本文選題：糖尿病　切入點(diǎn)：心肌缺血再灌注　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:探討糖尿病大鼠熱痛閾值改變以及支配心臟感覺神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)和P物質(zhì)(SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)表達(dá)的改變及其在心肌缺血/再灌注病理性刺激作用下變化特征。方法:(1)II型糖尿病大鼠模型的建立。180-200g雄性SD大鼠16只采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)附加小劑量鏈脲佐菌素(STZ,30mg/kg)腹腔注射制作2型糖尿病大鼠(DM組)模型。另外取16只同質(zhì)動(dòng)物采用普通飼料喂養(yǎng)作為正常對(duì)照組(C組)。每周測(cè)量一次大鼠的體重和空腹血糖。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)的方法分別測(cè)量飼養(yǎng)四周和終末的血清胰島素含量和血清甘油三酯含量。(2)II型糖尿病誘發(fā)大鼠感覺神經(jīng)退化及支配心臟感覺神經(jīng)細(xì)胞對(duì)心肌缺血/再灌注神經(jīng)反應(yīng)性的病理改變。實(shí)驗(yàn)中每周測(cè)量一次大鼠的甩尾潛伏期。在動(dòng)物注射STZ10周后將DM組和C組又分別隨機(jī)分為缺血再灌注組(I/R組)和假手術(shù)組(Sham組)兩個(gè)亞組,通過結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法缺血30分鐘再灌注120分鐘制造缺血/再灌注模型,取DM組及C組動(dòng)物上胸段(T1-T5)背根神經(jīng)節(jié),采用免疫熒光技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量、分類及SP和CGRP的表達(dá)進(jìn)行分析。(3)Ⅱ型糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠心肌缺血/再灌注對(duì)心肌組織內(nèi)感覺神經(jīng)肽SP、CGRP表達(dá)的影響。在動(dòng)物注射STZ10周后將DM組和C組又分別隨機(jī)分為缺血再灌注組(I/R組)和假手術(shù)組(Sham組)兩個(gè)亞組,采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法制備心臟缺血再灌注模型。采用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)左室缺血心肌組織內(nèi)的SP和CGRP的表達(dá)進(jìn)行定位和定量研究,對(duì)血清內(nèi)的SP和CGRP的表達(dá)進(jìn)行定量研究。(4)II型糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠心肌缺血/再灌注后去甲腎上腺素及β1-腎上腺素能受體在心肌表達(dá)的改變。實(shí)驗(yàn)分組同(2)和(3),應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)的方法分別對(duì)血清和左室缺血心肌組織內(nèi)的去甲腎上腺素(NE)進(jìn)行定量分析,應(yīng)用Western Blot的方法測(cè)量β1受體的表達(dá)水平,觀察糖尿病對(duì)大鼠心肌組織內(nèi)交感神經(jīng)反應(yīng)活性的影響。結(jié)果:(1)糖尿病組經(jīng)過四周高糖高脂飼料喂養(yǎng)體重比正常對(duì)照組有增加的趨勢(shì),并且出現(xiàn)胰島素含量增高(P0.05)和胰島素敏感性降低(P0.05)。注射STZ后10周內(nèi)糖尿病動(dòng)物體重較對(duì)照組顯著減輕(P0.05)。糖尿病組空腹血糖較對(duì)照組顯著升高(P0.01)。DM組的血清胰島素含量較對(duì)照組降低(P0.05)。DM組的血清甘油三酯含量較對(duì)照組雖然有增高的趨勢(shì),但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)糖尿病組甩尾時(shí)間較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(P0.01)。DRG內(nèi)SP和CGRP陽性神經(jīng)元豐富,糖尿病大鼠的SP和CGRP陽性表達(dá)明顯減弱(P0.05),糖尿病大鼠的CGRP表達(dá)陽性神經(jīng)細(xì)胞減少46%,小細(xì)胞減少70%,SP表達(dá)陽性神經(jīng)細(xì)胞減少62%,小細(xì)胞減少59%;SP和CGRP免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)集中在脊髓背角淺層(Ⅰ、Ⅱ?qū)?;正常缺血再灌注組(C-I/R)與正常假手術(shù)組(C-SHAM)比較:DRG內(nèi)CGRP含量明顯上升(P=0.001)。糖尿病缺血再灌注組(D-I/R)與糖尿病假手術(shù)組(D-SHAM)比較:DRG內(nèi)CGRP含量明顯上升(P=0.001)。糖尿病假手術(shù)組(D-SHAM)與正常假手術(shù)組(C-SHAM)比較:DRG內(nèi)CGRP含量明顯下調(diào)(P=0.001)。糖尿病缺血再灌注組(D-I/R)與正常缺血再灌注組(C-I/R)比較:DRG內(nèi)CGRP和SP都明顯下調(diào)(P0.01)。(3)心臟內(nèi)CGRP和SP免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維多見于心外膜和心肌層,尤其是圍繞血管周圍及血管內(nèi)皮有強(qiáng)陽性反應(yīng),糖尿病大鼠CGRP和SP免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維明顯減少。正常缺血再灌注組(C-I/R)與正常假手術(shù)組(C-SHAM)比較:左室缺血心肌組織和血清內(nèi)CGRP和SP均明顯上調(diào)(P0.05)。糖尿病缺血再灌注組(D-I/R)與糖尿病假手術(shù)組(D-SHAM)比較:左室缺血心肌組織和血清內(nèi)CGRP明顯上調(diào)(P0.05)。糖尿病假手術(shù)組(D-SHAM)與正常假手術(shù)組(C-SHAM)比較:左室缺血心肌組織和血清內(nèi)CGRP和SP均明顯下調(diào)(P0.05)。糖尿病缺血再灌注組(D-I/R)與正常缺血再灌注組(C-I/R)比較:左室缺血心肌組織和血清內(nèi)CGRP和SP均明顯下調(diào)(P0.05)。(4)左心室缺血心肌組織NE含量:無論是DM組內(nèi)還是對(duì)照組內(nèi)Sham組均較I/R組有增高趨勢(shì),但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,DM組和對(duì)照組的含量比較也沒有差別。血清NE含量:DM組和對(duì)照組的比較有一定的降低趨勢(shì),但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但各組內(nèi)I/R組均較Sham組有顯著增高(P0.05)。Western Blot的方法測(cè)量β1受體的表達(dá)情況:C-SHAM比C-I/R的表達(dá)量增高(P0.05)。D-SHAM比D-I/R也有增高趨勢(shì),但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DM組和對(duì)照組比較,有降低趨勢(shì),但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:(1)單純應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng),糖尿病組的大鼠體重顯著的增加,并且出現(xiàn)了一定程度的胰島素含量的增高和胰島素敏感性的降低;在此基礎(chǔ)上注射小劑量鏈脲佐菌素,誘發(fā)血糖顯著增高。飼養(yǎng)過程中,糖尿病組的大鼠出現(xiàn)了類似人類2型糖尿病三多一少的典型表現(xiàn),并且有毛發(fā)凌亂和精神萎靡的病態(tài)特征。注射STZ10周后,DM組的胰島素相對(duì)缺乏,甘油三酯有增高的趨勢(shì)。(2)糖尿病誘發(fā)顯著感覺神經(jīng)功能退化;糖尿病動(dòng)物在心肌缺/血再灌注中支配心臟的感覺神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)CGRP和SP顯著低于非糖尿病組,提示神經(jīng)細(xì)胞的反應(yīng)性減退。(3)糖尿病心臟內(nèi)的感覺神經(jīng)也出現(xiàn)退化,對(duì)缺血/再灌注狀態(tài)下心肌組織內(nèi)感覺神經(jīng)肽CGRP和SP的表達(dá)水平顯著低于非糖尿病動(dòng)物,該差異提示CGRP、SP下調(diào)可能參與了糖尿病大鼠心臟缺血再灌注損傷的病理生理學(xué)過程。(4)糖尿病對(duì)心臟β1腎上腺素能受體水平有所影響。其生物學(xué)意義有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉娜;感覺神經(jīng)肽對(duì)缺血后處理保護(hù)作用的影響及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

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1 劉濤;降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)大鼠急性心肌缺血后心肌β1受體表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：1657235