本文選題：代謝組學(xué) + NAFLD�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景:代謝組學(xué)(metabolomics)作為系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)分支,能夠用于分析生物體內(nèi)的內(nèi)外源性的代謝產(chǎn)物的變化,近年來屢被用于發(fā)現(xiàn)疾病代謝通路的改變,尋找診斷疾病的標(biāo)志物,揭示研究對(duì)象所處的生理和病理狀態(tài)。相關(guān)代謝組學(xué)技術(shù),例如氣相色譜、液相色譜或色質(zhì)聯(lián)用方法等,也常用于氨基酸、脂質(zhì)等小分子物質(zhì)的檢測(cè)。近年來,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver,NAFLD)在世界各國的發(fā)病率不斷提高。雖然該病常合并肥胖、2型糖尿病等代謝綜合征,但是值得注意的是,該病在非肥胖人群中也有較高的發(fā)病率。此病的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,各種診斷手段都有其弊端,且無有效的治療藥物。因此,尋找該病的診斷標(biāo)志物,分析代謝通路的改變,探討其發(fā)病機(jī)制,具有十分重要的意義。本論文主要進(jìn)行兩方面的研究,詳述如下。目的:1.基于超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(Ultra performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)研究平臺(tái),利用非肥胖的NAFLD患者和年齡、體重指數(shù)(Body mass index,BMI)相匹配的健康對(duì)照人群的血清,進(jìn)行非靶標(biāo)的代謝組學(xué)研究,篩選兩組間的差異性代謝產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)可以做為NAFLD另外一種特殊診斷手段的代謝物,探討與疾病相關(guān)的可能的發(fā)病機(jī)制,為該病的治療提供些許思路。2.利用氣相色譜質(zhì)譜(gas chromatography mass spectrometry,GC-MS)衍生化法對(duì)生物樣本中的非極性氨基酸進(jìn)行定量檢測(cè);探討疾病組與正常對(duì)照組中非極性氨基酸的差異及其意義。方法:1.本研究利用超高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC/Q-TOF-MS)的平臺(tái),應(yīng)用代謝組學(xué)的方法,結(jié)合現(xiàn)代分析方法,研究NAFLD患者(n=24)和健康對(duì)照組(n=22)之間的內(nèi)源性代謝物發(fā)生的變化。采用軟件Marker View v1.2.1對(duì)實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行提取和歸一化處理,運(yùn)用Metaboanalyst3.0軟件做主成分分析(Principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判別分析(Orthogonal partial least-squares discriminant analysis,OPLS-DA)。根據(jù)SIMCA-P13.0軟件分析中的標(biāo)量投影重要性(Variable importance in projection,VIP)值,結(jié)合單變量統(tǒng)計(jì)分析中的P值,對(duì)NAFLD患者和健康對(duì)照人群差異性離子進(jìn)行選擇,并且進(jìn)行鑒定。利用Metaboanalyst3.0軟件對(duì)鑒定出的差異性代謝物質(zhì)進(jìn)行代謝通路的分析,采用受試者工作曲線(Receiver operating characteristic,ROC)對(duì)代謝物的臨床診斷效能進(jìn)行評(píng)價(jià)。2.取100μL羊水上清液,加入甲醇去蛋白后提取上層清液吹干,進(jìn)行MSTFA衍生化,利用GC-MS檢測(cè)并分析檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果:1.非肥胖的NAFLD患者和健康對(duì)照組代謝物的表達(dá)模式,在PCA和OPLS-DA分析模型中均能很好的區(qū)分開來。在兩組之間鑒定出了17種具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的代謝物,這些物質(zhì)包括類固醇激素及其衍生物,脂肪酸酯,羧酸及其衍生物,苯及其衍生物,尿酸等。與健康對(duì)照組相比,NAFLD患者代謝物水平升高的有:亮氨酸、正亮氨酸,鵝去氧膽酸,�；悄懰�,左旋肉堿,花生四烯酸,脯氨酸,高龍膽酸,尿酸,肌酸酐,7,8-Dehydroastaxanthianthin,羥基丁酸,谷氨酸。比正常對(duì)照組下降的物質(zhì)有棕櫚油酸,棕櫚酰胺,3-苯氧基苯甲酸,甜菜堿。同時(shí),非肥胖的NAFLD患者的代謝通路亦發(fā)生了異常,這其中包括:丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代謝通路,花生四烯酸酸代謝通路,精氨酸-脯氨酸代謝通路,谷氨酸鹽代謝通路。2.該方法具有良好的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度以及回收率。在最優(yōu)化的檢測(cè)條件下,被檢測(cè)氨基酸最低檢出限為0.12~0.38 mg/L,線性范圍為0.5~10 mg/L,添加回收率在91%~104%之間,日內(nèi)及日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在0.84%~9.33%之間。用建立的方法對(duì)17例疾病組和13名正常組孕婦的羊水樣本進(jìn)行測(cè)定,統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明,疾病組孕婦羊水中亮氨酸和異亮氨酸含量顯著降低(P0.01),其余3種氨基酸水平無明顯差異。結(jié)論:1.利用代謝組學(xué)的研究方法,本研究發(fā)現(xiàn)非肥胖的NALFD患者體內(nèi)存在著多種內(nèi)源性代謝物的改變。本研究獲得的結(jié)果對(duì)于我們深入理解非肥胖NAFLD的發(fā)病機(jī)制有重要的意義。同時(shí),對(duì)臨床工作者在該病的診斷及治療提供參考依據(jù)。2.本方法經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,可作為羊水中氨基酸含量的測(cè)定方法,具有良好的應(yīng)用前景;亮氨酸的減少可能參與了先天性畸形的發(fā)生。
[Abstract]:鑳屾櫙:浠ｈ阿緇勫(metabolomics)浣滀負(fù)緋葷粺鐢熺墿瀛︾殑涓，

本文編號(hào)：1818242