發(fā)布時(shí)間：2017-07-18 01:16

  本文關(guān)鍵詞：微小RNA-3691-3p在前列腺癌中低表達(dá)及意義初步分析

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 miR-3691-3P TGF-β1 臨床病理特征

【摘要】：目的:研究證實(shí),轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)可促進(jìn)前列腺癌(PCa)的生長和轉(zhuǎn)移,因此我們推測TGF-β1相關(guān)microRNA(miRNA)即TGF-β1抑制的miRNA可能具有抑制腫瘤的作用。這里基于微陣列分析證實(shí)miR-3691-3p在PCa細(xì)胞系、腫瘤組織減少,與病人的預(yù)后差顯著相關(guān)。進(jìn)一步預(yù)測miR-3691-3p的靶基因,研究其在PCa組織中的表達(dá)及臨床意義,為深入研究miRNA在PCa中的作用機(jī)制提供線索。方法:(1)利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測人類PCa組織標(biāo)本和細(xì)胞株中TGF-β1相關(guān)miRNAs的表達(dá)水平;在高表達(dá)和低表達(dá)miR-3691-3p組織標(biāo)本中對其進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析,及臨床病理特征進(jìn)行分析。(2)運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測miR-3691-3p的靶基因;將miR-3691-3p Mimics(M)轉(zhuǎn)染PCa細(xì)胞株(PC-3、DU-145),提取蛋白,通過Western blot技術(shù)檢測miR-3691-3p靶蛋白表達(dá)水平;采用免疫組織化學(xué)染色驗(yàn)證靶基因在人類前列腺癌組織和正常前列腺組織中的表達(dá)水平,并分析其臨床意義。結(jié)果:(1)利用qRT-PCR檢測TGF-β1抑制的相關(guān)miRNAs表達(dá)時(shí),miR-3691-3p在PC-3細(xì)胞系中表達(dá)下降2倍,在DU145細(xì)胞系中表達(dá)降低了3倍。MiR-3691-3p在前列腺癌組織中的表達(dá)較正常前列腺組織下降近20倍,它是TGF-β1相關(guān)miRNAs中表達(dá)量最低的。(2)MiR-3691-3p低表達(dá)在臨床病例中與以下臨床病理特征相關(guān),病理分期(P=0.0251);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.003);術(shù)前前列腺特異性抗原(PSA)(P=0.0019)和陽性脈管浸潤(P=0.0017)。此外miR-3691-3p低表達(dá)在前列腺癌根治術(shù)后患者中有更短的生化復(fù)發(fā)(BCR)生存率,相比于miR-3691-3p高表達(dá)(p0.05)。(3)運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測miR-3691-3p的靶基因?yàn)镃DK17、E2F3和PRDM1。Western blot檢測過表達(dá)miR-3691-3p的細(xì)胞株中,E2F3的表達(dá)量明顯降低。免疫組織化學(xué)法,檢測所驗(yàn)證靶基因在前列腺癌組織和正常前列腺組織中的表達(dá)水平,在癌組織中E2F3和PRDM1均表現(xiàn)出陽性。結(jié)論:(1)相對于正常前列腺組織,前列腺癌中miRNA具有差異表達(dá)譜,miR-3691-3p低表達(dá)與前列腺癌密切相關(guān);(2)E2F3是miR-3691-3p調(diào)控的下游靶基因。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 miR-3691-3P TGF-β1 臨床病理特征
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 前言10-12
• 參考文獻(xiàn)10-12
• 第一部分 TGF-β1 相關(guān)miRNA的篩選及其低表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性12-27
• 引言12-13
• 材料與方法13-22
• 1.材料13-15
• 1.1 細(xì)胞、引物、mimics來源和組織標(biāo)本13
• 1.2 主要試劑13
• 1.3 主要儀器設(shè)備13-14
• 1.4 常用緩沖液14-15
• 2.方法15-18
• 2.1 PCa細(xì)胞株中差異性miRNA的檢測15-17
• 2.2 組織標(biāo)本中差異性miRNA的檢測17-18
• 2.3 低表達(dá)的miR36913p與臨床關(guān)系的檢測18
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)18
• 3.結(jié)果18-22
• 3.1 外源性TGF-β1 對TGF-β1 相關(guān)差異性miRNAs在PCa細(xì)胞株中表達(dá)的影響18-19
• 3.2 miR36913p在PCa組織中表達(dá)下調(diào)19-20
• 3.3 miR36913p的表達(dá)量與臨床特征的相關(guān)性20-21
• 3.4 低表達(dá)的miR36913p與PCa預(yù)后生存率相關(guān)性分析21-22
• 討論22-23
• 參考文獻(xiàn)23-27
• 第二部分 miR36913p靶基因的預(yù)測及驗(yàn)證27-39
• 引言27-28
• 材料與方法28-36
• 1 材料28-29
• 1.1 病人組織、細(xì)胞、mimics和生物信息系統(tǒng)28
• 1.2 主要試劑28
• 1.3 主要儀器設(shè)備28-29
• 2.方法29-32
• 2.1 生物信息學(xué)篩選miR36913p靶基因29
• 2.2 Western blot法檢測PCa細(xì)胞株中靶基因的表達(dá)29-31
• 2.3 免疫組織化學(xué)法檢測PCa組織中靶基因的表達(dá)31-32
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32
• 3.結(jié)果32-36
• 3.1 生物信息學(xué)篩選出CDK17、PRDM1、E2F3靶基因32-33
• 3.2 Western blot法檢測出PCa中E2F3低表達(dá)、PRMD差異不明顯33-34
• 3.3 免疫組織化學(xué)法檢測出PCa組織E2F3、PRDM陽性表達(dá)34-36
• 討論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 綜述 TGF-β1相關(guān)microRNA在前列腺癌中的調(diào)控作用39-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 縮略詞表48-49
• 研究生期間發(fā)表的論文49-50
• 致謝50-51

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本文編號：555414