本文選題：CP-25　切入點(diǎn)：滑膜細(xì)胞　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：腫瘤壞死因子配體超家族成員B淋巴細(xì)胞刺激因子(B lymphocyte stimulator, BLyS)又稱B細(xì)胞活化因子,與其受體跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配體相互作用分子(transmembrane activator or calcium-modulating cyclophylin ligand-interactor, TACI)、B細(xì)胞成熟抗原(B cell maturation antigen, BCMA)和B細(xì)胞活化因子受體(B cell-activating factor receptor, BAFF-R)結(jié)合,促進(jìn)B細(xì)胞的存活、生長(zhǎng)、抗原呈遞以及不同階段免疫球蛋白的類別轉(zhuǎn)換和重組,在B細(xì)胞存活、增殖和活化中起重要作用。BLyS主要來源于骨髓家族細(xì)胞如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等�；罨腡細(xì)胞也產(chǎn)生BLyS,且表達(dá)BAFF-R和TACI兩種受體,調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能,促進(jìn)T細(xì)胞的活化和存活,在T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫病中發(fā)揮重要作用。白芍總苷(total glucosides of paeonia,TGP)是我國(guó)第一個(gè)批準(zhǔn)上市治療RA抗炎免疫調(diào)節(jié)藥,新型活性單體-苯磺酰芍藥苷(芍藥苷-6-氧-苯磺酸酯,代號(hào)CP-25)是TGP有效活性成份芍藥苷(paeoniflorin, PAE)的結(jié)構(gòu)修飾單體,脂溶性好,主要在小腸吸收,絕對(duì)生物利用度明顯提高,抗炎免疫調(diào)節(jié)作用明顯,已獲中國(guó)發(fā)明專利(ZL 201210030616.4)。但CP-25對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)免疫應(yīng)答和滑膜細(xì)胞調(diào)控作用的機(jī)制尚不清楚。本研究以大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant-induced arthritis, AA)模型為研究對(duì)象,觀察BLyS及其受體在AA大鼠各免疫器官、免疫細(xì)胞和成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocyte, FLS)中的表達(dá)以及CP-25對(duì)大鼠AA的治療作用；同時(shí)探討了CP-25對(duì)T細(xì)胞和FLS功能及細(xì)胞間相互作用的調(diào)節(jié)和機(jī)制。目的：觀察BLyS及其受體(BAFF-R、TACI、BCMA)在AA大鼠免疫器官、免疫細(xì)胞和FLS中的表達(dá)變化,明確CP-25對(duì)大鼠AA的治療作用及其對(duì)T細(xì)胞和FLS功能及細(xì)胞間相互作用的影響。方法：SD大鼠右后足跖皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(complete Freund adjuvant, CFA) 0.1ml建立大鼠AA模型。造模成功后,將大鼠隨機(jī)分為八組：正常組,模型組,CP-25(25,50,100mg/kg)治療組,甲氨蝶呤(MTX) (0.5mg/kg)、TGP (50mg/kg)和PAE (50mg/kg)陽(yáng)性對(duì)照組。全身評(píng)分測(cè)定；光學(xué)顯微鏡觀察脾臟組織病理學(xué)變化；Q-PCR檢測(cè)BLyS及其受體(BAFF-R, TACI、BCMA)在脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和滑膜細(xì)胞中mRNA的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BAFF-R, TACI、BCMA在腸系膜淋巴結(jié)CD4+T細(xì)胞中的表達(dá)及脾臟輔助T(CD3+CD4+)、細(xì)胞毒T(CD3+CD8+)和未致敏(CD4+CD62L+)、記憶(CD4+CD44+) T細(xì)胞亞群的比例；CCK-8測(cè)定胸腺T細(xì)胞和FLS的增殖反應(yīng)；ELISA法檢測(cè)血清和細(xì)胞上清中IL-1β、IL-6和TNF-a水平。結(jié)果：1. BLyS及其受體BAFF-R、TACI、BCMA在AA大鼠免疫器官、免疫細(xì)胞和FLS中的表達(dá)Q-PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與正常組相比,BLyS及其受體BAFF-R、BCMA mRNA在AA大鼠脾臟組織中表達(dá)明顯升高,TACI mRNA表達(dá)無明顯變化；BLyS及其受體BAFF-R mRNA在AA大鼠腸系膜淋巴結(jié)組織中表達(dá)明顯升高,TACI mRNA表達(dá)明顯降低,BCMA mRNA表達(dá)無明顯變化；BLyS及其受體BAFF-R、BCMA mRNA在AA大鼠巨噬細(xì)胞中表達(dá)都明顯升高,TACI mRNA表達(dá)明顯降低；BLyS及其受體BCMA mRNA在大鼠AA樹突狀細(xì)胞中表達(dá)都明顯升高,TACI mRNA表達(dá)明顯降低,BAFF-R mRNA表達(dá)無明顯變化；BAFF-R、BCMA mRNA在大鼠AA FLS中表達(dá)明顯升高,TACI mRNA表達(dá)無明顯變化。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn),BAFF-R在淋巴結(jié)CD4+T細(xì)胞上表達(dá)升高,TACI表達(dá)無明顯變化,BCMA無表達(dá)。2.CP-25體外對(duì)AA大鼠胸腺T細(xì)胞增殖的影響B(tài)LyS (500ng/ml)體外刺激48h能增強(qiáng)胸腺T細(xì)胞的增殖,CP-25(10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 mol/L)給藥組可以不同程度的抑制胸腺T細(xì)胞的增殖。3.CP-25體外對(duì)正常大鼠FLS和AA大鼠FLS增殖的影響B(tài)LyS (1μg/ml)體外刺激48h能增強(qiáng)正常和AA大鼠FLS的增殖,CP-25(10-,10-6,10-5 mol/L)給藥組可以不同程度的抑制正常FLS的增殖,CP-25(10-7,10-6,10-5mol/L)給藥組可以不同程度的抑制AA大鼠FLS的增殖。4. BLyS刺激的正常大鼠脾臟CD4+T細(xì)胞和AA大鼠FLS共培養(yǎng)對(duì)FLS增殖和分泌功能的影響及CP25的作用BLyS刺激48h的正常大鼠脾臟CD4+T細(xì)胞與AA大鼠FLS共培養(yǎng)可以使FLS增殖增強(qiáng),分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的水平升高；BLyS刺激正常大鼠脾臟CD4+T細(xì)胞同時(shí)給予不同濃度的CP-25,爾后將CD4+T細(xì)胞與AA大鼠FLS共培養(yǎng),CP-25 (10-6,10-5 mol/L)可不同程度抑制FLS的增殖,CP-25(10-7,10-6,10-5 mol/L)可不同程度降低FLS的IL-1p水平,CP-25 (10-6,10-5 mol/L)可不同程度降低FLS的IL-6和TNF-α水平。5.CP-25對(duì)AA大鼠全身評(píng)分和脾臟病理學(xué)的影響CFA誘導(dǎo)大鼠AA模型,繼發(fā)病變?cè)谠炷：?4天,表現(xiàn)為以多發(fā)性關(guān)節(jié)炎為特征的關(guān)節(jié)腫脹變形和活動(dòng)障礙。AA大鼠脾臟病理學(xué)表現(xiàn)為動(dòng)脈周圍淋巴鞘和邊緣區(qū)增厚,淋巴小結(jié)增多增大,生發(fā)中心出現(xiàn)。CP-25降低AA大鼠的全身評(píng)分,改善脾臟病理學(xué)表現(xiàn)。6.CP-25對(duì)AA大鼠脾臟T細(xì)胞亞群比例的影響與正常組相比,AA大鼠脾臟CD3+CD4+T細(xì)胞亞群比例明顯升高,CP-25(50,100mg/kg)降低其比例；大鼠脾臟細(xì)胞毒CD3+CD8+T細(xì)胞亞群比例明顯降低,CP-25 (100mg/kg)升高脾臟細(xì)胞毒CD3+CD8+T細(xì)胞亞群比例；AA大鼠脾臟記憶 (CD4+CD44+) T細(xì)胞亞群比例明顯升高,CP-25 (50, 100mg/kg)降低脾臟記憶 (CD4+CD44+) T細(xì)胞亞群比例；大鼠AA脾臟未致敏(CD4+CD62L+) T細(xì)胞亞群比例無明顯變化。7.CP-25對(duì)AA大鼠FLS上清炎性細(xì)胞因子分泌的影響與正常組相比,AA大鼠FLS上清中IL-1p和TNF-α水平顯著升高,CP-25(50, 100mg/kg)明顯降低IL-1p的水平,CP-25 (100mg/kg)可明顯降低TNF-α的水平。結(jié)論：1. BLyS及其受體BAFF-R、TACI、BCMA在AA大鼠外周淋巴器官(脾臟、淋巴結(jié))、免疫細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、CD4十T細(xì)胞)和FLS中異常表達(dá),BLyS可能通過其受體介導(dǎo)了AA大鼠的異常T細(xì)胞反應(yīng)。2.CP-25抑制CD4+T細(xì)胞和FLS的功能以及調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞與FLS的相互作用,可能是其作用的機(jī)制之一。3.CP-25降低AA大鼠的全身評(píng)分,改善脾臟病理學(xué)損傷,調(diào)節(jié)T細(xì)胞平衡,對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的大鼠AA有治療作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.22

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳尹;魏偉;吳虹;張玲玲;陳鏡宇;;芍藥苷對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生抗體和cAMP水平的影響[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2007年11期

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本文編號(hào)：1579298