( 1 nmol / l , 10 nmol / l ) , pfos ( 1 nmol / l , 10 nmol / l ) , pfos ( 1 nmol / l , 10 nmol / l ) , pfos ( 1 nmol / l , 10 nmol / l ) , pfos ( 1 nmol / l , 10 nmol / l ) , pfos ( 1 nmol / l , 10 nmol / l , 100 nmol / l , 1000 nmol / l , 10000 nmol / l ) on pancreatic 尾 - tc - 6 cells in mice were investigated . ( 1 ) 2 ' , 7 ' - dichlorofluorescein diacetate ( dcfh - da ) was loaded . The expression level of ros in each group was measured by a full spectrum spectrophotometer . ( 2 ) The expression of each group of nlrp3 , pro - caspase - 1 , caspase - 1 , pro - il - 1尾 , il - 1尾 protein was detected by Western - blot . ( 3 ) The expression of IL - 6 , il - 18 , c - c chemokine ligand 2 ( ccl - 2 ) inflammatory factor was detected by enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) . The expression of ccl - 2 inflammatory factor ( p0.05 ) can prevent the up - regulation of the expression of il - 6 , il - 18 , ccl - 2 inflammatory factors induced by pcb118 and pfos ( p . 05 ) . Conclusion : Polychlorinated biphenyl 118 , perfluorooctane sulfonate can activate the inflammatory small body of pancreatic 尾 - cell NLRP3 by active oxygen mechanism and participate in the inflammatory reaction of 尾 - cell of pancreatic island .
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1992832