本文選題：接頭蛋白SLAT　切入點(diǎn)：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎　出處：《四川醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的慢性自身免疫性疾病,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形,功能喪失、致殘。雖然RA的病因和發(fā)病機(jī)制還不清楚,但目前所知CD4+T細(xì)胞分化為不同的功能性Th細(xì)胞亞群,導(dǎo)致機(jī)體炎癥反應(yīng)是RA發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。Th17細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的一種能特異性產(chǎn)生IL-17的Th細(xì)胞亞群,通過IL-17受體等途徑作用于效應(yīng)細(xì)胞,造成機(jī)體的損壞。因此Th17細(xì)胞在RA發(fā)病中起關(guān)鍵作用。初始CD4+T細(xì)胞向Th17分化依賴于兩個方面信號:一是TCR(T細(xì)胞抗原受體),二是細(xì)胞因子受體。目前對Th17細(xì)胞分化的研究集中在激發(fā)的細(xì)胞因子途徑中而對TCR途徑研究甚少。而TCR途徑是T細(xì)胞活化、Th17分化必需的信號之一,因此,從TCR途徑出發(fā),研究Th17細(xì)胞的分化機(jī)制是對其分化途徑新的重要探索。TCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,接頭蛋白(adapter proteins)分子起著重要的銜接和調(diào)控作用,往往是信號復(fù)合體(signaling complex)的核心成分。T細(xì)胞接頭蛋白(SLAT),是一種鳥甘酸交換因子(GEF),高表達(dá)于胸腺細(xì)胞和外周血T細(xì)胞。SLAT通過效應(yīng)細(xì)胞造成骨質(zhì)破壞。因此,SLAT通過TCR信號途徑在T細(xì)胞免疫應(yīng)答中扮演了嶄新和重要角色。目的:1、研究SLAT在活動期RA患者CD4+T細(xì)胞中的表達(dá),同時(shí)進(jìn)行SLAT表達(dá)水平與外周血、關(guān)節(jié)液中Th17細(xì)胞比例相關(guān)分析,觀察SLAT在活動期RA患者外周血及關(guān)節(jié)液與正常人外周血之間的差異。2、檢測在誘導(dǎo)刺激后slat及與th17細(xì)胞變化的關(guān)系。方法:根據(jù)2010acr/eular分類標(biāo)準(zhǔn)采集20例活動期ra患者外周血,同時(shí)抽取其膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液作為病例組。并采集15例正常人外周血作為對照組。(1)采集這20例活動期ra患者的空腹靜脈血檢測血沉(esr)、c反應(yīng)蛋白(crp)、類風(fēng)濕因子(rf)、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體(acpa)檢測并對ra患者關(guān)節(jié)炎癥進(jìn)行評估計(jì)算das28評分。標(biāo)本用edta抗凝管收集,利用密度梯度離心分別提取外周血單個核細(xì)胞(pbmc)和關(guān)節(jié)液單個核細(xì)胞(sfmc)。加入混合刺激液刺激(pma、離子霉素和莫能霉素)4h后加入流式抗體bv510anti-humancd4、pe-cy7anti-humanil-17、同時(shí)加入anti-slat后加入二抗donkeyanti-rabbit488上機(jī)檢測。(2)采集外周血分離pbmc,在誘導(dǎo)th17分化的體外環(huán)境中培養(yǎng)、刺激及實(shí)施沉默。a組加入t-activatorcd3/cd28;b組加入t-activatorcd3/cd28以及tgf-β、il-23、il 6。c組為沉默組加入cd4aptamer-slatshrnachimera,對slat干擾沉默。放入37℃co2孵箱內(nèi)培養(yǎng)72h。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測slat、th17細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)在之間的表達(dá)差異。(3)分離pbmc免疫磁珠去除分選法分選cd4+t細(xì)胞,培養(yǎng)刺激分組同上,收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清用elisa檢測il-17、tnf-α、ifn-γ。用realtime-pcr法檢測slat基因的表達(dá)水平;利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測以計(jì)算平均熒光強(qiáng)度mfi表示slat在蛋白水平的表達(dá)。(4)觀察cd4+t細(xì)胞在刺激培養(yǎng)以及沉默后各組中的slat的表達(dá)。利用spss20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.正常人外周血slat+cd4+t細(xì)胞為(21±2.4)%,活動期ra患者外周血slat+cd4+t細(xì)胞為(52±3.6)%,ra患者關(guān)節(jié)液slat+cd4+t細(xì)胞為(47±3.8)%;活動期ra患者外周血及關(guān)節(jié)液slat+cd4+t細(xì)胞高于正常對照組(p0.01)。2.正常人外周血th17細(xì)胞為(0.43±0.14)%,活動期ra患者外周血th17細(xì)胞為(1.46±0.21)%,ra患者關(guān)節(jié)液中th17細(xì)胞為(2.01±0.42)%;活動期ra患者外周血及關(guān)節(jié)液th17細(xì)胞高于正常對照組(p0.01),其中活動期ra患者關(guān)節(jié)液th17細(xì)胞高于ra患者外周血正常血(p0.05)。3.活動期ra患者外周血th17細(xì)胞比例與slat呈正相關(guān)(r=0.582,p=0.05)�；顒悠趓a外周血slat與das28評分呈正相關(guān)(r=0.732p=0.006)。4.收集pbmc進(jìn)行流式檢測il-17、ifn-γ、tnf-α、rorγt、irf4、slat分別與cd4+t細(xì)胞比例;b組細(xì)胞比例均高于c組(p0.01)。a組細(xì)胞比例均高于c組(p0.05)。5.收集上清elisa檢測il-17、ifn-γ、tnf-α,a組表達(dá)均高于c組(p0.05);b組表達(dá)均高于c組(p0.01);同時(shí)高于a組表達(dá)(p0.05)。6.收集培養(yǎng)cd4+t細(xì)胞realtime-pcr檢測il-17、ifn-γ、tnf-α、rorγt、irf4、slat;a組表達(dá)均高于c組(p0.05);b組均高于c組(p0.01)。7.a組mfi為(236±38),b組mfi為(541±24),c組mfi為(105±23);a組表達(dá)均高于c組(p0.05);b組均高于c組(p0.01);同時(shí)高于a組表達(dá)(p0.01)。8.免疫熒光顯微鏡示CD4+T細(xì)胞表達(dá)SLAT,沉默SLAT基因后其SLAT表達(dá)明顯減弱。結(jié)論:1.活動期RA患者外周血及配對關(guān)節(jié)液SLAT+CD4+T細(xì)胞的比例均高于正常對照�；顒悠赗A患者外周血Th17細(xì)胞的比例與SLAT\比例呈正相關(guān)。SLAT與DAS28評分呈正相關(guān)。而與ECR、CRP、RF、ACPA無明顯相關(guān)性,從而說明SLTA對RA患者Th17細(xì)胞分化有緊密關(guān)系,同時(shí)SLAT可作為判斷RA活動性的指標(biāo)之一。2.刺激培養(yǎng)CD4+T細(xì)胞后,檢測Th17細(xì)胞相關(guān)因子均明顯升高。沉默SLAT后檢測Th17細(xì)胞相關(guān)因子水平均明顯降低�；蚝偷鞍姿降谋磉_(dá)同時(shí)也表現(xiàn)出相同趨勢。這說明SLAT在RA患者Th17細(xì)胞分化中有推進(jìn)作用,能夠幫助Th17分泌IL-17等炎性因子增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。3.活動期RA患者關(guān)節(jié)液SLAT表達(dá)水平較外周血高,提示SLAT在機(jī)體不同部位促進(jìn)Th17分化的作用機(jī)制可能不盡相同。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R593.22

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 葉廷巧;楊永健;;鈣蛋白酶在心肌重構(gòu)中的作用[J];西南軍醫(yī);2014年05期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張雙;Calpain介導(dǎo)小鼠心肌缺血/再灌注氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號：1579781