本文選題：睪酮 + 巨噬細胞極化��； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學》2017年博士論文

【摘要】：隨著社會的進步與生活條件的改善,肥胖已經(jīng)成為全球化健康問題。已有研究證明,睪酮作為體內(nèi)重要的雄性激素廣泛參與多種生物學過程,男性血清睪酮水平與脂代謝密切相關,血清睪酮偏低是導致男性肥胖的一大誘因。巨噬細胞是機體內(nèi)重要的免疫細胞,它可在局部微環(huán)境的誘導下活化形成具有不同表型和功能的亞細胞型,這被稱為巨噬細胞極化。經(jīng)典的M1型極化以高表達促炎因子為特征,而M2型極化與過敏、免疫調(diào)節(jié)等作用相關,M2型極化分為3種亞型,本文主要以典型的M2a型極化為研究對象。已有研究證明,脂肪組織中的巨噬細胞極化表型的平衡與肥胖有著緊密的聯(lián)系,但其中機制尚不明確。因此,本課題旨在探究睪酮與脂肪細胞分化和巨噬細胞極化之間的關聯(lián),為雄性激素與肥胖的研究提供理論基礎。本課題首先在體外以小鼠3T3-L1前脂肪細胞為研究對象,在誘導分化過程中給予不同濃度的睪酮(0-10-5 mol/L)處理或含有睪酮(10-7 mol/L)的誘導后M1/M2極化條件培養(yǎng)基處理,通過油紅O染色、RT-qPCR檢測脂肪細胞標志基因脂聯(lián)素,瘦素,Cebpb,Ppara,Il6,Tnfa表達水平以測定前脂細胞的分化程度。以小鼠RAW264.7巨噬細胞為研究對象,以LPS(1mg/mL)或IL-4(20 ng/mL)誘導其分別向M1與M2a方向極化,同時給予不同濃度的睪酮刺激,通過RT-qPCR檢測M1型極化標志基因Nos2,Tnfa,Il6,Il1b與M2a型極化標志基因Arg1,Il10,Mgl2,Mrc1的mRNA相對表達水平,從而檢測睪酮對巨噬細胞極化的作用。通過Western blot方法檢測Akt蛋白S~(473)位點磷酸化水平,從而探究睪酮在巨噬細胞內(nèi)活化的信號通路。本研究發(fā)現(xiàn),睪酮并不直接影響3T3-L1前脂肪細胞分化,而是可通過誘導極化后的M1型巨噬細胞條件培養(yǎng)基顯著抑制前脂細胞分化,而含有或不含有睪酮的M2a極化條件培養(yǎng)基對3T3-L1細胞分化的影響并不顯著。RAW264.7細胞處理結(jié)果顯示,睪酮并不直接引起RAW264.7巨噬細胞極化,但是睪酮可抑制LPS誘導的M1極化和促進IL-4誘導的M2a極化,并呈濃度依賴性。通過使用雄激素拮抗劑(HF)、雄激素受體抑制劑(ASC-J9)、Gai蛋白抑制劑(PTX)、Akt1/2-siRNA進行細胞信號轉(zhuǎn)導的研究,結(jié)果表明,睪酮對巨噬細胞極化的調(diào)節(jié)作用是通過Gai蛋白和Akt蛋白的磷酸化產(chǎn)生的,而不是通過經(jīng)典的雄激素受體通路。在體內(nèi),本課題通過外源注射黃體生成素受體(LHR)多肽降低小鼠血清睪酮水平。結(jié)果顯示,低血清睪酮小鼠附睪白色脂肪組織增大。石蠟切片結(jié)果顯示,LHR多肽組脂肪細胞較對照組相比顯著增大。免疫組化結(jié)果顯示,肥胖的脂肪組織中有較多的M1型巨噬細胞,而其他對照組的脂肪組織中則是以M2a型巨噬細胞為主,且數(shù)量較少。而注射睪酮增補劑丙酸睪酮注射液(TPI)能逆轉(zhuǎn)這一結(jié)果。本研究首次在體外證明了睪酮對巨噬細胞極化有顯著的調(diào)節(jié)作用。這種作用主要是通過Gai蛋白與Akt蛋白通路產(chǎn)生,而不是經(jīng)典的雄激素受體。睪酮對脂肪細胞分化的影響是通過調(diào)節(jié)巨噬細胞極化而間接產(chǎn)生的。本研究成功建立LHR多肽降低小鼠血清睪酮模型,從此模型中證明低血清睪酮可導致小鼠附睪白色脂肪組織增大,并伴有M1型巨噬細胞極化。
[Abstract]:With the progress of society and the improvement of living conditions, obesity has become a global health problem. It has been proved that testosterone is widely involved in many biological processes as an important androgen in the body. The serum testosterone level of men is closely related to lipid metabolism. Low serum testosterone is a major cause of obesity in men. Macrophages are the main cause of obesity. The important immune cells in the body can be activated by local microenvironment to form subcellular types with different phenotypes and functions. This is called macrophage polarization. The classic M1 polarization is characterized by high expression of proinflammatory factors, and M2 polarization is related to allergy and immunoregulation. The M2 type polarization is divided into 3 subtypes. This paper is the main article. With typical M2 A-type polarization, studies have shown that the balance of the polarization phenotype of macrophages in adipose tissue is closely related to obesity, but the mechanism is not yet clear. Therefore, the aim of this study is to explore the relationship between testosterone and adipocyte differentiation and macrophage polarization, and the study of androgens and obesity. For the theoretical basis. First of all, in vitro, the mouse 3T3-L1 preadipocytes were taken as the research object. In the induction of differentiation, different concentrations of testosterone (0-10-5 mol/L) were treated with or containing testosterone (10-7 mol/L) induced M1/M2 polarization condition culture medium treatment. The fat cell marker gene adiponectin was detected by RT-qPCR, and the fat cell marker gene adiponectin was detected by RT-qPCR. The expression level of Cebpb, Ppara, Il6, and Tnfa was used to determine the degree of differentiation of the anterior fat cells. The mice RAW264.7 macrophages were used as the research object, and they were induced by LPS (1mg/mL) or IL-4 (20 ng/mL) to polarize them to M1 and M2a direction respectively, and were given different concentrations of testosterone. Polarization marker gene Arg1, Il10, Mgl2, Mrc1 mRNA relative expression level, thus detecting the effect of testosterone on macrophage polarization. The Western blot method was used to detect the phosphorylation level of S~ (473) site of Akt protein, thus exploring the signaling pathway of testosterone activation in macrophages. This study found that testosterone does not directly affect the preadipocytes before 3T3-L1. Differentiation, but can significantly inhibit the differentiation of preadipocyte by induced polarization M1 macrophage conditioned medium, and the effect of M2a polarization conditioned medium containing or without testosterone on 3T3-L1 cell differentiation is not significant.RAW264.7 cell processing results show that testosterone does not directly cause RAW264.7 macrophage polarization, but testosterone is available Inhibiting the M1 polarization induced by LPS and promoting IL-4 induced M2a polarization are concentration dependent. By using the androgen receptor inhibitor (HF), the androgen receptor inhibitor (ASC-J9), the Gai protein inhibitor (PTX), and Akt1/2-siRNA to carry out the cell signal transduction. The results show that the regulation of testosterone on the polarization of macrophages is through Gai protein and Akt. The phosphorylation of the protein was produced rather than through the classical androgenic receptor pathway. In the body, the serum testosterone level of mice was reduced by exogenous injection of the luteinizing hormone receptor (LHR) peptide. The results showed that the white adipose tissue in the epididymis of the low serum testosterone mice increased. The results of paraffin section showed that the LHR polypeptide group of adipocytes was compared to the control. The results of the group were significantly increased. The results of immunohistochemical staining showed that there were more M1 type macrophages in fat tissue, while the other control groups were mainly M2a type macrophages in the adipose tissue, and the number was small. And the testosterone supplementing agent Testosterone Propionate Injection (TPI) could reverse this result. It has a significant regulatory effect on the polarization of macrophages. This effect is produced mainly through the Gai protein and the Akt protein pathway, rather than the classical androgen receptor. The effect of testosterone on the differentiation of adipocytes is produced indirectly by regulating the polarization of macrophages. This study successfully established the LHR polypeptide to reduce the serum testosterone model in mice. It is shown that low serum testosterone can increase the white adipose tissue of epididymis in mice and increase the polarization of M1 type macrophages.

【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R589.2

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