本文關(guān)鍵詞：MAPKs通路在高糖誘導(dǎo)SD乳鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2014年

MAPKs通路在高糖誘導(dǎo)SD乳鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用

李娜  

【摘要】：目的： 糖尿病心肌細(xì)胞凋亡是糖尿病心肌病最重要的病理變化之一，促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)鏈?zhǔn)钦婧松镄盘?hào)傳遞網(wǎng)絡(luò)中的重要途徑之一，是一類廣泛存在于真核細(xì)胞中的絲/蘇氨酸蛋白激酶。它是缺血、缺氧、激素作用、生長因子及細(xì)胞因子等各種細(xì)胞外刺激誘導(dǎo)基因表達(dá)、細(xì)胞增殖等核反應(yīng)的共同通路或匯聚點(diǎn)，在基因表達(dá)調(diào)控和細(xì)胞質(zhì)功能活動(dòng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)利用原代培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞為模型，研究高糖對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響及分子通路機(jī)制和MAPK通路阻斷劑的抗心肌細(xì)胞凋亡作用，旨在探索糖尿病性心肌病藥物防治的新靶點(diǎn)。 方法： 1心肌細(xì)胞的培養(yǎng)：無菌條件下取新生1-3天的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取心尖，剪碎成約1mm3大小，應(yīng)用0.1%的胰酶、0.04%的膠原酶Ⅱ的混合酶消化液分離心肌細(xì)胞，10%胎牛血清中和終止消化，應(yīng)用差速貼壁法獲取心肌細(xì)胞，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加入Brdu抑制成纖維細(xì)胞生長，每48小時(shí)更換培養(yǎng)基。倒置相差顯微鏡觀察心肌細(xì)胞形態(tài)，0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色檢查心肌細(xì)胞成活率，免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定心肌細(xì)胞純度。 2分組：將培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為7組：對(duì)照組，葡萄糖濃度為5.5mmol/L；高糖組，葡萄糖濃度為25mmol/L；高滲對(duì)照組:對(duì)照組+19.5mmol/L的D-甘露醇；DMSO組：高糖組+1μl/ml的DMSO預(yù)處理30分鐘； SB203580組：高糖組+P38抑制劑SB203580預(yù)處理細(xì)胞30分鐘； PD98059組:高糖組+ERK抑制劑PD98059預(yù)處理細(xì)胞30分鐘；SP600125組:高糖組+JNK抑制劑SP600125預(yù)處理細(xì)胞30分鐘; 3檢測指標(biāo)：干預(yù)72h后，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析各組細(xì)胞凋亡率，Western blot檢測凋亡指標(biāo)caspase-3蛋白的表達(dá)變化及p-JNK，p-P38蛋白表達(dá)的變化。 4數(shù)據(jù)分析：所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS13.0軟件。采用單因素方差分析及q檢驗(yàn)進(jìn)行組間的兩兩比較。以P0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以P0.01作為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1應(yīng)用混合酶多次消化法，差速貼壁，，成功地培養(yǎng)出純度較高的心肌細(xì)胞，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定為陽性。 2流式細(xì)胞儀結(jié)果：與對(duì)照組相比，高滲組凋亡率無明顯變化（P＞0.05）;高糖組的細(xì)胞凋亡明顯增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.01）；PD98059組及DMSO組較高糖組細(xì)胞凋亡無明顯變化（P＞0.05），SP600125組及SB203580組較高糖組細(xì)胞凋亡均減少（p0.01）。 3Caspase-3表達(dá)結(jié)果：與對(duì)照組相比，高滲組的caspase-3表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），而高糖組Caspase-3表達(dá)增多（P 0.01）；與高糖組相比，PD98059組細(xì)胞caspase-3表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），SP600125及SB203580組caspase-3表達(dá)均減少（P 0.01）。 4JNK表達(dá)結(jié)果：與對(duì)照組相比，高滲組p-JNK表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），高糖組p-JNK明顯表達(dá)增多（P 0.01）；SP600125組較高糖組p-JNK表達(dá)明顯較少（P 0.01）； 5P38表達(dá)結(jié)果：與對(duì)照組相比，高滲組p-P38表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），高糖組p-P38表達(dá)明顯增多（P0.01），SB203580組p-P38較高糖組表達(dá)明顯減少（P 0.01）。 結(jié)論: 125mmol/L的高糖可能通過激活casepase-3誘導(dǎo)了心肌細(xì)胞的凋亡； 2高糖可能通過激活P38及JNK途徑，激活caspase-3從而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡； 3P38及JNK通路抑制劑在糖尿病心肌病中有抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.2;R542.2
【目錄】：

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6 高友山;急慢性心肌缺血心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2000年

7 周小波;缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)肥大的心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 馬穎艷;缺血再灌注誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡及NO、缺血預(yù)處理、熱休克對(duì)其不同影響與凋亡相關(guān)基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

9 張鵬;乙醛脫氫酶2抑制氧化應(yīng)激導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 時(shí)慧琦;軟脂酸致H9c2心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王古平;新型小分子AF-HF001抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡研究[D];江南大學(xué);2015年

2 葛晨;微小RNA-214對(duì)膿毒癥小鼠心肌損傷的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 馬苗苗;β3-AR對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響及介導(dǎo)機(jī)制研究[D];石河子大學(xué);2015年

4 王偉濤;SP600125對(duì)腦死亡大鼠心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2015年

5 王娟;二甲基甲酰胺通過線粒體通路誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

6 郁喆;Toll樣受體信號(hào)通路對(duì)異種心臟移植中的心肌細(xì)胞凋亡影響的初步研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 李闖杰;太原市冬季大氣細(xì)顆粒物致大鼠心肌細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李文凱;心肌缺血再灌注損傷模型大鼠經(jīng)艾塞那肽預(yù)處理后心肌細(xì)胞凋亡及Bcl-2、Bax的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 宋海旭;E1A激活基因阻遏子基因調(diào)控自噬溶酶體通路改善心肌缺血再灌注損傷的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 趙福平;降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)去甲腎上腺素誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：MAPKs通路在高糖誘導(dǎo)SD乳鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：153276