發(fā)布時間：2018-03-16 16:23

  本文選題：CXC趨化因子受體4　切入點：間充質(zhì)干細胞　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:應(yīng)用經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染后過表達CXCR4的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)通過玻璃體腔注射移植到糖尿病大鼠體內(nèi)后,觀察過表達CXCR4的BMSCs是否具有更好的治療作用,并探討其治療糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變可能的機制。方法:1.原代分離、培養(yǎng)BMSCs,并對其細胞免疫表型進行鑒定。2.利用基因重組方法構(gòu)建慢病毒載體,將CXCR4目的基因轉(zhuǎn)染至第3代BMSCs,并進行免疫熒光、Western-Blot、q-PCR檢測目的基因轉(zhuǎn)染后CXCR4基因在BMSCs中表達的情況;通過MTS細胞增殖實驗檢測BMSCs的增殖能力,觀察轉(zhuǎn)染CXCR4基因后BMSCs增殖能力是否有變化。通過transwell小室進行BMSCs的趨化實驗檢測,觀察在SDF-1的誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)染CXCR4基因后BMSCs遷移能力是否增強。通過流式細胞儀對BMSCs凋亡程度檢查,觀察轉(zhuǎn)染CXCR4基因后BMSCs凋亡程度是否有變化。3.將過表達CXCR4的第3代BMSCs移植到STZ誘導(dǎo)4w的糖尿病大鼠玻璃體腔體內(nèi),檢測各組移植前及移植后1w、2w、3w大鼠血糖、體重等大體情況。實驗動物分組:正常對照組(正常組)、糖尿病大鼠對照組(Blank組)、磷酸鹽緩沖液治療組(PBS組)、注射未經(jīng)處理BMSCs治療組(native組)、注射GFP病毒感染BMSCs治療組(GFP組)、注射CXCR4-GFP病毒感染BMSCs治療組(CXCR4組)。造模成功后進行干預(yù)治療,其中PBS組、native組、GFP組、CXCR4組分別給予PBS、BMSCs、GFP-BMSCs、CXCR4-GFP-BMSCs玻璃體腔注射治療,正常對照組和Blank組不予特殊治療。注射后1w、2w、3w觀察各組視網(wǎng)膜石蠟切片HE染色病理組織學(xué)變化,western-blotting和免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠視網(wǎng)膜組織中Rhodopsin、NSE及炎癥因子IL-6、TNF-α蛋白表達變化,統(tǒng)計對比后得出結(jié)論。結(jié)果:1.從大鼠骨髓中易分離培養(yǎng)出BMSCs,細胞純度高、形態(tài)均一且具有典型MSC形態(tài)特征,表達MSC特異抗原標(biāo)志,體外擴增能力強且能保持其低分化狀態(tài)和多向分化潛能;2.通過慢病毒轉(zhuǎn)染后,可過表達CXCR4基因。同時在MTS增殖能力檢測試驗中發(fā)現(xiàn),過表達CXCR4的BMSCs較正常的BMSCs和未轉(zhuǎn)染目的基因的GFP-BMSCs細胞增殖能力沒有明顯差異(p0.05)。在transwell趨化實驗中,在SDF-1誘導(dǎo)下過表達CXCR4的BMSCs較正常的BMSCs和未轉(zhuǎn)染目的基因的GFP-BMSCs細胞遷移能力有明顯提高(p0.05)。通過流式細胞儀對細胞凋亡程度的檢查,發(fā)現(xiàn)過表達CXCR4的BMSCs較正常的BMSCs和未轉(zhuǎn)染目的基因的GFP-BMSCs細胞凋亡程度沒有明顯差異(p0.05)。3.和對照組相比,玻璃體腔移植CXCR4-BMSCs后視網(wǎng)膜炎癥程度明顯減輕;并且視網(wǎng)膜組織中Rhodopsin、NSE蛋白表達明顯升高,炎癥因子IL-6、TNF-α蛋白表達明顯降低(P0.05)。結(jié)論:1、本研究在國內(nèi)外首次采用過表達CXCR4基因的BMSCs治療糖尿病大鼠模型,發(fā)現(xiàn)通過慢病毒轉(zhuǎn)染過表達CXCR4的BMSCs其趨化、歸巢能力明顯增強,從而達到最大化的發(fā)揮外源性MSCs的治療作用。2、過表達CXCR4的BMSCs較普通BMSCs能更好的減輕糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變炎癥反應(yīng),而且推斷其可以誘導(dǎo)視網(wǎng)膜出現(xiàn)相關(guān)蛋白的表達,從而更好的發(fā)揮對視網(wǎng)膜損傷的修復(fù)作用。
[Abstract]:Purpose: To study the expression of CXCR4 after lentivirus transfection of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) by intravitreal injection of transplanted into diabetic rats, observed the therapeutic effect whether the expression of CXCR4 BMSCs is better, and to explore the possible treatment of diabetic retinopathy in rats. Methods: the mechanism 1. primary cultured BMSCs, separation, and the immunophenotype of.2. by using the method of identification of recombinant lentiviral vectors of CXCR4 gene transfection to the third generation of BMSCs, and immunofluorescence, Western-Blot, expression of CXCR4 gene in BMSCs transfected with q-PCR gene detection purposes after the experiment; the proliferation of MTS cells to detect the proliferation of BMSCs, observed after CXCR4 gene transfection BMSCs proliferation ability is changing. Chemotaxis assays were performed for detection of BMSCs by Transwell assay, observed in SDF-1 induced with CXCR4 gene After the migration ability of BMSCs is enhanced. Through the examination of the BMSCs degree of apoptosis by flow cytometry, observe the transfection of CXCR4 gene after BMSCs apoptosis whether there are changes in.3. over expressed CXCR4 third glass cavity generation BMSCs transplanted to STZ 4W induced diabetic rats were detected before and after transplantation, graft 1W, 2W. 3W rats blood glucose, body weight and general situation. Animal groups: normal control group (normal group), diabetic rats control group (group Blank), phosphate buffer treatment group (PBS group), untreated BMSCs injection treatment group (native group), injection of GFP virus infection in BMSCs treatment group (GFP group injection of CXCR4-GFP virus infection), BMSCs treatment group (group CXCR4) were treated. After the modeling, PBS group, native group, GFP group, CXCR4 group were given PBS, BMSCs, GFP-BMSCs, CXCR4-GFP-BMSCs intravitreal injection, normal control group and Blank group were not special The treatment. After injection of 1W, 2W, 3W were observed in retinal paraffin section HE staining histopathological changes, Rhodopsin were detected in rat retinal tissue Western-blotting and immunohistochemistry, NSE and inflammatory factor IL-6, expression of TNF- protein, statistical comparison of the results. Results: 1. from rat bone marrow in isolated BMSCs cells, high purity, uniform shape and has the typical characteristic of MSC, the expression of markers of MSC specific antigen, in vitro amplification ability and can maintain its low state of differentiation and differentiation; 2. by lentivirus transfection, expression of CXCR4 gene can be found in the MTS. At the same time the proliferation test, the expression of CXCR4 BMSCs compared to the normal BMSCs and there was no significant difference between the proliferative capacity of GFP-BMSCs cells without transfection of target gene (P0.05). In Transwell chemotaxis, induced by SDF-1 overexpression of CXCR4 is BMSCs Often BMSCs and GFP-BMSCs gene transfected cell migration ability has improved significantly (P0.05). The degree of apoptosis by flow cytometry examination found that overexpression of GFP-BMSCs apoptosis CXCR4 BMSCs compared to the normal BMSCs and untransfected gene were not significantly different compared to.3. (P0.05) and the control group vitreous inflammation, retinal transplantation significantly reduced after CXCR4-BMSCs; and Rhodopsin in retinal tissue, expression of NSE protein in IL-6, inflammatory cytokines, expression of TNF- protein decreased significantly (P0.05). Conclusion: 1. For the first time in this paper using BMSCs treatment of diabetic rats and expression of CXCR4 gene, discovered by slow transfection over expression of CXCR4 BMSCs and its chemotaxis and homing ability was enhanced, so as to maximize the therapeutic effects of exogenous MSCs.2, overexpression of CXCR4 BMSCs compared with ordinary BMSCs It can better reduce the inflammatory reaction of diabetic retinopathy, and infer that it can induce the expression of related proteins in retina, so as to better play the role of retinal damage repair.

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R774.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐堯;糖尿病──21世紀(jì)困擾發(fā)展中國家的流行病[J];鐵道醫(yī)學(xué);1995年05期

2 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;1998年10期

3 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;1998年01期

4 仝小林;;糖尿病9問(上)[J];藥物與人;2007年03期

5 王秋月,劉國良;生活習(xí)慣與糖尿病[J];醫(yī)師進修雜志;2000年09期

6 陳廣耀;抗糖尿病中藥開發(fā)前景展望[J];中國新藥雜志;2000年07期

7 太田康晴,莊祥云;糖尿病[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年08期

8 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年06期

9 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年08期

10 ;糖尿病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年11期

相關(guān)會議論文 前10條

1 吳東方;莊躍宏;陳秀芳;趙麗娜;楊曉東;唐茂林;;胰島素依賴型糖尿病對大鼠隨意皮瓣存活能力的影響[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

2 崔瑾;韓姣姣;李鳳翱;李鳳翱;湯紹芳;劉萍;邱明才;張鵬;;1,25-二羥維生素D3對糖尿病大鼠肺臟病變的保護作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 鄭濱珠;袁鳳山;楊潤橋;;自體干細胞激活療法治療糖尿病大鼠過程中血細胞及生化改變[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

4 劉銅華;呂仁和;高彥彬;;中醫(yī)藥防治糖尿病及并發(fā)癥的作用途徑[A];糖尿病（消渴�。┲嗅t(yī)診治薈萃——全國第五次中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會論文集[C];1999年

5 石鳳英;王堯;;靈芝對糖尿病大鼠腎臟形態(tài)學(xué)及微量白蛋白尿的作用[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第三次康復(fù)治療學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2002年

6 陳名道;李榮英;邵莉;;糖尿病飲食治療的若干進展[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第九次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

7 仝小林;李洪皎;;糖絡(luò)并重治療2型糖尿病[A];第九次全國中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

8 李筱榮;李艷;劉巨平;袁佳琴;;糖尿病大鼠血—視網(wǎng)膜屏障損傷的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

9 楊毅;陳江華;王晶晶;秦嶺;;雷帕霉素對糖尿病大鼠腎臟組織增殖和肥大的抑制作用[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

10 祁少海;劉坡;舒斌;謝舉臨;徐盈斌;黃勇;毛任翔;劉旭盛;;不同深度糖尿病大鼠燙傷模型的制備[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 郭賽珊　梁曉春 潘明政;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病慢性并發(fā)癥可顯著改善癥狀[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

2 本報記者 王樂羊;中西醫(yī)結(jié)合防治糖尿病大有可為[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

3 北京協(xié)和醫(yī)院 梁曉春;對中醫(yī)治糖尿病并發(fā)癥研究的思考[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

4 劉燕玲;肥胖是糖尿病的源頭[N];健康報;2006年

5 仝小林;糖尿病慢性并發(fā)癥論治[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

6 汪敏;糖尿病皮膚易損元兇找到[N];衛(wèi)生與生活報;2003年

7 林蘭;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病的前景[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

8 北京協(xié)和醫(yī)院中醫(yī)科主任 梁曉春;糖尿病周圍神經(jīng)病變的中西醫(yī)治療進展[N];中國醫(yī)藥報;2009年

9 本報記者 劉艷芳;糖尿病干預(yù)不能忽視抗氧化[N];中國食品報;2012年

10 譚小月;糖尿病與腎病關(guān)系研究的新進展[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王健;CXC趨化因子受體4轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞治療糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

2 朱明;糖尿病中補體活化對間充質(zhì)干細胞存活的影響及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2017年

3 馮偉偉;蘋果酸鉻對2型糖尿病大鼠的降血糖活性、作用機制及安全性初探[D];江蘇大學(xué);2015年

4 劉宇;糖尿病來源的骨髓間充質(zhì)干細胞治療心肌梗死的相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李維辛;GLP-1受體激動劑治療糖尿病的循證評價和對糖尿病大鼠胃動力影響的機制研究[D];蘭州大學(xué);2012年

6 田麗;糖尿病周圍神經(jīng)病運動纖維的早期評價[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

7 柳忠豪;糖尿病對口腔種植體骨整合影響的作用機制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 李波;飽和富氫液對糖尿病神經(jīng)病變的保護作用及機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

9 米佳;Vaspin調(diào)控糖尿病炎癥通路及苦酸通調(diào)法的干預(yù)機制研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 林宣佑;從SCAP/SREBP脂代謝信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑探討苦酸通調(diào)方調(diào)控2型糖尿病胰島素抵抗的作用機制[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 田寶明;低血糖指數(shù)掛面的研制及其對糖尿病大鼠糖脂代謝影響的研究[D];西南大學(xué);2015年

2 黃瓊;姜黃素對糖尿病大鼠肺組織損傷的保護作用及其可能機制[D];湖北科技學(xué)院;2015年

3 褚淑蕾;PI3k-Akt信號通路在2型糖尿病大鼠易發(fā)心房顫動中的介導(dǎo)作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 石鷹;二膦酸鹽對糖尿病大鼠下頜骨骨折愈合影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 鄭嫦;CNP對Ach引起的糖尿病大鼠胃平滑肌收縮增強的影響及IGF-1的干預(yù)效應(yīng)[D];延邊大學(xué);2015年

6 李寧;益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠大血管NF-κB表達的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王婉秋;辛伐他汀對2型糖尿病動脈硬化大鼠血漿VEGF、TGF-β1及CTRP3水平的影響研究[D];石河子大學(xué);2015年

8 宋倩;2型糖尿病患者血清TLR-4水平與骨密度及影響因素關(guān)系研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 王麗霞;TLR4及相關(guān)炎癥因子在糖尿病大鼠心臟、肝臟和腎臟中的表達[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 孫雪培;極長鏈脂肪酸與2型糖尿病大鼠腦Aβ生成的關(guān)系研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1620704