本文關鍵詞：MAPKs通路在高糖誘導SD乳鼠心肌細胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學》 2014年

MAPKs通路在高糖誘導SD乳鼠心肌細胞凋亡中的作用

李娜  

【摘要】：目的： 糖尿病心肌細胞凋亡是糖尿病心肌病最重要的病理變化之一，促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)鏈是真核生物信號傳遞網(wǎng)絡中的重要途徑之一，是一類廣泛存在于真核細胞中的絲/蘇氨酸蛋白激酶。它是缺血、缺氧、激素作用、生長因子及細胞因子等各種細胞外刺激誘導基因表達、細胞增殖等核反應的共同通路或匯聚點，在基因表達調控和細胞質功能活動中發(fā)揮關鍵作用。本實驗利用原代培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞為模型，研究高糖對心肌細胞凋亡的影響及分子通路機制和MAPK通路阻斷劑的抗心肌細胞凋亡作用，旨在探索糖尿病性心肌病藥物防治的新靶點。 方法： 1心肌細胞的培養(yǎng)：無菌條件下取新生1-3天的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取心尖，剪碎成約1mm3大小，應用0.1%的胰酶、0.04%的膠原酶Ⅱ的混合酶消化液分離心肌細胞，10%胎牛血清中和終止消化，應用差速貼壁法獲取心肌細胞，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加入Brdu抑制成纖維細胞生長，每48小時更換培養(yǎng)基。倒置相差顯微鏡觀察心肌細胞形態(tài)，0.4%臺盼藍染色檢查心肌細胞成活率，免疫細胞化學染色鑒定心肌細胞純度。 2分組：將培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞隨機分為7組：對照組，葡萄糖濃度為5.5mmol/L；高糖組，葡萄糖濃度為25mmol/L；高滲對照組:對照組+19.5mmol/L的D-甘露醇；DMSO組：高糖組+1μl/ml的DMSO預處理30分鐘； SB203580組：高糖組+P38抑制劑SB203580預處理細胞30分鐘； PD98059組:高糖組+ERK抑制劑PD98059預處理細胞30分鐘；SP600125組:高糖組+JNK抑制劑SP600125預處理細胞30分鐘; 3檢測指標：干預72h后，應用流式細胞術分析各組細胞凋亡率，Western blot檢測凋亡指標caspase-3蛋白的表達變化及p-JNK，p-P38蛋白表達的變化。 4數(shù)據(jù)分析：所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，統(tǒng)計分析運用SPSS13.0軟件。采用單因素方差分析及q檢驗進行組間的兩兩比較。以P0.05作為差異有統(tǒng)計學意義。以P0.01作為差異有顯著統(tǒng)計學意義。 結果: 1應用混合酶多次消化法，差速貼壁，，成功地培養(yǎng)出純度較高的心肌細胞，α-平滑肌肌動蛋白免疫細胞化學鑒定為陽性。 2流式細胞儀結果：與對照組相比，高滲組凋亡率無明顯變化（P＞0.05）;高糖組的細胞凋亡明顯增多，有統(tǒng)計學意義（P 0.01）；PD98059組及DMSO組較高糖組細胞凋亡無明顯變化（P＞0.05），SP600125組及SB203580組較高糖組細胞凋亡均減少（p0.01）。 3Caspase-3表達結果：與對照組相比，高滲組的caspase-3表達無明顯變化（P＞0.05），而高糖組Caspase-3表達增多（P 0.01）；與高糖組相比，PD98059組細胞caspase-3表達無明顯變化（P＞0.05），SP600125及SB203580組caspase-3表達均減少（P 0.01）。 4JNK表達結果：與對照組相比，高滲組p-JNK表達無明顯變化（P＞0.05），高糖組p-JNK明顯表達增多（P 0.01）；SP600125組較高糖組p-JNK表達明顯較少（P 0.01）； 5P38表達結果：與對照組相比，高滲組p-P38表達無明顯變化（P＞0.05），高糖組p-P38表達明顯增多（P0.01），SB203580組p-P38較高糖組表達明顯減少（P 0.01）。 結論: 125mmol/L的高糖可能通過激活casepase-3誘導了心肌細胞的凋亡； 2高糖可能通過激活P38及JNK途徑，激活caspase-3從而誘導心肌細胞凋亡； 3P38及JNK通路抑制劑在糖尿病心肌病中有抑制心肌細胞凋亡的作用。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R587.2;R542.2
【目錄】：

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