發(fā)布時間：2017-10-26 01:18

  本文關(guān)鍵詞：降脂酮、自組裝OA-殼聚糖納米顆粒對高脂誘導(dǎo)BRL-3A細(xì)胞胰島素抵抗保護(hù)效果研究

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【摘要】：【背景】胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)是指生理劑量胰島素介導(dǎo)敏感靶器官(肝臟、骨骼肌及脂肪)的生物學(xué)效應(yīng)低于正常,主要表現(xiàn)為糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)代謝能力下降。目前對IR在疾病發(fā)生中的地位基本形成共識——“共同土壤”學(xué)說,即IR是2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)、代謝綜合征(Metabolic syndrome,Met S)、高血壓、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)、高尿酸血癥等聚集發(fā)病臨床征候群的共同發(fā)病基礎(chǔ)。長期處于IR狀態(tài)的人群罹患心腦血管意外的風(fēng)險明顯升高。肝臟作為胰島素作用的重要靶器官,可合成、儲存與釋放糖原,并與脂肪、蛋白質(zhì)代謝密切相關(guān)。高能飲食可導(dǎo)致肝臟糖原合成與分解紊亂,糖異生增加,是高血糖主要成因之一。目前常用于建立IR的多為3T3-L1(脂肪細(xì)胞)、Hep G2(人肝癌細(xì)胞)細(xì)胞系等,而對于大鼠(常用實(shí)驗(yàn)動物)的正常肝細(xì)胞IR模型尚未見報道。因此建立IR肝細(xì)胞模型有助于研究IR及T2DM發(fā)生機(jī)制。T2DM治療藥物類型多樣,但多存在非治療副反應(yīng)。近年關(guān)于中藥治療T2DM的研究取得了長足進(jìn)步,人們對植物提取物的重新認(rèn)識,讓人們對其作用有效部位、作用機(jī)理進(jìn)行研究,并對其改造后使之成為治療T2DM的一支生力軍。降脂酮(JZT)是一種從黃芪、山楂等6種中藥中提取的總黃酮,齊墩果酸(Oleanolic acid,OA)是存在于植物葉和根的五環(huán)三萜類化合物,兩者均有保肝作用,觀察降脂酮和納米化齊墩果酸(nano OA)對IR肝細(xì)胞的作用,探討它們作為T2DM天然藥物的可能性具有非常重要的意義�！灸康摹恳訠RL-3A細(xì)胞(大鼠肝細(xì)胞)為研究對象,研究PA構(gòu)建IR模型的可能性及穩(wěn)定性;檢測棕櫚酸(Palmitic acid,PA)誘導(dǎo)IR過程中細(xì)胞氧化應(yīng)激水平變化,探討氧化應(yīng)激在IR中的作用;研究降脂酮和納米化齊墩果酸對IR細(xì)胞模型糖脂代謝及氧化應(yīng)激水平的影響,探討它們作為T2DM治療藥物的可能性�！痉椒ā�1.細(xì)胞相對生存率檢測:細(xì)胞分對照組、PA組及溶劑組處理完畢后,MTT法檢測細(xì)胞相對生存率。2.PA對細(xì)胞基礎(chǔ)葡萄糖消耗影響:細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組處理完畢后吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液,加入無血清RPMI-1640培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h,檢測葡萄糖消耗量。3.PA對細(xì)胞胰島素刺激葡萄糖消耗影響:細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組處理完畢后吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液,分對照和胰島素刺激組處理后檢測葡萄糖消耗量。4.PA對細(xì)胞生化指標(biāo)影響:細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組處理完畢后,檢測TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。5.IR模型穩(wěn)定性評估:選取合適PA濃度及作用時間點(diǎn)處理BRL-3A細(xì)胞建模成功后,繼續(xù)培養(yǎng)檢測基礎(chǔ)葡萄糖消耗和胰島素刺激葡萄糖消耗變化。6.JZT對IR模型細(xì)胞氧化應(yīng)激水平影響:選擇不同濃度JZT預(yù)處理,加用PA處理后,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞ROS水平,并用酶標(biāo)儀檢測CAT、T-AOC、MDA、GSH水平。7.JZT對IR模型細(xì)胞生化指標(biāo)影響:選擇不同濃度JZT預(yù)處理,加用PA處理后,檢測基礎(chǔ)葡萄糖攝取、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。8.nano OA對細(xì)胞影響:細(xì)胞分對照組、OA組及nano OA組處理完畢后,MTT法檢測細(xì)胞相對生存率,檢測葡萄糖消耗量、細(xì)胞ROS水平。9.nano OA對IR模型細(xì)胞生化指標(biāo)影響:選擇不同濃度預(yù)孵育后,加用PA處理,檢測葡萄糖、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。10.nano OA對IR模型細(xì)胞氧化應(yīng)激水平影響:細(xì)胞分對照組、OA組及nano OA組處理完畢后,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞ROS水平,并用酶標(biāo)儀檢測MDA水平�！窘Y(jié)果】1.50、100μmol/L的PA作用于BRL-3A細(xì)胞不超過12h,細(xì)胞生存率與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。隨PA作用濃度增加和作用時間延長,細(xì)胞生存率比對照組顯著降低(P0.05),存在時間及劑量依賴關(guān)系。2.50μmol/L的PA作用BRL-3A細(xì)胞不同時間后,消耗葡萄糖量與對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。隨PA濃度增加和作用時間延長,BRL-3A細(xì)胞消耗葡萄糖量逐漸下降。100μmol/L的PA作用12h,BRL-3A細(xì)胞消耗葡萄糖量與對照組相比顯著降低(P0.05)。3.PA作用濃度增加及作用時間延長,胰島素刺激后細(xì)胞葡萄糖消耗量與同組細(xì)胞未刺激時相比差距逐漸下降。PA作用時間超過12h的細(xì)胞,胰島素刺激后葡萄糖消耗量與未刺激時無明顯變化。4.PA可增加細(xì)胞TG、TC、LDL-C水平,降低HDL-C水平。5.模型組BRL-3A細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)直至72h,其基礎(chǔ)葡萄糖消耗與對照組細(xì)胞相比仍較低,且繼續(xù)培養(yǎng)不同時間,細(xì)胞消耗葡萄糖量無明顯變化(P0.05)。對照組在胰島素刺激后細(xì)胞消耗葡萄糖量均增加(P0.05),模型組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)直至72h,胰島素刺激后細(xì)胞攝糖量與未刺激組無明顯變化(P0.05)。6.JZT可以減少IR模型細(xì)胞ROS,降低MDA水平,增加CAT水平及T-AOC。7.JZT可以提高IR模型細(xì)胞基礎(chǔ)葡萄糖攝取量,提高HDL-C水平,降低TG、TC、LDL-C水平。8.納米化后可以減少OA對細(xì)胞相對生存率、ROS及葡萄糖消耗影響。9.nano OA與OA組相比,葡萄糖攝取量增加,TG、TC、LDL-C水平降低(P0.05),HDL-C水平增加(P0.05)10.nano OA與OA組相比,細(xì)胞ROS水平降低(P0.05),細(xì)胞MDA水平下降(P0.05)。【結(jié)論】1.100μmol/L濃度的棕櫚酸作用12h可使BRL-3A細(xì)胞攝取葡萄糖能力下降、胰島素敏感性減弱、脂質(zhì)代謝紊亂,產(chǎn)生IR。2.IR模型BRL-3A細(xì)胞在正常培養(yǎng)72h內(nèi)可保持穩(wěn)定。3.降脂酮可以降低IR細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,并改善糖脂代謝水平。4.納米化可以減輕齊墩果酸對細(xì)胞影響,降低細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,并改善糖代謝水平。5.納米化齊墩果酸可以降低IR細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,并改善脂代謝水平。6.降脂酮和納米化齊墩果酸可以作為改善胰島素抵抗、治療2型糖尿病候選藥物進(jìn)行后續(xù)研究。
【關(guān)鍵詞】：胰島素抵抗 活性氧 氧化應(yīng)激 棕櫚酸 降脂酮 齊墩果酸 納米化
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-17
• 文獻(xiàn)回顧17-30
• 實(shí)驗(yàn)一 棕櫚酸誘導(dǎo)BRL-3A細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立30-51
• 引言30
• 1 材料30-32
• 2 方法32-42
• 3 結(jié)果42-48
• 4 討論48-51
• 實(shí)驗(yàn)二 棕櫚酸誘導(dǎo)BRL-3A細(xì)胞胰島素抵抗中氧化應(yīng)激作用研究51-64
• 引言51
• 1 材料51-52
• 2 方法52-57
• 3 結(jié)果57-62
• 4 討論62-64
• 實(shí)驗(yàn)三 降脂酮對棕櫚酸誘導(dǎo)BRL-3A細(xì)胞胰島素抵抗的保護(hù)效果研究64-78
• 引言64
• 1 材料64-66
• 2 方法66-67
• 3 結(jié)果67-76
• 4 討論76-78
• 實(shí)驗(yàn)四 自組裝OA-殼聚糖納米顆粒對棕櫚酸誘導(dǎo)BRL-3A細(xì)胞胰島素抵抗的保護(hù)效果研究78-98
• 引言78
• 1 材料78-80
• 2 方法80-81
• 3 結(jié)果81-96
• 4 討論96-98
• 小結(jié)98-99
• 參考文獻(xiàn)99-110
• 個人簡歷和研究成果110-112
• 致謝112

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本文編號：1096361