本文選題：內(nèi)皮集落形成細(xì)胞　切入點(diǎn)：利那魯肽　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景及目的近年來糖尿病的發(fā)病率不斷攀升,糖尿病血管并發(fā)癥已嚴(yán)重威脅到糖尿病患者的生活質(zhì)量。研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)干細(xì)胞,替代、修復(fù)損傷細(xì)胞或者改變細(xì)胞生物學(xué)行為從而治療或改善糖尿病血管并發(fā)癥有著廣泛的治療前景。內(nèi)皮集落形成細(xì)胞(ECFC)作為內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的一個(gè)亞型,在修復(fù)血管損傷、促進(jìn)血管新生方面有著重要的作用。然而,在高糖情況下,ECFC的增殖、遷移、成管能力都有不同程度的損傷,但其具體機(jī)制尚不明確。最新的研究顯示,利那魯肽能夠顯著降低2型糖尿病患者的心血管患病風(fēng)險(xiǎn),其在降糖、減輕體重等以外的作用機(jī)制還有待深入研究。因此,我們選擇近年研究提示生物學(xué)活性更強(qiáng)的ECFC為對象,體外構(gòu)建高糖模型,從檢測ECFC的增殖、衰老、遷移、成管入手,探究其改變規(guī)律與沉默信息調(diào)節(jié)因子(Sirtuins)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和血管生成素(Angiogenin)蛋白表達(dá)的關(guān)系;同時(shí)給予合適濃度利那魯肽干預(yù),探究利那魯肽是否能通過Sirt1、VEGF、血管生成素調(diào)節(jié)ECFC的增殖、衰老、遷移、成管能力。研究方法實(shí)驗(yàn)首先采集健康成人外周血,利用密度梯度離心法分離獲取人外周血中的單個(gè)核細(xì)胞,采用EBM-2全套培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)出ECFC,并傳代培養(yǎng)。分三組處理細(xì)胞,即正糖組(NG 5.5mmol/L D-葡萄糖×6d),高糖組(HG 30mmol/L D-葡萄糖×6d),滲透壓組(OSM5.5mmol/L D-葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇×6d)。采用Ed U實(shí)驗(yàn)、β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)檢測、Transwell實(shí)驗(yàn)、成管實(shí)驗(yàn)分別檢測三組細(xì)胞的增殖、衰老、遷移、成管情況;采用免疫印跡法測定三組細(xì)胞Sirtuins(Sirt1-Sirt7)、VEGF、血管生成素蛋白表達(dá)水平;隨后采用Western blot摸索高糖環(huán)境下(30mmol/L D-葡萄糖)利那魯肽(Liraglutide)濃度梯度(0、25、50、75、100、125nmol/L)。在得到利那魯肽干預(yù)最佳濃度后,分四組處理細(xì)胞,即正糖組(NG 5.5mmol/L D-葡萄糖×6d),正糖干預(yù)組(NG+Lira 5.5mmol/L D-葡萄糖+100nmol/L Liraglutide×6d),高糖組(HG 30mmol/L D-葡萄糖×6d),高糖干預(yù)組(HG+Lira 30mmol/L D-葡萄糖+100nmol/L Liraglutide×6d),以觀察利拉魯肽對細(xì)胞VEGF、血管生成素的蛋白表達(dá)水平和細(xì)胞的增殖、衰老、遷移、成管情況。研究結(jié)果1.與正糖組(5.5mmol/L D-葡萄糖)ECFC相比,高糖組(30mmol/L D-葡萄糖)細(xì)胞的增殖、遷移、成管能力下降,同時(shí)細(xì)胞衰老增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;且該變化與升高的滲透壓濃度無關(guān)。2.與正糖組(5.5mmol/L D-葡萄糖)ECFC相比,高糖組(30mmol/L D-葡萄糖)細(xì)胞Sirtuins蛋白表達(dá)水平普遍下調(diào),其中Sirt1、Sirt2、Sirt7差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VEGF和血管生成素的蛋白表達(dá)明顯下降,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;且該變化同樣與升高的滲透壓濃度無關(guān)。3.ECFC經(jīng)高糖(30mmol/L D-葡萄糖)+(0、25、50、75、100、125nmol/L Liraglutide)干預(yù)后,隨著利那魯肽濃度的升高,Sirt1的蛋白表達(dá)水平也呈升高趨勢,從50 nmol/L時(shí)開始有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且在100nmol/L時(shí)達(dá)到平臺(tái)。4.與高糖組(30mmol/L D-葡萄糖)ECFC相比,高糖干預(yù)組(30mmol/L D-葡萄糖+100nmol/L Liraglutide)細(xì)胞VEGF和血管生成素的蛋白表達(dá)水平升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;且細(xì)胞的增殖、遷移、成管能力提高,細(xì)胞衰老率下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而正糖(5.5mmol/L D-葡萄糖)情況下,利那魯肽則無此效應(yīng)。結(jié)論1.高糖可加速ECFC衰老,引起增殖、遷移能力下降和血管生成障礙。2.ECFC血管生成能力下降的同時(shí),伴高糖誘導(dǎo)的Sirtuins、VEGF和血管生成素的表達(dá)下調(diào)3.利那魯肽可顯著改善高糖所致的ECFC衰老;增強(qiáng)增殖、遷移和血管生成能力,部分可能與上調(diào)Sirt1、VEGF和血管生成素的表達(dá)有關(guān)
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 毛紅;趙n\;王紅祥;鄧琳;;自體外周血干細(xì)胞移植治療糖尿病下肢血管病變與糖尿病足的療效觀察[J];臨床內(nèi)科雜志;2006年06期

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本文編號：1597074