本文關(guān)鍵詞：FGF8及FGFR3在大骨節(jié)病軟骨細胞異常分化過程中的作用研究

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【摘要】：研究背景及目的大骨節(jié)病(Kashin-Beck disease,KBD)是一種慢性、地方性、變形性骨關(guān)節(jié)病,致殘率很高,嚴重危害人民健康。我國曾將KBD列為衛(wèi)生部“六五”、國家“七五”和“八五”科技攻關(guān)項目。但是,KBD發(fā)病機理不清,就推定的病因物質(zhì)在人體內(nèi)如何損傷深層軟骨細胞,一直未獲得證據(jù),迄今不能解釋KBD軟骨深層壞死的發(fā)病機制。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),KBD的軟骨壞死與氧化應(yīng)激有關(guān),KBD的發(fā)生發(fā)展是以自由基引起的氧化應(yīng)激損傷作用為核心的病理過程。KBD軟骨壞死以侵犯骺生長板和關(guān)節(jié)軟骨的深層軟骨細胞為主,由于透明軟骨特殊的組織結(jié)構(gòu),在國內(nèi)外的研究中,只要涉及關(guān)節(jié)和骺板軟骨肥大層的病變,就會關(guān)注軟骨細胞的分化調(diào)節(jié)作用。成纖維細胞生長因子8(Fibroblast Growth Factor 8,FGF8)是于90年代由外國學(xué)者在SC3即雄性激素依賴性小鼠乳腺癌細胞系中分離出來的,因此又被稱為雄激素誘導(dǎo)的生長因子(androgen induced growth factor,AIFGF)。人體中的成纖維生長因子8是由233個氨基酸構(gòu)成(其分子量約26 k Da)的堿性蛋白,等電電位點為105左右。其在細胞早期分化過程中起舉足輕重的作用,并與頭骨和大腦以及手腳骨骼等等的形成有著密切的聯(lián)系,是由受精卵發(fā)育至胚胎這個過程中不可或缺的生長因子之一。成纖維細胞生長因子受體3(Fibroblast Growth Factor Receptor 3,FGFR3)屬于一類酪氨酸蛋白激酶(receptor tyrosine kinase,RTK)。至今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了4種成纖維細胞生長因子受體,即FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4。它們之間在氨基酸水平有55%~72%的一致性。通過既往研究我們得知,成纖維細胞生長因子受體3的信號通路與軟骨的發(fā)育、再造和骨骼疾病有著緊密的聯(lián)系。而成纖維細胞生長因子受體1,2,3的功能喪失突變或增強可導(dǎo)致包括顱縫早閉(craniosynostosis,CS)、軟骨發(fā)育不全(achondroplasia,ACH)和CATSHL(camptodactyly,tall stature,scoliosis,and hearing loss)綜合征在內(nèi)的多種人類骨骼系統(tǒng)遺傳性疾病。在已經(jīng)報道的既往研究發(fā)現(xiàn),KBD軟骨內(nèi)成骨障礙的發(fā)生涉及深層軟骨細胞終末過程的分化異常,分化調(diào)節(jié)因子即成纖維細胞生長因子,甲狀旁腺激素相關(guān)肽(Parathyroid Hormone related Peptide,PTHrp),轉(zhuǎn)化生長因子-β等表達異常,但這些異常表達的分化因子以及引起軟骨細胞的終末分化障礙與KBD深層軟骨死亡的關(guān)系未見研究。本研究擬以氧化應(yīng)激所誘發(fā)的軟骨細胞分化調(diào)節(jié)障礙為切入點,通過檢測成纖維細胞生長因子8及其受體3在軟骨細胞異常分化中的表達為介導(dǎo),分析其與大骨節(jié)病患者的關(guān)系,并初步研究FGF以及FGFR在大骨節(jié)病的發(fā)生過程當(dāng)中的生物學(xué)功能,試圖揭示KBD軟骨深層壞死的發(fā)病機制,進而為進一步闡明KBD的病因研究和防治提供理論依據(jù)。研究方法本研究采用實時熒光定量Real-Time PCR、Western Blotting和免疫組織化學(xué)技術(shù)等方法,篩選異常表達的與軟骨分化相關(guān)的分化調(diào)節(jié)因子---成纖維細胞生長因子及其受體,檢測其在KBD兒童和動物模型軟骨的表達水平,對KBD的病因及發(fā)病機制研究提供新的思路。統(tǒng)計方法:t檢驗主要用于大骨節(jié)病人組織與正常人對照組織的FGF8和FGFR3在免疫組織化學(xué)水平上陽性率表達差異的比較;動物模型的免疫組織化學(xué)水平上的差異比較用方差分析;卡方檢驗主要用于高表達組和低表達組的FGF8和FGFR3在m RNA水平以及蛋白質(zhì)水平上的差異比較。結(jié)果1.各組SIN-1濃度梯度誘導(dǎo)下的小鼠關(guān)節(jié)軟骨肥大細胞中FGF8以及FGFR3的m RNA和蛋白質(zhì)的表達水平有差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p(27)0.05)。與誘導(dǎo)成功的小鼠關(guān)節(jié)軟骨肥大細胞對照組即SIN-1 0mmol(不加藥)組相比,FGF8及FGFR3表達量上調(diào),尤其是在ADTC5小鼠肥大軟骨細胞系中。2.在低硒條件下T-2毒素誘導(dǎo)的四組SD大鼠大骨節(jié)病模型的新鮮組織蛋白以及石蠟病理切片中檢測異常表達的FGF8及FGFR3的表達水平,四組模型組織蛋白表達水平有差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p(27)0.05);四組模型石蠟病理切片的陽性率有差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p(27)0.05)。與常規(guī)組相比,低硒組,常規(guī)+T-2組,低硒+T-2組中FGF8及FGFR3的表達水平上調(diào)。3.免疫組織化學(xué)法檢測了64例石蠟包埋軟骨組織中FGF8以及FGFR3蛋白的表達情況,發(fā)現(xiàn)在兒童大骨節(jié)病患者手指關(guān)節(jié)軟骨和成人KBD病人關(guān)節(jié)軟骨中,FGF8以及FGFR3蛋白表達主要在細胞漿中,且病例組與對照組FGF8及FGFR3的陽性表達率具有差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p(27)0.05)。結(jié)論FGF8及FGFR3在大骨節(jié)病軟骨細胞異常分化過程中具有重要作用,兩個蛋白在軟骨分化等功能上均為負調(diào)節(jié)蛋白,FGF8及FGFR3的表達上調(diào)可能會引起大骨節(jié)病的關(guān)節(jié)軟骨分化障礙。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R684.1

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1 吳靜怡;黃亮;熊婕;曹陽;孫立石;劉文勵;周劍峰;;急性淋巴細胞白血病中腫瘤相關(guān)基因FGFR3 mRNA的表達及意義[J];中國血液流變學(xué)雜志;2008年01期

2 王紹明;胡飛飛;黃華泥;陳欣;陳凡;;FGFR2與疾病的相關(guān)性研究進展[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年10期

3 朱渝軍;黃顯凱;;小鼠小腸缺血再灌注損傷后FGFR3基因的變化[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

4 朱渝軍;黃顯凱;;FGFR3在小鼠小腸發(fā)育階段的作用[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2010年01期

5 ;Comparison of FGFR1 expression on lens epithelial cells between adults and fetuses[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2011年01期

6 張明;孟和寶力高;高智文;郭蘭英;趙艾潤;;探討FGFR3在骨骼發(fā)育和疾病中的作用[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2012年09期

7 黃靜;安紅麗;張濤;;高表達FGFR4細胞株的建立及其生物活性分析[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

8 ;Role of FGF-2/FGFR signaling pathway in cancer and its signification in breast cancer[J];Chinese Science Bulletin;2003年15期

9 蘇楠;陳林;;FGFR3在骨骼發(fā)育和疾病中作用的研究進展[J];國際遺傳學(xué)雜志;2006年03期

10 翁立新;付小兵;;大鼠腸缺血-再灌注損傷中FGFR2表達的規(guī)律[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2007年01期

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1 ;No interactions between FGFR2 genetic polymorphisms and reproductive factors in breast cancer among Chinese women[A];全國腫瘤流行病學(xué)和腫瘤病因?qū)W學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

2 蘇楠;陳思宇;李燦;杜曉蘭;陳林;;FGFR3功能增強點突變導(dǎo)致小鼠骨量減少[A];2012全國發(fā)育生物學(xué)大會摘要集[C];2012年

3 溫軒;蘇楠;陳林;;軟骨內(nèi)FGFR3功能缺失對骨形成影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次中青年骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

4 金e，

本文編號：1187055