本文選題：1-磷酸鞘氨醇　切入點：葡萄糖刺激的胰島素分泌　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)促進葡萄糖刺激的胰島素分泌效應(yīng)及其分子機制,探索糖尿病治療的藥物作用靶點。方法:(1)斷頭處死大鼠,充分暴露胸腹腔,將膠原酶P經(jīng)膽總管逆行注入胰腺,剝離后37℃水浴震蕩消化11分鐘,使用10771分離液梯度離心可獲得胰島。分離的胰島經(jīng)EDTA絡(luò)合鈣鎂離子后,Diapase II消化5分鐘,輕輕吹打后,可獲得大鼠胰島細胞(β細胞占多數(shù))。(2)采用RT-PCR方法,檢測大鼠胰島細胞表面S1PR1-5表達情況。(3)在不同葡萄糖濃度的條件下,觀察不同濃度S1P對胰島β細胞分泌胰島素的變化;高糖條件下,觀察S1PR1-4阻斷劑及S1P+S1PR1-4阻斷劑對β細胞胰島素分泌的變化。(4)采用膜片鉗技術(shù),觀察S1P、S1PR1-4阻斷劑及S1P+S1PR1-4阻斷劑對電壓依賴性鉀電流(Kv電流)的影響。(5)采用鈣成像技術(shù),觀察不同濃度S1P對細胞內(nèi)Ca2+水平的影響。(6)觀察S1P、S1PR1-4阻斷劑、S1P+S1PR1-4阻斷劑及Forskolin對細胞內(nèi)cAMP水平的影響。結(jié)果:(1)經(jīng)膠原酶P消化獲得的大鼠胰島,質(zhì)地均一,邊緣圓潤;經(jīng)Diapase II消化獲得的胰島細胞,大小均一,胞膜完整。(2)經(jīng)RT-PCR檢測,S1PR1-5在胰島細胞表面均為陽性表達。(3)與低糖對照組相比,高糖對照組顯著促進了胰島素分泌。在低糖條件下,不同濃度S1P沒有改變胰島素分泌量(P0.05);而高糖條件下,S1P濃度依賴性促進了胰島素的分泌(P0.001)。在高糖條件下,在單獨S1PR1-4阻斷劑并不影響胰島素分泌的基礎(chǔ)上,加入S1PR1-4阻斷劑消除了S1P對胰島素分泌的促進作用(P0.01)。(4)高糖條件下,S1P顯著抑制了Kv電流(P0.01)。在單獨S1PR1-4阻斷劑不影響Kv電流的基礎(chǔ)上,S1PR1-4阻斷劑消除了S1P對Kv電流的抑制作用(P0.01)。(5)高糖條件下,S1P濃度依賴性升高了細胞內(nèi)Ca2+濃度(P0.001)。(6)Forskolin作為陽性對照,S1P抑制了細胞內(nèi)cAMP的生成(P0.01)。在單獨S1PR1-4阻斷劑不影響cAMP生成的基礎(chǔ)上,S1PR1-4阻斷劑消除了S1P對cAMP生成的抑制作用。結(jié)論:(1)用膠原酶P消化獲得的胰島、用Diapase II消化獲得的胰島細胞邊緣圓潤、狀態(tài)良好。(2)胰島細胞表面表達有S1PR1-5。(3)S1P通過S1P/S1PRs濃度依賴性促進了葡萄糖刺激的胰島素分泌。(4)S1P通過S1P/S1PRs抑制了Kv電流。(5)S1P濃度依賴性升高了細胞內(nèi)Ca2+濃度。(6)S1P通過S1P/S1PRs抑制cAMP的生成。綜上,S1P主要通過S1P/S1PRs/Kv/Ca2+途徑促進了胰島素的分泌。
[Abstract]:Objective: to study the glucose-stimulated insulin secretion and its molecular mechanism of Sphingosine-1-phosphate S1P, and to explore the drug target of diabetic treatment. Collagenase P was retrograde injected into the pancreas through the common bile duct and digested by concussion at 37 鈩，

本文編號：1579064