本文關(guān)鍵詞： 2型糖尿病 次血紅素六肽 活性氧自由基 胰島素抵抗 DhHP 6　出處：《吉林大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：2型糖尿病（Type2diabetes mellitus，T2DM）屬于胰島素非依賴型糖尿病，是由于機(jī)體內(nèi)各主要能量代謝相關(guān)組織如肝臟、骨骼肌和脂肪組織等對胰島素敏感性降低、以及胰島β細(xì)胞的胰島素分泌量長期不足導(dǎo)致的。在2型糖尿病發(fā)病及相關(guān)并發(fā)癥的病理機(jī)制中，活性氧自由基不但對胰島β細(xì)胞的胰島素分泌產(chǎn)生影響，對胰島素敏感細(xì)胞內(nèi)的胰島素受體信號通路產(chǎn)生影響，而且活性氧自由基同樣參與了胰島素抵抗�；钚匝踝杂苫T導(dǎo)肝細(xì)胞、肌細(xì)胞或者脂肪細(xì)胞等主要能量代謝相關(guān)組織的細(xì)胞產(chǎn)生的胰島素抵抗是2型糖尿病的一個重要特征。Nicholas等人[1]通過TNF α和地塞米松誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞3T3 L1分別建立了兩種胰島素抵抗細(xì)胞模型，并通過測定細(xì)胞的氧化還原態(tài)確定了在這兩種胰島素抵抗的細(xì)胞模型中ROS的水平都顯著增加，驗(yàn)證了ROS是在胰島素抵抗形成過程中一個重要因子。而且Nicholas等人通過皮下注射給予肥胖小鼠一種超氧化物歧化酶模擬物MnTBAP能夠改善肥胖小鼠的空腹糖耐量，說明了MnTBAP通過清除自由基可以有效的改善胰島素敏感細(xì)胞對胰島素的敏感狀態(tài)，從而揭示可以通過清除患者體內(nèi)的過量的活性氧自由基達(dá)到改善或者治療糖尿病的可能性。 生物大分子實(shí)驗(yàn)室根據(jù)抗壞血酸過氧化物模擬酶模擬物MP 8、MP 9、MP 11的活性中心結(jié)構(gòu)、同時根據(jù)固相肽合成的基本原理，先去除模擬物分子結(jié)構(gòu)中容易被H2O2氧化的血紅素的乙烯基側(cè)鏈，以亞血紅素替代血紅素分子，并做為靶分子通過噬菌體展示肽庫所得到的序列，設(shè)計并合成分子結(jié)構(gòu)含His的抗壞血酸過氧化物酶短肽模擬物DhHP 6。 由于DhHP 6分子結(jié)構(gòu)的不對稱性，因此DhHP 6實(shí)際上是代表著兩個同分異構(gòu)體的混合物，而由于DhHP 6三價鐵的高自旋狀態(tài)，所以不能夠通過直接測定核磁共振氫譜的方法進(jìn)行異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)鑒定。本文通過在測定溶液中加入氰化鉀的方法能夠使氰基與三價鐵絡(luò)合，從而降低三價鐵的自旋狀態(tài)，進(jìn)而進(jìn)行核磁共振的檢測，證明在加入氰基與DhHP 6進(jìn)行絡(luò)合后能夠有效降低Fe3+的自旋狀態(tài)，使Fe3+由順磁性轉(zhuǎn)變?yōu)榉创判�，并對核磁進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)兩種異構(gòu)體的1H核磁共振譜存在明顯的差異。同時在通過質(zhì)譜對DhHP 6進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證時，發(fā)現(xiàn)了由于三價鐵的存在而導(dǎo)致的不同氨基酸產(chǎn)生的不同碎裂途徑，進(jìn)而說明DhHP 6的次血紅素分子可能在多肽的結(jié)構(gòu)鑒定方面有潛在的應(yīng)用。 本文對DhHP 6兩種異構(gòu)體酶學(xué)活性以及清除細(xì)胞內(nèi)自由基的能力進(jìn)行測定，，結(jié)果表明，DhHP 6可通過清除細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的方法，有效的促胰島β細(xì)胞增殖，抑制葡萄糖毒性和脂毒性誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡，同時DhHP 6還能夠有效的恢復(fù)由于自由基損傷而引起的胰島β細(xì)胞分泌功能下降。但這兩種異構(gòu)體在清除自由基的活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)差異，因此在進(jìn)行以清除自由基相關(guān)的機(jī)理研究時，可以使用混合物，而不需要分別測定異構(gòu)體的作用機(jī)理。 本文通過測定DhHP 6對C2C12肌細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響，結(jié)果表明DhHP 6能夠增加肌細(xì)胞對葡萄糖的吸收速率。16μ M DhHP 6能夠使C2C12對葡萄糖的吸收與空白相比增加了1.4倍。證明通過清除肌細(xì)胞內(nèi)的活性氧自由基能夠增加肌細(xì)胞的葡萄糖攝入能力，說明可以通過對ROS的清除改善2型糖尿病患者體內(nèi)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)的可能性，并有可能通過清除2型糖尿病患者體內(nèi)的自由基從而達(dá)到降血糖的目的。 本文進(jìn)一步通過皮下注射給藥的方法研究了DhHP 6在STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠模型中的降血糖以及對實(shí)驗(yàn)動物胰島的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DhHP 6高劑量的皮下注射給藥方式能夠有效降低實(shí)驗(yàn)動物的血糖，其效果與已上市的胰島素和Exenatide作用相當(dāng)，而且胰島切片的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示出DhHP 6能夠有效保護(hù)STZ 誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠的胰島，其效果同樣與胰島素和Exenatide作用相當(dāng)。進(jìn)一步驗(yàn)證了可以通過對患者體內(nèi)ROS的清除能夠保護(hù)已經(jīng)驗(yàn)證受損的胰島以及增加2型糖尿病患者機(jī)體對胰島素的敏感性，從而達(dá)到降血糖的目的。
[Abstract]:2鍨嬬硸灝跨梾(Type2diabetes mellitus,T2DM)灞炰簬鑳板矝绱犻潪渚濊禆鍨嬬硸灝跨梾,鏄敱浜庢満浣撳唴鍚勪富瑕佽兘閲忎唬璋㈢浉鍏崇粍緇囧鑲濊剰,楠ㄩ鑲屽拰鑴傝偑緇勭粐絳夊鑳板矝绱犳晱鎰熸

本文編號：1498222