本文選題：糖尿病視網(wǎng)膜病變　切入點(diǎn)：血-視網(wǎng)膜屏障　出處：《青島大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對早期糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠視網(wǎng)膜緊密連接蛋白及炎癥因子的影響來探索其對BRB損傷的保護(hù)作用。方法:組織塊貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUCMSC),流式細(xì)胞學(xué)方法鑒定。將健康清潔級雄性SD大鼠70只,隨機(jī)分為正常對照組15只,糖尿病(DM)組55只。經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素STZ(60mg/kg)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,并定期觀察體重和血糖變化。DM成模后第1、3、5月行各組伊文思藍(lán)(EB)灌注視網(wǎng)膜鋪片,糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)模型成立后將剩余DM組大鼠分為DR組、DR+PBS組、DR+HUCMSC組。DR+HUCMSC組經(jīng)尾靜脈注射1ml第四代HUCMSC,DR+PBS組經(jīng)尾靜脈注射1ml PBS,DR組不作任何處理,觀察1月后全部處死。伊文思藍(lán)視網(wǎng)膜鋪片觀察各組血管形態(tài)及通透性變化;免疫組織化學(xué)、Western-blot檢測血管緊密連接蛋白Occludin的表達(dá);ELISA檢測視網(wǎng)膜血管通透性相關(guān)的炎癥因子TNF-α、ICAM-1及VEGF的含量。結(jié)果:1.從人臍帶中可分離培養(yǎng)干細(xì)胞(MSC),細(xì)胞表面表達(dá)CD73,CD90等干細(xì)胞標(biāo)志物,而CD34,CD45及HLA-DR表達(dá)為陰性。2.EB灌注視網(wǎng)膜血管鋪片:正常組血管走行良好,DM5月時,血管走行迂曲、僵硬,管腔粗細(xì)不均,可見EB滲漏、微血管瘤及無血管灌注區(qū)形成。HUCMSC干預(yù)后1個月,血管滲漏減輕。DR組血管滲漏量較正常組增加(P0.05),HUCMSC干預(yù)后,可降低DR大鼠的血管通透性,與DR組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.免疫組織化學(xué)染色及Western-blot檢測Occludin蛋白:正常組大鼠視網(wǎng)膜微血管管壁有棕黃色環(huán)狀著染,DR組及DR+PBS組視網(wǎng)膜微血管棕黃色顆粒變淺,范圍減少,DR+HUCMSC組視網(wǎng)膜微血管壁顏色較DR組加深。Western-blot結(jié)果顯示DR及DR+PBS兩組Occludin蛋白量明顯下調(diào),較正常組視網(wǎng)膜組織中的Occludin蛋白的表達(dá)量明顯減少(P0.05),MSC干預(yù)后,Occludin蛋白表達(dá)量較兩組均增加,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.ELISA結(jié)果:在DR及DR+PBS兩組中,視網(wǎng)膜中的VEGF、ICAM-1、TNF-α三種因子水平出現(xiàn)不同程度的上調(diào);DR+HUCMSC組視網(wǎng)膜中的VEGF、ICAM-1、TNF-α水平均出現(xiàn)下調(diào),與DR組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。且ICAM-1與VEGF的表達(dá)具有正相關(guān)。結(jié)論:1.從人臍帶中可以分離出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,且細(xì)胞純度較高,形態(tài)均一,成長梭形,表達(dá)干細(xì)胞特異性抗原標(biāo)志,體外擴(kuò)增能力強(qiáng)。2.DM成模5個月,可以誘導(dǎo)出明顯的早期DR血管病變模型,出現(xiàn)微血管瘤及熒光素滲漏。3.尾靜脈注射人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可通過增加緊密連接蛋白Occludin的水平來減少血視網(wǎng)膜屏障的破壞。4.尾靜脈注射人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可通過減少視網(wǎng)膜中炎癥因子TNF-α、ICAM-1及VEGF的過表達(dá)進(jìn)一步保護(hù)血視網(wǎng)膜屏障免受損傷。
[Abstract]:Aim: to investigate the protective effect of human umbilical cord mesenchymal stem cells on BRB damage by observing the effects of human umbilical cord mesenchymal stem cells on retinal tight junction protein and inflammatory factors in rats with early diabetic retinopathy.Methods: human umbilical cord mesenchymal stem cells (HUCMSCN) were isolated and identified by flow cytometry.Seventy healthy and clean male SD rats were randomly divided into control group (n = 15) and DM group (n = 55).Diabetic rats were induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) 60 mg / kg. The changes of body weight and blood glucose were observed regularly.After the diabetic retinopathy model was established, the remaining DM rats were divided into Dr group Dr PBS group Dr HUCMSC group. Dr HUCMSC group received 1ml through caudal vein injection of 1ml fourth generation HUCMSC PBS group without any treatment. All rats were sacrificed after one month.The changes of vascular morphology and permeability in each group were observed by Evans blue retina preparation, and the expression of vascular tight junction protein (Occludin) was detected by immunohistochemistry and the content of TNF- 偽 and VEGF in retinal vascular permeability related inflammation factor (TNF- 偽) was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa).The result is 1: 1.Stem cells could be isolated and cultured from human umbilical cord. Stem cell markers such as CD73 and CD90 were expressed on the cell surface, while CD34 + CD45 and HLA-DR were negative. 2. EB perfused retinal blood vessels: after 5 months of good blood flow, the vessels in the normal group were tortuous and stiff.The lumen thickness was uneven and EB leakage could be seen. One month after the intervention of microhemangioma and non-vascular perfusion zone, the vascular leakage in the group of .DR decreased the vascular permeability of Dr rats after the intervention of HUCMSC increased than that of the normal group.The difference between Dr group and Dr group was statistically significant (P 0.05. 3).Immunohistochemical staining and Western-blot were used to detect Occludin protein: the retinal microvessels of normal rats were stained with brownish yellow rings in Dr group and Dr PBS group, and the retinal microvessel brown yellow granules were shallower in normal group.The color of retinal microvessel wall in Dr HUCMSC group was deeper than that in Dr group. The results of Western-blot showed that the amount of Occludin protein in Dr and Dr PBS groups was significantly down-regulated.Compared with the normal group, the expression of Occludin protein in the retina of the normal group was significantly reduced. After the intervention of P0.05 Occludin, the expression of Occludin protein was increased in both groups, and the difference was statistically significant. 4. Elisa results: in Dr and Dr PBS groups, there was no significant difference between the two groups.The levels of VEGFU ICAM-1 TNF- 偽 in retina increased in varying degrees in Dr HUCMSC group. The levels of VEGFU ICAM-1 TNF- 偽 in retina were all down-regulated, and the difference was statistically significant compared with Dr group (P 0.05).There was a positive correlation between ICAM-1 and VEGF expression.Conclusion 1.Human umbilical cord mesenchymal stem cells could be isolated from human umbilical cord, with high purity, uniform morphology, fusiform growth and expression of stem cell specific antigen markers.Early Dr angiopathy model can be induced, microhemangioma and fluorescein leakage. 3.Caudal vein injection of human umbilical cord mesenchymal stem cells can reduce the damage of blood-retinal barrier by increasing the level of tight junction protein Occludin.Caudal vein injection of human umbilical cord mesenchymal stem cells can further protect the blood-retinal barrier from damage by reducing the overexpression of TNF- 偽 -ICAM-1 and VEGF in the retina.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R774.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 仵敏娟,劉善榮,劉厚奇;間充質(zhì)干細(xì)胞特性與應(yīng)用前景[J];生命科學(xué);2004年03期

2 本刊編輯部;;我國首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫在天津落成[J];中國藥業(yè);2006年07期

3 張鑫;趙桂秋;;間充質(zhì)干細(xì)胞在眼科領(lǐng)域的研究與應(yīng)用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年06期

4 史春夢;;間充質(zhì)干細(xì)胞表述中需要注意的幾個問題[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年14期

5 瞿海龍;邊劍飛;張冰;王穎;周英蓮;;間充質(zhì)干細(xì)胞臨床應(yīng)用的前景與困惑[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2011年05期

6 郭子寬;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用中的幾個問題[J];中國組織工程研究;2012年01期

7 李炳堯;武曉云;吳巖;;間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng):從實(shí)驗(yàn)室到臨床[J];中國組織工程研究;2013年14期

8 吳實(shí);鄧列華;;皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞在促進(jìn)皮膚愈合中的作用[J];實(shí)用皮膚病學(xué)雜志;2013年03期

9 吳清法,王立生,吳祖澤;間充質(zhì)干細(xì)胞的來源及臨床應(yīng)用[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2002年03期

10 黃定強(qiáng);間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊);2003年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳可;王丁;韓之波;朱德林;韓忠朝;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外發(fā)揮免疫活性的研究[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

2 金明順;張毅;賈秀芬;周燕華;閆妍;劉慧雯;;小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及多潛能分化的研究[A];中國解剖學(xué)會第十一屆全國組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

3 李爭艷;劉楊;翟麗麗;楊迷玲;王立峰;;間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤發(fā)展過程中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

4 張彥;李尚珠;;間充質(zhì)干細(xì)胞在血管工程中的機(jī)制及應(yīng)用[A];2009全國中西醫(yī)結(jié)合周圍血管疾病學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2009年

5 石玉;戴\戎;;周期性拉應(yīng)力對間充質(zhì)干細(xì)胞分化影響的研究[A];第九屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

6 黎嬌;朱爭艷;杜智;駱瑩;王鵬;高英堂;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌物對肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第30次學(xué)術(shù)年會暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2010年

7 譚遠(yuǎn)超;Kevin;姜紅江;黃相杰;周紀(jì)平;;間充質(zhì)干細(xì)胞在骨傷疾病治療中的應(yīng)用[A];首屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)交流會暨專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2011年

8 唐佩弦;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用前景[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

9 戴育成;;間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和應(yīng)用[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

10 胡琳莉;王昕榮;錢坤;李舟;楊薇;朱桂金;;小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 滿學(xué)杰;天津?yàn)I海新區(qū)建最大間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學(xué)杰;津昂賽打造間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質(zhì)干細(xì)胞研究又見新方法[N];健康報(bào);2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所 曹楷;間充質(zhì)干細(xì)胞：干細(xì)胞中的孫悟空[N];上�？萍紙�(bào);2014年

5 記者　陳建強(qiáng);首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫在津建成[N];光明日報(bào);2006年

6 記者　馮國梧;細(xì)胞產(chǎn)品國家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日報(bào);2007年

7 實(shí)習(xí)生 劉霞;間充質(zhì)干細(xì)胞有望用于面部整形[N];科技日報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 王新佳;我國“原始間充質(zhì)干細(xì)胞”注射液進(jìn)入臨床研究[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

9 馮國梧;全球首個臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫規(guī)模化運(yùn)營[N];科技日報(bào);2008年

10 劉瑩清;全球首個臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫泰達(dá)規(guī)模運(yùn)營[N];北方經(jīng)濟(jì)時報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王皓;五指山小型豬OCT-4、SOX-2基因在骨髓間充質(zhì)與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中的過表達(dá)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 孔德曉;間充質(zhì)干細(xì)胞及胰島素分泌細(xì)胞治療糖尿病的臨床及應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];山東大學(xué);2015年

3 董苑;SDF-1復(fù)合PDPBB的構(gòu)建及對間充質(zhì)干細(xì)胞趨化影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王磊;誘導(dǎo)胎盤來源間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

5 房賀;連接黏附分子A在促進(jìn)MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 陳潔;間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對急性肺損傷小鼠的影響及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

7 許婷;轉(zhuǎn)化生長因子β1在蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘中對間充質(zhì)干細(xì)胞募集遷移的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

8 周雅麗;攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對胃癌化療效果的影響及其機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

9 沈舒寧;CKIP-1負(fù)調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 朱鎮(zhèn);外源性骨礦化蛋白1轉(zhuǎn)染人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞及其蛋白質(zhì)組研究[D];吉林大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李超;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對其纖毛長度的影響[D];河北大學(xué);2015年

2 林濤;殼聚糖水凝膠復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 彭龍英;心肌營養(yǎng)素1促進(jìn)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化存活及PI3K/Akt信號通路機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 喬曉慧;酸性環(huán)境對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 張紅霞;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定及其對人肺癌細(xì)胞惡性表型的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

6 顧立超;BTK抑制劑對間充質(zhì)干細(xì)胞miR-21的調(diào)節(jié)作用[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

7 王文杰;鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

8 張猛;血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響[D];石河子大學(xué);2015年

9 馬麗媛;利用MyoD基因誘導(dǎo)綿羊臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 宋維文;MicroRNA-133誘導(dǎo)綿羊間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號：1717503