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Kisspeptin參與多嚢卵巢綜合征患者顆粒細(xì)胞孕激素分泌的調(diào)節(jié)

發(fā)布時(shí)間:2016-11-02 14:44

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《鄭州大學(xué)》 2015年

Kisspeptin參與多嚢卵巢綜合征患者顆粒細(xì)胞孕激素分泌的調(diào)節(jié)

郭威  

【摘要】:背景多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是一種常見的內(nèi)分泌疾病,其特點(diǎn)是慢性不排卵、雄激素水平過高和卵巢多囊樣改變,還可能伴有高胰島素血癥、胰島素抵抗、早期2型糖尿病、血脂紊亂、心血管疾病和不孕。PCOS的病理性改變包括促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone,Gn RH)的分泌脈沖頻率增加、性腺和腎上腺來源的非甾體激素水平升高、月經(jīng)不調(diào)、高胰島素血癥等。GPR54(G蛋白偶聯(lián)受體54,其編碼基因?yàn)镵ISS-1R)是視紫紅質(zhì)家族成員,2003年de Roux和Seminara同時(shí)發(fā)現(xiàn)了該膜蛋白對(duì)下丘腦-垂體-性腺軸起到關(guān)鍵的調(diào)控作用。Kisspeptin是GPR54的配體之一,由KISS-1基因編碼合成。該神經(jīng)肽在下丘腦與GPR54結(jié)合后作為重要信號(hào)引發(fā)Gn RH峰,被認(rèn)為是哺乳動(dòng)物中引起促性腺激素分泌的最有效刺激物。Young等發(fā)現(xiàn)PCOS患者kisspeptin的血液基礎(chǔ)水平高于正常女性,由此推測kisspeptin可能參與PCOS的病理過程。S.A.Yilmaz等還發(fā)現(xiàn)kisspeptin基礎(chǔ)水平與血清總睪酮、黃體生成素(luteinizing hormone,LH)、游離雄激素指數(shù)和改良Ferriman-Gallwey(m FG)評(píng)分分?jǐn)?shù)呈顯著性正相關(guān)。以往關(guān)于kisspeptin的研究多集中在中樞水平上參與PCOS的病理過程,在性腺水平上的研究還較少。本實(shí)驗(yàn)比較了PCOS患者和正常女性卵泡微環(huán)境中kisspeptin表達(dá)水平的差異,同時(shí)研究了kisspeptin對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌功能及相關(guān)基因的影響,推測該多肽可能通過自分泌和旁分泌方式參與PCOS患者卵巢微環(huán)境病理改變過程。目的1.比較PCOS患者和正常女性卵泡液中kisspeptin的蛋白水平以及KISS-1和KISS-1R在顆粒細(xì)胞的表達(dá)豐度,初步探討PCOS患者kisspeptin在蛋白和基因水平上發(fā)生的改變。2.探索kisspeptin及其受體拮抗劑p234分別對(duì)顆粒細(xì)胞系和黃素化顆粒細(xì)胞分泌激素的影響以及對(duì)相關(guān)內(nèi)分泌和代謝基因的影響。方法1.ELISA法檢測正常女性和PCOS患者取卵當(dāng)天卵泡液中kisspeptin的水平。2.RT-PCR檢測正常女性和PCOS患者卵泡液中分離出的顆粒細(xì)胞中KISS-1和KISS-1R m RNA的表達(dá)。3.CCK-8法檢測不同濃度kisspeptin處理后顆粒細(xì)胞的生長狀態(tài)。4.ELISA檢測kisspeptin處理后對(duì)顆粒細(xì)胞分泌雌激素和孕激素的影響。5.RT-PCR檢測kisspeptin和p234處理后顆粒細(xì)胞內(nèi)分泌和代謝相關(guān)基因表達(dá)水平的變化。6.免疫熒光染色技術(shù)檢測GPR54蛋白在顆粒細(xì)胞上的表達(dá)。結(jié)果1.PCOS患者取卵日卵泡液kisspeptin水平顯著高于正常女性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與體重正常的女性相比,PCOS患者顆粒細(xì)胞KISS-1 m RNA水平較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;KISS1R m RNA在PCOS組有升高趨勢,但無顯著性差異。3.正常女性中顆粒細(xì)胞KISS-1基因的表達(dá)水平與身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)正相關(guān)(r=0.743,P0.01),PCOS患者KISS-1 m RNA的表達(dá)與BMI無相關(guān)性。4.不同水平的kisspeptin對(duì)顆粒細(xì)胞系的生長影響不同:高濃度的kisspeptin抑制細(xì)胞增殖,低濃度的kisspeptin促進(jìn)細(xì)胞增殖。5.Kisspeptin處理顆粒細(xì)胞系后,顆粒細(xì)胞雌激素和孕激素的分泌無明顯改變;kisspeptin處理黃素化的顆粒細(xì)胞后,顆粒細(xì)胞分泌雌激素和孕激素增加。6.Kisspeptin分別以600ng/ml和1600ng/ml的刺激濃度處理顆粒細(xì)胞后,St AR m RNA、KISS-1R、β-HSD、LDLR、Adponectin m RNA在處理組和對(duì)照組均無顯著差異。拮抗劑p234以1600ng/ml的刺激濃度處理顆粒細(xì)胞后,St AR、β-HSD、P450scc、P450arom和LHCG m RNA的表達(dá)和無刺激物對(duì)照組相比均有下降趨勢,但差異不顯著(P0.05),Adipo-R m RNA的表達(dá)升高,且差異有顯著性(P0.05),Adponectin、和FSHR m RNA的表達(dá)有升高趨勢,但差異不顯著(P0.05)。7.Kisspeptin的受體蛋白GPR54在顆粒細(xì)胞上表達(dá),定位于細(xì)胞膜上。結(jié)論Kisspeptin可能同時(shí)通過生殖內(nèi)分泌和能量代謝兩種機(jī)制參與PCOS患者的卵巢微環(huán)境的病理改變過程。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R711.75
【目錄】:

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