本文關(guān)鍵詞：高脂環(huán)境下大鼠BMSCs成骨分化過程中Wnt通路相關(guān)因子的表達變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山東大學》 2015年

高脂環(huán)境下大鼠BMSCs成骨分化過程中Wnt通路相關(guān)因子的表達變化

李慧垠  

【摘要】：背景：高脂血癥與骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率日益增加,眾多研究表明兩者聯(lián)系密切,然而兩者之間的具體發(fā)病機制仍不清楚。Wnt信號通路為近年來骨代謝研究熱點。目的：觀察高脂環(huán)境下大鼠骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)成骨分化過程中Wnt信號通路相關(guān)因子的表達變化,以期探討高脂血癥導致骨質(zhì)疏松的可能機制。方法：Wistar大鼠BMSCs進行培養(yǎng)及傳代,采用第三代細胞用于實驗。待第三代細胞融匯至80%后,實驗分為兩組：高脂組、對照組,每組有三個樣本,兩組細胞向成骨誘導期間倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化；成骨誘導5天、7天、14天堿性磷酸酶(ALP)活性檢測觀察兩組BMSCs早期成骨細胞分化情況；28天茜素紅染色觀察細胞外基質(zhì)礦化能力；成骨誘導14天油紅O染色觀察兩組BMSCs成脂分化情況；成骨誘導培養(yǎng)7天、14天、21天采用RT-PCR檢測兩組細胞Wnt信號通路相關(guān)因子Wnt3a、LRP5、β-catenin、 sFRP1 mRNA的表達,以及脂肪代謝因子PPAR-y mRNA的表達；同時7天、14天、21天Western Bolt檢測兩組細胞β-catenin的蛋白表達量。SPSS17.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：BMSCs培養(yǎng)到第三代,細胞形態(tài)趨于一致。ALP活性檢測顯示其活性隨時間延長而增大,但增長速度減慢,7天、14天高脂組活性均低于對照組。茜素紅染色結(jié)果顯示對照組鈣結(jié)節(jié)量形成多于高脂組。油紅O結(jié)果顯示高脂組中紅染的脂肪細胞多于對照組。RT-PCR結(jié)果顯示在7天時sFRP1、PPAR-γ表達量對照組低于高脂組,差異有顯著意義(p0.01),14天時Wnt3a、β-catenin表達量對照組高于高脂組(p0.05), sFRP1、PPAR-y表達量對照組低于高脂組,差異有意義(p0.01),21天時LRP5、β-catenin表達量對照組高于高脂組,有統(tǒng)計學意義(p0.01)。Western Blot結(jié)果顯示,在第14天、21天高脂組較對照組β-catenin蛋白的表達明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結(jié)論：1.高脂環(huán)境下BMSCs向成骨細胞分化減少。2.不同時間段Wnt信號通路相關(guān)因子的表達變化不一致,成骨分化早期sFRP1起作用,成骨分化中期Wnt3a起作用,β-catenin在成骨分化中末期發(fā)揮效應(yīng),LRP5在成骨分化末期變化顯著,其具體原因需進一步探討。3.Wnt信號通路參與BMSCs成骨細胞分化過程中,其相關(guān)因子之間聯(lián)系密切,高脂環(huán)境下,Wnt信號通路中的Wnt3a、LRP5、p-catenin受到一定程度的抑制,sFRP1以及PPAR-y激活,這也許是高脂血癥導致骨質(zhì)疏松的原因之一。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R783;R580;R589.2
【目錄】：

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本文編號：162523