本文選題：原發(fā)性醛固酮增多癥 + 血管內(nèi)皮細(xì)胞　； 參考：《浙江大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景與目的： 原發(fā)性醛固酮增多癥(簡稱原醛癥)是腎上腺皮質(zhì)病變引起醛固酮分泌增多,導(dǎo)致潴鈉排鉀、體液容量增加,從而抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)的一種疾病,主要表現(xiàn)為低腎素、高血壓伴(或不伴)低血鉀、堿中毒、夜尿增加。原醛癥患者多有中重度難以控制的高血壓,同時其心血管及代謝性并發(fā)癥較原發(fā)性高血壓具有更高的危險性。Apelin是新近發(fā)現(xiàn)的一類小分子生物活性肽,是血管緊張素受體相關(guān)蛋白(angiotensin receptor-like protein J, APJ)的天然配體,其在體內(nèi)具有多種亞型,其中Apelin-13作為亞型之一,具有較強的生物活性。Apelin已被證明具有舒張血管降低血壓,增強心肌收縮力,調(diào)節(jié)體液穩(wěn)態(tài),調(diào)節(jié)胰島素分泌,促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移、血管形成等作用,從而使Apelin/APJ系統(tǒng)有望成為原醛癥合并心血管及代謝性并發(fā)癥的治療新靶點。本研究主要通過體外觀察Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)細(xì)胞功能的損傷及其相關(guān)機制。其中第一部分通過體外實驗觀察Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮對HUVECs增殖及血管成形功能的影響,同時篩選出Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮對HUVECs細(xì)胞功能損傷時表達(dá)水平顯著變化的：mRNA;第二部分觀察Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮促進(jìn)HUVECs衰老的作用并探討血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白在該逆轉(zhuǎn)過程中表達(dá)量的變化及其信號通路,從而為原醛癥并發(fā)癥的預(yù)防及治療提供新的思路。 方法： 第一部分：用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,取第10～15代細(xì)胞用于實驗。醛固酮作用HUVECs24小時后,加或不加Apelin-13繼續(xù)干預(yù)24小時,用MTS試驗檢測HUVECs的增殖、Matrigel基質(zhì)膠檢測HUVECs的血管形成狀況。通過文獻(xiàn)檢索,選取12種內(nèi)皮細(xì)胞血管成形功能相關(guān)mRNA (Angiopoietin-1, Angiopoietin-2, VEGFA, VEGFR-1, VEGFR-2, Tie-2, EGF, FGF-2, eNOS, HO-1, HIF-1α,Sirt-3), qRT-PCR法篩選Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮損傷作用時表達(dá)水平顯著變化的mRNA.同時利用APJ siRNA轉(zhuǎn)染HUVECs從而下調(diào)其細(xì)胞內(nèi)Apelin受體水平,采用MTS試驗,Matrigel基質(zhì)膠檢測HUVECs的增殖和血管成形能力。第二部分：體外培養(yǎng)HUVECs,藥物干預(yù)處理及APJ siRNA轉(zhuǎn)染HUVECs均同第一部分,采用β-半乳糖苷酶染色鑒定衰老細(xì)胞。進(jìn)一步采用Western-Blot檢測內(nèi)皮細(xì)胞衰老功能相關(guān)的蛋白(Sirt-1, eNOS),觀察Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞衰老時上述蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： 第一部分：10nmol/L醛固酮干預(yù)后HUVECs的增殖、血管形成受到抑制,而醛固酮作用24小時后再加入lumol/1Apelin-13繼續(xù)干預(yù)24小時后,HUVECs的增殖、血管成形較醛固酮單獨作用組明顯改善。qRT-PCR法檢測顯示Apelin-13顯著逆轉(zhuǎn)了醛固酮單獨作用時所引起的Ang-1, Ang-2, VEGFR-1、VEGFR-2及Tie-2表達(dá)水平降低的狀態(tài)。進(jìn)一步使用APJ siRNA下調(diào)Apelin受體的表達(dá)可消除Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮對HUVECs增殖和血管形成的抑制作用。 第二部分：同第一部分藥物干預(yù)后,Apelin-13逆轉(zhuǎn)了醛固酮誘導(dǎo)的HUVECs細(xì)胞衰老功能。Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn),Apelin-13逆轉(zhuǎn)了醛固酮對HUVECs細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白Sirt-1, eNOS的下調(diào)作用。 結(jié)論： 第一部分：醛固酮可抑制HUVECs增殖和血管形成能力,而Apelin-13可逆轉(zhuǎn)其對HUVECs增殖和血管成形功能的損傷作用。其中Ang-1、Ang-2、 VEGFR-1、 VEGFR-2、Tie-2在Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮增殖和血管成形功能損傷作用中表達(dá)水平升高,可能在介導(dǎo)Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮對內(nèi)皮細(xì)胞血管形成損傷過程中發(fā)揮重要作用。 第二部分：醛固酮可促進(jìn)HUVECs細(xì)胞的衰老,同樣Apelin-13可逆轉(zhuǎn)其對HUVECs衰老程度的影響。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在蛋白水平上,Sirt-1/eNOS信號通路在Apelin-13逆轉(zhuǎn)醛固酮促衰老作用中具有重要影響。
[Abstract]:Background and Purpose :

Apelin / APJ has been proved to be a kind of new target . Apelin / APJ can be used as one of the subtypes of angiotensin receptor - like protein J ( APJ ) .

Method :

Human umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro by using 1640 medium containing 10 % fetal bovine serum . After 24 hours of treatment with aldosterone , the expression level of Apelin - 1 , Angiopoietin - 2 , VEGFA , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 , Tie - 2 , EGF , FGF - 2 , eNOS , HO - 1 , HIF - 1偽 , S.

Results :

The results showed that the expression of Ang - 1 , Ang - 2 , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 and Tie - 2 were significantly reduced after 24 hours of aldosterone , and the expression level of Ang - 1 , Ang - 2 , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 and Tie - 2 was significantly reduced .

The second part : Apelin - 13 reversed aldosterone - induced senescence - induced apoptosis after drug intervention with the first part . Western - Blot showed that Apelin - 13 reversed the downregulation effect of aldosterone on the senescence - related protein SSIONS - 1 and eNOS .

Conclusion :

The first part : Aldosterone can inhibit the proliferation and the formation of vascular endothelial cells , and Apelin - 13 can reverse its effects on proliferation and vascular forming . The expression level of Ang - 1 , Ang - 2 , VEGFR - 1 , VEGFR - 2 , Tie - 2 in Apelin - 13 reversed aldosterone proliferation and vascular forming function injury may play an important role in mediating the injury of endothelial cells .

The second part : Aldosterone can promote the aging of the cells , and Apelin - 13 can reverse its effect on the degree of aging . Furthermore , it is found that the signaling pathway of Scloser - 1 / eNOS plays an important role in the reversal of aldosterone - induced senescence in Apelin - 13 .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R586.24

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 嚴(yán)江濤,汪道文;原發(fā)性醛固酮增多癥的診療進(jìn)展[J];臨床內(nèi)科雜志;2005年07期

2 吳宏憲;戴秋艷;;Apelin/APJ系統(tǒng)與高血壓及肥胖的聯(lián)系[J];臨床心血管病雜志;2010年06期

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本文編號：1957513