本文關(guān)鍵詞：FoxM1 shRNA慢病毒載體構(gòu)建及感染人前列腺癌細(xì)胞的穩(wěn)定細(xì)胞株篩選

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【摘要】：目的構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的人Fox M1 sh RNA重組慢病毒載體,并構(gòu)建篩選Fox M1敲低的人前列腺癌穩(wěn)定細(xì)胞株,檢測(cè)Fox M1的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。方法設(shè)計(jì)并合成3對(duì)特異性針對(duì)人Fox M1基因的sh RNA靶序列,構(gòu)建到p HBLV-U6-Zs Green-Puro慢病毒載體中,測(cè)序鑒定載體構(gòu)建情況,利用慢病毒三質(zhì)粒系統(tǒng)轉(zhuǎn)染包裝293T細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。收集到的病毒上清轉(zhuǎn)染人前列腺癌DU-145細(xì)胞,Real-time PCR檢測(cè)各組細(xì)胞Fox M1 m RNA水平,經(jīng)嘌呤霉素篩選建立Fox M1敲低穩(wěn)定細(xì)胞株,用Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中Fox M1表達(dá),并用MTT法觀察穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)觀察穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞凋亡情況,平板克隆實(shí)驗(yàn)觀察穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的克隆形成能力。結(jié)果經(jīng)測(cè)序鑒定成功構(gòu)建了3對(duì)Fox M1sh RNA慢病毒載體,并進(jìn)行包裝,感染DU-145細(xì)胞后Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果表明第1對(duì)慢病毒載體干擾效率最佳,嘌呤霉素抗性篩選建立了Fox M1敲低穩(wěn)定細(xì)胞株,熒光顯微鏡觀察感染效率較高,Western blotting結(jié)果顯示細(xì)胞中Fox M1蛋白表達(dá)明顯受到抑制,細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖能力明顯受限,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示Fox M1敲低組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組,平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Fox M1敲低組細(xì)胞克隆形成能力下降。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了Fox M1 sh RNA慢病毒載體,建立了Fox M1敲低穩(wěn)定前列腺癌細(xì)胞株,抑制細(xì)胞內(nèi)Fox M1的表達(dá)能夠抑制前列腺癌細(xì)胞DU-145的生長(zhǎng)增殖、克隆形成能力,并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院超聲科;解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射研究所;
【關(guān)鍵詞】： Fox M 前列腺癌 慢病毒載體 穩(wěn)定細(xì)胞株
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81471682)~~
【分類號(hào)】：R737.25
【正文快照】： 前列腺癌是威脅老年男性生命健康的常見腫瘤之一,西方發(fā)達(dá)國(guó)家其發(fā)病率排在男性惡性腫瘤發(fā)病率首位,死亡率位居第2位[1]。2012中國(guó)腫瘤登記年報(bào)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示前列腺癌是我國(guó)男性發(fā)病排名第6位的惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率逐年上升。這與醫(yī)療水平的提高,人民壽命的延長(zhǎng),生活方式

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6 白W

本文編號(hào)：924997