本文關(guān)鍵詞：馬齒莧多糖調(diào)控胰島β細(xì)胞自身胰島素抵抗的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《江西科技師范大學(xué)》 2014年

馬齒莧多糖調(diào)控胰島β細(xì)胞自身胰島素抵抗的機(jī)制研究

吳江濤  

【摘要】：天然藥物資源由于其來源廣、副作用小、價(jià)格低廉、療效相對(duì)穩(wěn)定等特點(diǎn)日益受到人們的關(guān)注。馬齒莧多糖(Portulaca oleracea L. polysaccharides, POPs)是傳統(tǒng)中草藥馬齒莧的主要活性成分之一,具有降糖、調(diào)脂、抗菌消炎、抗氧化等多種功效。國(guó)內(nèi)外研究從馬齒莧多糖的分離、純化、結(jié)構(gòu)解析、生物活性(抗氧化、降糖調(diào)脂)等方面進(jìn)行了報(bào)道。但有關(guān)馬齒莧多糖降糖作用的分子機(jī)理研究尚未見報(bào)道。本論文在前期研究基礎(chǔ)上,從以下幾個(gè)方面分析了馬齒莧多糖抗糖尿病的作用機(jī)理： 1、建立胰島素抵抗模型：以胰島β細(xì)胞(HIT-T15)為研究對(duì)象,以不同濃度的高脂(棕櫚酸)或高糖高脂作為誘導(dǎo)劑,分別誘導(dǎo)1h、4h、8h、24h、48h、72h后,進(jìn)行細(xì)胞生存能力檢測(cè)。確定最佳誘導(dǎo)條件為：棕櫚酸為0.5mol/ml、葡萄糖為33.3mol/ml、處理時(shí)間為24h。 2、檢測(cè)馬齒莧多糖對(duì)胰島p細(xì)胞生存活力的影響：將HIT-T15細(xì)胞(5×104/m1)接種于96孔板,培養(yǎng)24h后,分為空白對(duì)照組、胰島素抵抗模型組、馬齒莧多糖處理組,分別用含馬齒莧多糖(0.01、0.1、1.0mg/m1)的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng),在不同時(shí)間點(diǎn)(2、4、8、24、48、72h)應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法、中性紅攝取(NRU)法、乳酸脫氫酶(LDH)釋放法進(jìn)行細(xì)胞生存活力檢測(cè)。結(jié)果表明,馬齒莧多糖具有抑制高脂或高糖高脂誘導(dǎo)的胰島p細(xì)胞死亡,促進(jìn)胰島p細(xì)胞增殖的作用。 3、馬齒莧多糖對(duì)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)分子靶的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。將HIT-T15細(xì)胞(1×105/m1)接種于培養(yǎng)板,培養(yǎng)24h后,分六個(gè)組：空白對(duì)照組、高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗組、高糖高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗組、馬齒莧多糖處理高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗組、馬齒莧多糖處理高糖高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗組和馬齒莧多糖組,分別用馬齒莧多糖(0.1mg/ml)處理24h后,提取各組細(xì)胞的蛋白質(zhì)和RNA,運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western bloting)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)兩種技術(shù),檢測(cè)與胰島素抵抗相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、c-jun氨基末端激酶(JNK)、胰十二指腸同源盒因子(PDX-1)、PPARr、STAT-5B等靶分子的基因(mRNA)和蛋白質(zhì)表達(dá),從分子水平闡明馬齒莧多糖調(diào)控胰島p細(xì)胞自身胰島素抵抗的分子機(jī)制。結(jié)果顯示,高脂和高糖高脂處理HIT-T15細(xì)胞,可抑制胰島素抵抗相關(guān)信號(hào)通路中的IR、IRS-2、PI-3K、AKT、GLUT-1、 GLUT-2抑制PDX-1、PPARr、STAT-5B等靶分子的表達(dá),并激活c-jun氨基末端激酶(JNK)信號(hào)通路。當(dāng)用馬齒莧多糖處理后,可明顯上調(diào)IR、IRS-2、PI-3K、 AKT、GLUT-1、GLUT-2、PDX-1、PPARr、STAT-5B等靶分子的蛋白和mRNA的表達(dá),下調(diào)c-jun氨基末端激酶(JNK)通路中JNK1、P38、ERK、RAS蛋白的表達(dá)。 本論文從建立胰島p細(xì)胞自身胰島素抵抗模型入手,在細(xì)胞分子水平探討了馬齒莧多糖對(duì)胰島素信號(hào)通路中相關(guān)分子靶的mRNA和蛋白表達(dá)的調(diào)控,綜合分析馬齒莧多糖保護(hù)胰島p細(xì)胞、降低血糖的細(xì)胞分子調(diào)控機(jī)制,以期發(fā)現(xiàn)新的馬齒莧多糖降糖作用靶點(diǎn),為開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新藥物奠定理論基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：江西科技師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

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