本文選題：二甲雙胍 + 3T3-L1脂肪前體細胞��； 參考：《山東大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的：(1)研究二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖過程的影響；(2)研究二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化過程的影響；通過上述研究,探討二甲雙胍對脂肪細胞的作用,以期明確二甲雙胍對脂肪前體細胞增殖和分化過程的干預(yù)是否為二甲雙胍減輕體重的機制之一,進一步為肥胖的治療尋找新的理論依據(jù)。方法：(1)3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖的測定：①用不同濃度的二甲雙胍(0.05mmol/L, 0.5mmol/L,5mmol/L,10 mmol/L,20 mmol/L,50mmol/L)對體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖過程進行干預(yù)。②應(yīng)用倒置顯微鏡對細胞形態(tài)進行觀察,應(yīng)用MTT法測定二甲雙胍細胞增殖的影響并與對照組(二甲雙胍濃度為Ommol/L)進行對照。③應(yīng)用酶標(biāo)儀在OD570nm處測量各組光密度值,以此來判斷不同濃度二甲雙胍對細胞增殖的影響。(2)3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化的測定：①用不同濃度的二甲雙胍(0.05mmol/L, 0.5mmol/L,5mmol/L)對體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化過程進行干預(yù)。②應(yīng)用倒置顯微鏡對細胞形態(tài)進行觀察,油紅O染色法鑒定脂肪細胞的分化程度,并與陰性對照組(未加成脂誘導(dǎo)液)和陽性對照組(加成脂誘導(dǎo)液,二甲雙胍濃度為Ommol/L)進行對照。③應(yīng)用酶標(biāo)儀在OD510nm處測量各組的光密度值,以此來判斷不同濃度二甲雙胍對細胞分化的影響。結(jié)果：(1)二甲雙胍對細胞增殖的影響：顯微鏡下觀察細胞形態(tài)：在顯微鏡下觀察貼壁后的3T3-L1脂肪前體細胞,細胞成長條梭形,類似成纖維細胞。體外培養(yǎng)24小時,0.05mmol/L和0.5 mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比,鏡下細胞形態(tài)和密度無明顯差異,而5 mmol/L,10 mmol/L,20 mmol/L和50mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比,細胞形態(tài)發(fā)生改變(變形、破壞、凋亡小體形成),數(shù)量明顯減少。且為濃度依賴性,濃度越高,細胞破壞越嚴(yán)重,細胞數(shù)量。繼續(xù)培養(yǎng)至72h,0.05 mmol/L和0.5 mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比,鏡下細胞形態(tài)和密度亦無明顯差異,而5 mmol/L,10 mmol/L,20 mmol/L和50mmol/L的二甲雙胍組和對照組相比,隨著濃度的增加細胞破壞越嚴(yán)重,細胞數(shù)量越少。測量各組光密度值：(D0.05mmol/L(OD值：2.0±0.09)和0.5 mmol/L(OD值：1.99±0.09)二甲雙胍和對照組(OD值：2.14±0.14)比較,均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。②5mmol/L(OD值：1.53±0.20)、10mmol/L(OD值：1.29±0.14)、20mmol/L (OD值：1.03±0.12)和50 mmol/L二甲雙胍(OD值：0.70±0.13)和對照組(OD值：2.14±0.14)比較,均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。③5mmol/L(OD值：1.53±0.20)、1 Ommol/L(OD值：1.29±0.14)、20mmol/L(OD值：1.03±0.12)和50 mmol/L二甲雙胍(OD值：0.70±0.13)各組之間比較,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且濃度越高,光密度值越小。(2)二甲雙胍對細胞分化的影響顯微鏡下觀察細胞形態(tài)(油紅0染色)：①陰性對照組細胞仍呈成梭形或橢圓形,油紅0染色無明顯著色。②陽性對照組可見80-90%的細胞細胞內(nèi)有脂滴聚積,油紅0染色著色明顯。③0.05 mmol/L和0.5 mmol/L的二甲雙胍組亦可見80-90%的呈脂肪細胞表型,細胞內(nèi)有脂滴聚積,油紅0染色著色明顯,與陽性對照組相似。④5 mmol/L的二甲雙胍組脂肪細胞表型數(shù)量較對照組明顯減少,油紅0染色著色較對照組明顯減少。測量各組光密度值：①陽性對照組(OD值：0.61±0.060)、0.05mmol/L(OD值：0.59±0.055)、0.5 mmol/L(OD值：0.59±0.047)和5 mmol/L(OD值：0.42±0.027)和陰性對照組比較(OD值：0.34±0.017)均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。②0.05mmol/L(OD值：0.59±0.055)、0.5 mmol/L(OD值：0.589±0.047)二甲雙胍和陽性對照組(OD值：0.61±0.060)比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③5 mmol/L (OD值：0.42±0.027)二甲雙胍和陽性對照組(OD值：0.61±0.060)比較,有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。結(jié)論：(1) 0.05,0.5 mmol/L的二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖無影響；大于5mmol/L的二甲雙胍明顯抑制3T3-L1脂肪前體細胞細胞增殖,且隨著藥物濃度的增加抑制作用增強；大于5 mmol/L的二甲雙胍可能有促進3T3-L1脂肪前體細胞細胞凋亡的作用。(2) 0.05、0.5 mmol/L的二甲雙胍對3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化過程無影響；5mmol/L的二甲雙胍抑制3T3-L1脂肪前體細胞細胞分化。
[Abstract]:Objective: (1) to study the effect of metformin on the proliferation of 3T3-L1 fat precursor cells; (2) to study the effect of metformin on the differentiation of 3T3-L1 adipose progenitor cells, and to explore the effect of metformin on the adipocytes in order to clarify the effect of two metformin on the proliferation and differentiation of fat precursor cells. Whether it is one of the mechanisms of metformin reducing weight, and finding a new theoretical basis for the treatment of obesity. Methods: (1) the proliferation of 3T3-L1 fat precursor cells: (1) different concentrations of metformin (0.05mmol/L, 0.5mmol/L, 5mmol/L, 10 mmol/L, 20 mmol/L, 50mmol/L) were used for the in vitro culture of 3T3-L1 fat precursor cells The cell morphology was observed by inverted microscope. The effect of metformin cell proliferation was measured by MTT method and compared with the control group (metformin concentration of Ommol/L). (3) the light density values of each group were measured at OD570nm by the enzyme labeling instrument, so as to determine the increase of metformin at different concentrations to cells. Colonization. (2) determination of cell differentiation in 3T3-L1 fat precursor cells: (1) the differentiation process of 3T3-L1 adipose progenitor cells cultured in vitro was intervened with different concentrations of metformin (0.05mmol/L, 0.5mmol/L, 5mmol/L). Second, the cell morphology was observed by inverted microscope, and the differentiation of adipocytes was identified by oil red O staining. Degree, and compared with negative control group (without adipogenic inducer) and positive control group (addition of lipid inducer, metformin concentration of Ommol/L). (3) the effects of different concentrations of metformin on cell differentiation were measured at OD510nm at different concentrations. Results: (1) the effect of metformin on cell proliferation The morphology of the cells was observed under the microscope: the 3T3-L1 fat precursor cells after the wall were observed under the microscope, the cells grew spindle shaped and similar to fibroblasts. The cells were cultured for 24 hours in vitro. Compared with the control group, the morphology and density of the 0.05mmol/L and 0.5 mmol/L metformin groups were not significantly different, and 5 mmol/L, 10 mmol/L, 20 mmol/L and 50m. In the metformin group of mol/L, the cell morphology changes (deformation, destruction, and the formation of apoptotic bodies), and the number of cells decreased significantly. And the concentration dependent, the higher the concentration, the more serious the cell destruction, the number of cells. The cell morphology and density of the cells under the microscope were compared with the control group compared with the 0.05 mmol/L and 0.5 mmol/L metformin groups. There was no significant difference. Compared with the 5 mmol/L, 10 mmol/L, 20 mmol/L and 50mmol/L metformin groups, the more serious the cell destruction was, the less the cell number. The values of the light density were measured (D0.05mmol/L (OD: 2 + 0.09) and 0.5 mmol/L (OD: 1.99 + 0.09) and the control group (o value: 2.14 + 0.14) ratio. There was no statistical significance (P0.05). 2 5mmol/L (OD: 1.53 + 0.20), 10mmol/L (OD: 1.29 + 0.14), 20mmol/L (o value: 1.03 + 0.12) and 50 mmol/L metformin (o value: 0.70 + 0.13) and comparison group (o value: 2.14 + 0.14), there were significant statistical significance (P0.001), 5mmol/L (OD: 1.53 + 0.20) and 1 Ommol/L (OD value: 0.12 Ommol/L) 4), 20mmol/L (OD: 1.03 + 0.12) and 50 mmol/L metformin (OD: 0.70 + 0.13) had statistical significance (P0.05), and the higher the concentration, the smaller the light density. (2) the effect of metformin on cell differentiation was observed under microscope (oil red 0 staining): (1) the cells in the negative control group were still spindle shaped or oval, There was no obvious coloring in the oil red 0 staining. (2) the cells in the positive control group showed the accumulation of lipid droplets in the cell cells of 80-90% and the coloring of oil red 0. (3) the phenotype of 80-90% was also found in the group of 0.05 mmol/L and 0.5 mmol/L in metformin, and the lipid droplets were accumulated in the cells, and the oil red 0 staining was obvious, similar to the positive control group. (4) two of 5 mmol/L. The number of adipocyte phenotypes in metformin group was significantly lower than that of the control group, and the color of oil red 0 coloring was significantly lower than that of the control group. The values of light density were measured in each group: (1) positive control group (o value: 0.61 + 0.060), 0.05mmol/L (OD value: 0.59 + 0.055), 0.5 mmol/L (OD value: 0.59 + 0.047) and 5 mmol/L (o value: 0.42 + 0.027) and negative control group (o value) 0.34 + 0.017) had significant statistical significance (P0.001). 0.05mmol/L (OD: 0.59 + 0.055), 0.5 mmol/L (OD: 0.589 + 0.047) metformin and positive control group (o value: 0.61 + 0.060) had no statistical significance (P0.05). (3) 5 mmol/L (o value: 0.42 + 0.027) metformin and positive control group (OD: 0.61 + 0.060), there were Significant statistical significance (P0.001). Conclusion: (1) metformin in 0.05,0.5 mmol/L has no effect on the proliferation of 3T3-L1 adipose progenitor cells, and metformin, which is greater than 5mmol/L, obviously inhibits the proliferation of 3T3-L1 fat precursor cells and increases with the increase of drug concentration; metformin, which is greater than 5 mmol/L, may be promoted. The effect of 3T3-L1 fat precursor cell apoptosis. (2) metformin, 0.05,0.5 mmol/L, has no effect on the differentiation of 3T3-L1 adipose progenitor cells; 5mmol/L metformin inhibits the differentiation of 3T3-L1 fat precursor cells.

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R589.2

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本文編號：1813985