本文選題：NALP3炎癥體　切入點(diǎn)：西格列汀　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景：2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康,然而T2DM的發(fā)病機(jī)制尚未明確。研究表明,以NALP3炎癥體為中心的慢性炎癥反應(yīng)參與2型糖尿病的發(fā)生。NALP3炎癥體是核苷酸結(jié)構(gòu)域樣受體(NALPs)家族成員,是新近發(fā)現(xiàn)的活化caspase-1、調(diào)控IL-1β成熟和分泌的分子平臺(tái)；IL-1β是目前已知促炎活性的細(xì)胞因子之一,文獻(xiàn)提示其能夠促進(jìn)胰島素抵抗的發(fā)展。目前以干預(yù)代謝性炎癥通路、降低炎癥因子水平為目標(biāo)的抗炎治療在T2DM的降糖治療仍處于起步階段。本實(shí)驗(yàn)組的早期觀察研究發(fā)現(xiàn),西格列汀可能對(duì)NALP3炎癥體具有一定抑制作用。本研究旨在本實(shí)驗(yàn)組已有的研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討西格列汀對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞內(nèi)NALP3炎癥體的抑制作用,尋找西格列汀可能存在的藥理新機(jī)制,為抗炎治療在T2DM的降糖治療提供理論依據(jù)。方法：將3T3-L1細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),設(shè)定分組為空白對(duì)照組、西格列汀藥物處理組,分別設(shè)定濃度梯度及時(shí)間梯度。待細(xì)胞密度90%后48h進(jìn)行誘導(dǎo)分化,同時(shí)按分組設(shè)定予以各組藥物作用。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)基上清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的濃度。用western blot方法測(cè)定細(xì)胞中NALP3復(fù)合體各組分蛋白的表達(dá)情況。用real-time PCR測(cè)定細(xì)胞中NALP3復(fù)合體各組分NALP3. ASC. caspase-1 RNA表達(dá)情況。用Western Blot方法測(cè)定細(xì)胞中NF-κB及IκBα蛋白表達(dá)水平情況。此外將3T3-L1細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),設(shè)定分組為空白對(duì)照組、lOnM西格列汀藥物處理組,10nM西格列汀+10nM Exendin 9-39藥物處理組,lOnM西格列汀+50nM Exendin 9-39藥物處理組。待細(xì)胞密度90%后48h進(jìn)行誘導(dǎo)分化,同時(shí)按分組設(shè)定予以各組藥物作用。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)基上清IL-lβ、IL-18、IL-6、TNF-α的濃度。結(jié)果：1.5-100nmol/L西格列汀能明顯抑制3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-6分泌,呈劑量依賴(lài)關(guān)系。2. 110nmol/L西格列汀能明顯抑制3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期IL-1β、TNF-α、 IL-18、IL-6分泌,呈時(shí)間依賴(lài)關(guān)系。3.5-100nmol/L西格列汀處理3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期一定時(shí)間后,細(xì)胞內(nèi)NALP3炎癥體ASC、Caspasel組分表達(dá)減少, pro-caspasel組分表達(dá)增加。4. 10nmol/L西格列汀處理3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期不同的時(shí)間均觀察到細(xì)胞內(nèi)NALP3炎癥體ASC、Caspasel組分表達(dá)減少,pro-caspasel組分增加。5.5-100nmol/L西格列汀處理3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期一定時(shí)間后,細(xì)胞內(nèi)NALP3炎癥體ASC、Caspasel、NLRP3組分mRNA表達(dá)減少。6.50nM Exendin9-39能拮抗10nM西格列汀對(duì)3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期IL-1βTNF-α、IL-6、IL-18炎癥因子的抑制效應(yīng)；10nM Exendin9-39能部分拮抗lOnM西格列汀對(duì)3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期炎癥因子的抑制效應(yīng)。7. 10nmol/L西格列汀處理3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期2天后觀察到細(xì)胞內(nèi)NF-κB組分p65表達(dá)減少,IκBα蛋白表達(dá)增加。結(jié)論：西格列汀能夠抑制3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期細(xì)胞炎癥因子的表達(dá),且呈現(xiàn)劑量依賴(lài)關(guān)系和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系；同時(shí)西格列汀能夠抑制3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化期NALP3炎癥體蛋白的表達(dá),NALP3炎癥體各組分mRNA合成減少。我們的實(shí)驗(yàn)提示西格列汀可能依賴(lài)GLP-1通路,通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)NF-κB通路抑制NALP3炎癥體,從而抑制炎性介質(zhì)IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的分泌,這可能是西格列汀降糖作用的藥理機(jī)制之一。
[Abstract]:Background: type 2 diabetes (type diabetes 2 mellitus, T2DM) is a serious threat to human health, but the pathogenesis of T2DM is not clear. The study shows that inflammation.NALP3 body chronic inflammatory reaction with NALP3 as the center of the body inflammation in type 2 diabetes is nucleotide domain like receptor (NALPs) family members, is the activation of Caspase-1 found recently, molecular platform IL-1 beta maturation and secretion of cytokines; IL-1 beta is one of the currently known proinflammatory activity, suggesting that the literature can promote the development of insulin resistance. The intervention of metabolic pathway, decrease the level of inflammatory factors as the target for anti-inflammatory treatment in the hypoglycemic treatment of T2DM is still in the initial study on the early stage. The experimental group found that sitagliptin may have certain inhibitory effect on inflammation. NALP3 basic research progress of this study is to the existing experimental group A further study on Sig Leo Dean inhibitory effect on fat cells NALP3 inflammatory 3T3-L1 precursors, find new pharmacological mechanism of sitagliptin may exist, and provide a theoretical basis for the treatment of T2DM in hypoglycemic anti-inflammatory treatment. Methods: 3T3-L1 cells were cultured, set divided into blank control group, sitagliptin treatment group. Set concentration and time gradient respectively. The cell density of 90% 48h after induction of differentiation, at the same time by grouping to set each drug. Using enzyme-linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent, assay, ELISA) measured cell culture supernatant of IL-1 beta, IL-18, IL-6, TNF- concentration of alpha. Determination of expression of NALP3 complex group protein in cells by Western blot method. Determination of cell NALP3 complex components of NALP3. ASC. caspase-1 RNA real-time PCR expression by Western was determined by Blot method. The expression of NF- K B and I kappa B alpha protein levels in cells. 3T3-L1 cells were cultured in addition, set the packet into the blank control group, lOnM sitagliptin treated group, 10nM sitagliptin +10nM Exendin 9-39 treatment group, lOnM +50nM Exendin 9-39 sitagliptin treatment group. The cell density 90% 48h after induction of differentiation, at the same time by grouping to set each drug. Using enzyme-linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent, assay, ELISA) by cell culture supernatant of IL-l beta, IL-18, IL-6, TNF- alpha concentration. Results: 1.5-100nmol/L sitagliptin could obviously inhibit the differentiation of 3T3-L1 cells of IL-1 beta, TNF- alpha, IL-18, IL-6 secretion in a dose-dependent manner.2. 110nmol/L sitagliptin could obviously inhibit the differentiation of 3T3-L1 cells of IL-1 beta, TNF- alpha, IL-18, IL-6 secretion in a time dependent manner..3.5-100nmol/L sitagliptin at 3T3-L1 cell differentiation period after a certain period of time, the intracellular NALP3 inflammation ASC, Caspasel component decreased expression of pro-caspasel group increased.4. expression 10nmol/L sitagliptin treatment induced the differentiation of 3T3-L1 cells in different time period were observed in cells of NALP3 inflammation ASC, Caspasel component decreased expression of pro-caspasel group increased.5.5-100nmol/L sitagliptin treatment induced 3T3-L1 cell differentiation after a certain period of time, the intracellular NALP3 ASC Caspasel NLRP3, inflammation, component mRNA decreased expression of.6.50nM Exendin9-39 can antagonize 10nM sitagliptin on 3T3-L1 cell differentiation induced by IL-1 alpha beta TNF-, IL-6, IL-18 inhibitory effect on inflammatory factors; 10nM Exendin9-39 can antagonize the lOnM part of the West Glenn Ting differentiation of 3T3-L1 cells induced by inflammatory cytokines.7. 10nmol/L inhibitory effect of sitagliptin treatment induced 3T3-L1 cell differentiation stage was observed after 2 days of cell NF- K The B component p65 decreased expression of I kappa B alpha protein expression. Conclusion: the expression of Sig Leo Dean could inhibit 3T3-L1 cells induced by inflammatory cytokine differentiation stage, and showed a dose dependence and time dependence; at the same time, the expression of sitagliptin can inhibit the differentiation of 3T3-L1 cells NALP3 protein NALP3 inflammation, inflammation of body components the reduction of mRNA synthesis. Our experiments suggest that sitagliptin may depend on the GLP-1 pathway by inhibiting intracellular NF- B pathway inhibits NALP3 inflammation, thereby inhibiting inflammatory mediators IL-1 beta, IL-18, IL-6, TNF- secretion, which may be one of the pharmacological mechanism of hypoglycemic effect of sitagliptin.

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊西嶺;;西格列汀治療2型糖尿病患者的療效與安全性[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2013年16期

2 沈春蓮;張凌云;陸少鋒;;西格列汀治療2型糖尿病的療效[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2013年06期

3 王婷;謝薈茹;何毅;蔣學(xué)華;王凌;;單劑量及多劑量米格列奈片的中國(guó)人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究[J];藥物分析雜志;2013年09期

4 茹艷枝;馬紅;蘭麗珍;;磷酸西格列汀治療新診斷2型糖尿病的臨床觀察[J];中國(guó)糖尿病雜志;2014年02期

5 趙文麗;;武田制藥的阿格列汀臨床安全性試驗(yàn)達(dá)到主終點(diǎn)[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2013年06期

6 蔣婷;袁明勇;鄭玲利;;西格列汀治療2型糖尿病療效觀察[J];解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào);2014年04期

7 孔憲如,董吉祥,徐志剛,史光英;匹格列酮對(duì)2型糖尿病炎癥標(biāo)志物的影響研究[J];江蘇醫(yī)藥;2004年09期

8 王丹;楊玉芝;馮琨;江紅;向朝峰;;西格列汀對(duì)初診的2型糖尿病患者血清炎癥因子的影響[J];實(shí)用糖尿病雜志;2012年02期

9 秘芳;董金華;;達(dá)格列凈[J];中國(guó)藥物化學(xué)雜志;2014年04期

10 王進(jìn)紅;楊向華;;磷酸西格列汀治療2型糖尿病的臨床療效觀察[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙秀麗;王淑民;武峰;周輝;李嘉靜;李鵬飛;劉麗宏;毛麗軍;;米格列奈鈣片在健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[A];第十二次全國(guó)臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議會(huì)議論文集[C];2010年

2 ZHENG PEI ZENG;DONG SEOP CHOI;VISWANATHAN MOHAN;ANGELA EMSER;KAMRAN SIDDIQUI;YAN GONG;SAN JAY PATEL;HANS-JUERGEN WOERLE;;利格列汀應(yīng)用于血糖水平未獲充分控制的2型糖尿病亞洲患者有效且具有良好的耐受性[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

3 Daisaku Masuda;Takuya Kobayashi;Takeshi Okada;Hajime Nakaoka;Ryota Kawase;Kazuhiro Nakatani;Tohru Ohama;Makoto Nishida;Akifumi Matsuyama;Issei Komuro;Shizuya Yamashita;;利格列汀治療可改善餐后高脂血癥[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

4 顧麗萍;顧鳴宇;嚴(yán)率;趙立;黃云鴻;彭永德;;磷酸西格列汀治療32例2型糖尿病患者的臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

5 王靜;阮勇;譚擎纓;阮蕓;;磷酸西格列汀對(duì)肥胖2型糖尿病患者的療效與安全性的觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 陳紅梅;鄧海鷗;傅曉瑩;張舒婷;韓鋒;楊華章;鄺建;;2型糖尿病患者鹽酸匹格列酮治療前后總體水含量的變化特點(diǎn)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 陳吉海;卞茸文;歐陽(yáng)曉俊;;磷酸西格列汀在1型糖尿病患者中的使用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

8 李舍予;魏明天;彭仕鳳;蔡惠民;呂霞飛;田浩明;;西格列汀治療2型糖尿病療效的系統(tǒng)評(píng)價(jià)和薈萃回歸[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

9 PER-HENRIK GROOP;MARK COOPER;VLADO PERKOVIC;ANGELA EMSER;MAXIMILIAN VON EYNATTEN;HANS-JUERGEN WOERLE;;利格列汀應(yīng)用于已經(jīng)接受標(biāo)準(zhǔn)治療的糖尿病腎病患者中時(shí)可減少患者的白蛋白尿[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

10 RA DeFronzo;M.Hompesch;S.Kasichayanula;X.Liu;Y.Hong;M.Pfister;LA Morrow;BR Leslie;DW Boulton;A.Ching;SC Griffen;;達(dá)格列凈對(duì)腎臟葡萄糖動(dòng)力學(xué)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 毛建學(xué);格列所長(zhǎng)，，亞咕嘟！[N];邊防警察報(bào);2007年

2 李海霞;俄羅斯經(jīng)濟(jì)正健康發(fā)展[N];遠(yuǎn)東經(jīng)貿(mào)導(dǎo)報(bào);2006年

3 ;45號(hào)候選人——格列：無(wú)法參加自己的婚禮[N];人民公安報(bào);2008年

4 梁紫 海霞;俄將力控年通漲率在百分之九[N];遠(yuǎn)東經(jīng)貿(mào)導(dǎo)報(bào);2006年

5 于蕾;俄政府決定建立風(fēng)險(xiǎn)基金[N];遠(yuǎn)東經(jīng)貿(mào)導(dǎo)報(bào);2006年

6 梁熙玲;格列夫?qū)?guó)有資產(chǎn)私有化發(fā)表意見(jiàn)[N];遠(yuǎn)東經(jīng)貿(mào)導(dǎo)報(bào);2007年

7 本報(bào)記者 王開(kāi)波;高原深處譜華章[N];西藏日?qǐng)?bào);2007年

8 范迎春;俄將在2007年加入世貿(mào)組織[N];經(jīng)濟(jì)參考報(bào);2004年

9 編譯 北小冉;西格列汀可能引發(fā)胰腺疾病[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

10 魏開(kāi)敏;新型餐時(shí)血糖調(diào)節(jié)劑———那格列酮[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 章結(jié)兵;離子交換樹(shù)脂分離米格列醇的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];西北大學(xué);2012年

2 曾艷梅;DPP4抑制劑西格列汀對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響及其機(jī)制探討[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

3 梁微微;西格列汀對(duì)3T3-L1細(xì)胞NALP3炎癥復(fù)合體的作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 曹小輝;米格列奈合成工藝與L-脯氨酸衍生物催化不對(duì)稱(chēng)Michael加成研究[D];天津大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張俊;食物與性別對(duì)米格列奈鈣人體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)的影響[D];中南大學(xué);2011年

2 盧杰;2型糖尿病患者血糖控制不佳加用西格列汀的療效與安全性觀察[D];浙江大學(xué);2011年

3 彭力;2型糖尿病患者應(yīng)用西格列汀的短期療效觀察及影響因素分析[D];山東大學(xué);2014年

4 張士權(quán);米格列奈鈣原料藥質(zhì)量研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 唐芳;西格列汀對(duì)初診2型糖尿病患者內(nèi)皮功能的影響及其可能機(jī)制[D];中南大學(xué);2013年

6 王堯;米格列奈的合成工藝改進(jìn)[D];青島科技大學(xué);2014年

7 袁嬌;西格列汀對(duì)成人隱匿性自身免疫糖尿病患者血清細(xì)胞因子的影響[D];中南大學(xué);2014年

8 許慧;西格列汀聯(lián)合二甲雙胍治療2型糖尿病的臨床療效及安全性觀察[D];濟(jì)南大學(xué);2014年

9 李娜;米格列奈鈣對(duì)初診2型糖尿病患者血漿FGF-21水平的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

10 徐丹丹;西格列汀對(duì)高糖刺激下大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移功能影響及機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2014年

本文編號(hào)：1573369