本文關(guān)鍵詞：雙酚A對(duì)雄性小鼠生殖和睪丸GPER表達(dá)的影響及與腎虛不育的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： BPA 腎虛 行為學(xué) 精液質(zhì)量 GPER 相關(guān)性

【摘要】：隨著工業(yè)化進(jìn)程的加劇,大量環(huán)境雌激素(Environmental estrogens,EEs)的釋放造成雄性生精功能障礙,因尚無(wú)行之有效防治方法,已引起國(guó)內(nèi)外生態(tài)學(xué)家及毒理學(xué)家的極大關(guān)注[1]。雙酚A(Bisphenol-A,BPA)作為一類典型的EEs,是對(duì)男性生殖健康危害極大的一類環(huán)境污染物。由于BPA導(dǎo)致的雄性生殖障礙與腎虛不育不僅均出現(xiàn)精子生成的異常,還出現(xiàn)了相關(guān)的行為學(xué)改變,同時(shí),補(bǔ)腎藥物能夠拮抗BPA引起的雄性生殖障礙的作用。我們的研究也表明[2],腎陽(yáng)虛不育大鼠不僅出現(xiàn)了精液質(zhì)量降低,還出現(xiàn)體質(zhì)量減輕、反應(yīng)遲鈍、弓背蜷縮、畏寒、體毛枯疏無(wú)光等改變,經(jīng)灌服金匱腎氣丸后,上述表現(xiàn)均有所改善。依據(jù)中醫(yī)“腎主生殖”與“方證相應(yīng)”的理論,我們推測(cè)BPA引起的雄性生殖障礙可能屬于腎虛不育的范疇。由于觀察動(dòng)物高架十字迷宮、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、游泳力竭時(shí)間等行為學(xué)改變,可反映其活動(dòng)量、驚恐狀態(tài)及耐力表現(xiàn);且雄性動(dòng)物精液質(zhì)量及育仔數(shù)是判斷動(dòng)物生育能力的最直觀指標(biāo);另外,睪酮(Testosterone,T)、雌二醇(Estradiol,E2)和T/E2水平異常與雄性不育關(guān)系密切[3];同時(shí),G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein coupled estrogen receptor,GPER)既能夠通過(guò)雌激素介導(dǎo)快速非基因組效應(yīng),也能夠間接調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄活性,調(diào)控雄性生殖細(xì)胞增殖與分化[4]。因此,我們將從行為學(xué)、雌雄激素水平及睪丸GPER蛋白表達(dá)等方面,對(duì)BPA致雄性生殖障礙作用機(jī)制與腎虛不育的相關(guān)性進(jìn)行比較,以探討B(tài)PA導(dǎo)致的生殖障礙是否屬于腎虛不育的范疇,不僅可為防治BPA導(dǎo)致的雄性生殖障礙,而且可為男性不育的治療提供新的思路與策略。第一部分:BPA與腎虛致生殖障礙小鼠的行為學(xué)改變目的:觀察實(shí)驗(yàn)小鼠行為學(xué)改變,探討B(tài)PA致雄性生殖障礙與腎虛不育的相關(guān)性。方法:1)將小鼠置于代謝籠中,監(jiān)測(cè)小鼠每日體重、睪丸重量、飲水量和尿量變化。2)采用高架十字迷宮裝置,通過(guò)計(jì)算機(jī)數(shù)字化采樣和分析技術(shù)檢測(cè)各組小鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)所占總進(jìn)入長(zhǎng)臂的百分比以及開(kāi)臂滯留時(shí)間所占總測(cè)試時(shí)間的百分比,評(píng)價(jià)小鼠驚恐和焦慮程度,以判斷其活動(dòng)度與驚恐程度。3)采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)儀器,通過(guò)數(shù)據(jù)分析系統(tǒng),自動(dòng)分析小鼠活動(dòng)度,檢測(cè)小鼠中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間百分比,評(píng)價(jià)小鼠活動(dòng)和焦慮程度,以判斷其活動(dòng)度與驚恐程度。4)將小鼠置于長(zhǎng)、寬為65cm×50cm長(zhǎng)方形水池中,水深50cm,采用負(fù)重游泳方式,于小鼠尾根部下3 cm處固定相當(dāng)于小鼠5%體質(zhì)量的鉛絲,使其自行游泳,以淹沒(méi)入水中5 s并且連續(xù)3次者為游泳力竭表現(xiàn),記錄各組小鼠力竭時(shí)間,評(píng)價(jià)小鼠的耐力。結(jié)果:1)與正常組相比,BPA組小鼠體質(zhì)量明顯減輕(P0.05),睪丸重量亦明顯減輕(P0.01)。與BPA組相比,腎陽(yáng)虛組小鼠體質(zhì)量無(wú)明顯變化(P0.05),睪丸重量雖有增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);腎陰虛組小鼠體質(zhì)量明顯減輕(P0.01),睪丸重量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2)與正常組相比,BPA組與腎陽(yáng)虛組小鼠飲水量于造模第5天開(kāi)始,呈下降趨勢(shì)(P0.05),兩組小鼠尿量從第6天開(kāi)始均顯著增加(P0.05),兩組之間無(wú)顯著性差異(P0.05)。與BPA組比較,腎陰虛組小鼠于造模第3天開(kāi)始飲水量明顯增多(P0.05),尿量則無(wú)顯著性差異(P0.05)。3)與正常組相比,BPA組小鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)和滯留時(shí)間百分比明顯減少(P0.01);與BPA組相比,腎陽(yáng)虛組小鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)和滯留時(shí)間百分比無(wú)明顯變化(P0.05),腎陰虛組小鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)百分比明顯增加(P0.01),而開(kāi)臂滯留時(shí)間百分比無(wú)明顯變化(P0.05)。4)與正常組相比,BPA組小鼠中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)減少(P0.05),中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間百分比亦明顯減少(P0.01)。與BPA組相比,腎陽(yáng)虛組小鼠中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)顯著減少(P0.05),中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間百分比無(wú)明顯變化(P0.05);腎陰虛組小鼠中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)明顯減少(P0.01),中央?yún)^(qū)滯留時(shí)間百分比顯著增加(P0.05)。5)與正常組相比,BPA組小鼠游泳力竭時(shí)間明顯縮短(P0.01)。與BPA組相比,腎陽(yáng)虛組小鼠游泳力竭時(shí)間變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而腎陰虛組小鼠游泳力竭時(shí)間顯著增加(P0.05)。6)與正常組相比,BPA組和腎陽(yáng)虛組小鼠均出現(xiàn)了更為明顯的畏寒、蜷縮,毛發(fā)干枯、無(wú)光澤、并出現(xiàn)稀疏脫落的現(xiàn)象,從水中撈出到毛發(fā)完全變干的時(shí)間也明顯延長(zhǎng),而腎陰虛組毛發(fā)干枯、無(wú)光澤、并出現(xiàn)稀疏脫落,但無(wú)明顯畏寒、蜷縮的表現(xiàn)。結(jié)論:BPA組與腎陽(yáng)虛組小鼠體質(zhì)量、睪丸重量、飲水量及尿量等方面改變相似,而腎陰虛小鼠的體質(zhì)量下降更為顯著,飲水量也增加明顯,但尿量較前兩組減少。BPA組與腎陽(yáng)虛組小鼠均出現(xiàn)驚恐狀態(tài)、活動(dòng)度減少及耐力下降,并伴毛發(fā)干枯、無(wú)光澤、并出現(xiàn)稀疏脫落等行為學(xué)表現(xiàn);而腎陰虛組也出現(xiàn)了驚恐狀態(tài),活動(dòng)次數(shù)增多,雖耐力也下降,但較BPA組與腎陽(yáng)虛組增加,并出現(xiàn)毛發(fā)干枯、無(wú)光澤、稀疏脫落等,但無(wú)明顯畏寒、蜷縮的表現(xiàn)。由此得出,BPA導(dǎo)致雄性小鼠生精障礙模型與腎陽(yáng)虛不育模型更為相似。第二部分:BPA與腎虛致生殖障礙小鼠精液質(zhì)量和雌雄激素水平的變化目的:檢測(cè)小鼠精子數(shù)量、精子活動(dòng)率和畸形精子百分率及血清T、E2及T/E2,探討B(tài)PA與腎虛誘導(dǎo)生殖障礙小鼠在精液質(zhì)量和雌雄激素水平的相關(guān)性。方法:1)采用羅氏化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清T、E2、并計(jì)算T/E2的比值。2)3)將輸精管內(nèi)精液擠出,并將附睪尾剪碎,加入3ml生理鹽水,游離精子,制成精子懸液,在37℃水浴中孵育,使其充分液化。將精子懸液置于全自動(dòng)精子分析儀(SQAV)進(jìn)行分析,檢測(cè)精子計(jì)數(shù)、精子百分率、精子畸形率。將各組雄性小鼠與發(fā)情期成年雌性小鼠同籠,雌雄比例為3:1,觀察檢測(cè)同雄鼠育仔數(shù)。結(jié)果:1)與正常組相比,BPA組小鼠血清T和T/E2比值明顯降低(P0.01),E2變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與BPA組比較,腎陽(yáng)虛組小鼠血清T變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),E2略有降低,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),T/E2比值升高,(P0.05);腎陰虛組小鼠血清T明顯升高(P0.01),E2及T/E2比值均升高(P0.05)。2)與正常組相比,BPA組小鼠精子計(jì)數(shù)、活動(dòng)精子百分率明顯降低,而精子畸形百分率增加(P0.01)。與BPA組比較,腎陽(yáng)虛組小鼠精子數(shù)量與精子畸形率變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但活動(dòng)精子百分率增加(P0.05);腎陰虛組小鼠精子數(shù)量增加明顯(P0.01),活動(dòng)精子百分率顯著增加(P0.05),精子畸形率降低(P0.05)。3)與正常組相比,BPA組平均每只雄鼠與雌鼠育仔數(shù)為3.8只,且其中有4只雌鼠未懷孕(P0.05)。與BPA組相比,腎陽(yáng)虛組平均每只雄鼠與雌鼠育仔數(shù)為4.33只,其中有4只雌鼠未懷孕,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);腎陰虛組平均每只雄鼠與雌鼠育仔數(shù)為6.46只,其中有4只雌鼠未懷孕(P0.05)。結(jié)論:BPA組與腎陽(yáng)虛組小鼠血清T降低,而E2變化不顯,T/E2比值顯著下降;與BPA組相比,腎陰虛組小鼠T、E2及T/E2比值均增加;BPA組與腎陽(yáng)虛組小鼠精子計(jì)數(shù)減少,精子畸形百分率增加,BPA組活動(dòng)精子百分率明顯低于腎陽(yáng)虛組小鼠;而腎陰虛組小鼠精子數(shù)量、活動(dòng)精子百分率及精子畸形率均增加。在育仔數(shù)方面,BPA組與腎陽(yáng)虛組相近;腎陰虛組則較BPA組增加。由此得出,BPA組與腎陽(yáng)虛組在血清T、E2和T/E2以及精子計(jì)數(shù)和精子畸形百分率具有相關(guān)性。第三部分:GPER在BPA與腎虛致生殖障礙小鼠睪丸的表達(dá)目的:觀察睪丸GPER表達(dá),探討B(tài)PA與腎虛致生精障礙小鼠發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性。方法:1)采用HE染色法,觀察睪丸結(jié)構(gòu)變化。2)采用免疫組化染色(SABC)法,觀察睪丸GPER的定位及表達(dá)。3)采用免疫熒光染色法,觀察睪丸GPER表達(dá),并比較。結(jié)果:1)與正常組相比,BPA組、腎陰虛組和腎陽(yáng)虛組小鼠睪丸曲細(xì)精管均呈不同程度的官腔壁受損、變薄,基膜連續(xù)性受到損壞,且生殖細(xì)胞呈雜亂無(wú)序排列,間質(zhì)細(xì)胞分布不均勻,生精上皮細(xì)胞層減少,腔內(nèi)精子數(shù)量減少。2)GPER在小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞有表達(dá),其免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)位于間質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)及胞膜內(nèi),細(xì)胞核內(nèi)為陰性,在曲細(xì)精管內(nèi)的支持細(xì)胞及各級(jí)生精細(xì)胞均未見(jiàn)表達(dá)。3)正常組小鼠睪丸GPER呈陽(yáng)性表達(dá),熒光較弱,但可清楚可見(jiàn)(+);BPA組GPER呈過(guò)高表達(dá),熒光明亮,清晰可見(jiàn)(+++),與正常對(duì)照組相比有顯著差異(P0.05);腎陽(yáng)虛組GPER同樣呈過(guò)高表達(dá),熒光明亮,清晰可見(jiàn)(+++),與BPA組相比無(wú)顯著性差異(P0.05);腎陰虛組GPER表達(dá)下調(diào),熒光較暗,但清晰可見(jiàn)(+),與BPA組相比明顯減弱(P0.05)。陰性對(duì)照無(wú)熒光表達(dá)(-)。結(jié)論:BPA組、腎陽(yáng)虛組及腎陰虛組小鼠均出現(xiàn)了睪丸組織結(jié)構(gòu)均受損。GPER表達(dá)于睪丸間質(zhì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜上,腎陽(yáng)虛組小鼠睪丸GPER表達(dá)明顯上調(diào)、清晰可見(jiàn)與BPA組相近,與BPA組相比,腎陰虛組小鼠睪丸GPER雖呈陽(yáng)性,但表達(dá)量明顯下調(diào)。由此得出,BPA與腎陽(yáng)虛導(dǎo)致的生精障礙小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞GPER表達(dá)上調(diào),引起性激素水平紊亂,精子質(zhì)量下降,導(dǎo)致雄性生殖障礙。
【關(guān)鍵詞】：BPA 腎虛 行為學(xué) 精液質(zhì)量 GPER 相關(guān)性
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R698.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-18
• 前言18-19
• 文獻(xiàn)回顧19-30
• 第一部分 BPA與腎虛致生精障礙小鼠行為學(xué)改變30-39
• 引言30
• 1 材料30-31
• 2 方法31-33
• 3 結(jié)果33-36
• 4 結(jié)論36
• 5 討論36-39
• 第二部分 BPA與腎虛致生精障礙小鼠的精液質(zhì)量及雌雄激素水平39-45
• 引言39
• 1 材料39-40
• 2 方法40
• 3 結(jié)果40-42
• 4 結(jié)論42
• 5 討論42-45
• 第三部分 GPER在BPA與腎虛致生精障礙小鼠睪丸的表達(dá)45-54
• 引言45
• 1 材料45-46
• 2 方法46-47
• 3 結(jié)果47-52
• 4 結(jié)論52
• 5 討論52-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 附錄61-64
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果64-65
• 致謝65

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 白端;推拿治療腎虛型早泄59例[J];按摩與導(dǎo)引;2001年05期

2 馮小新;高恒;;腎虛型老年腦血管性癡呆臨床治療觀察[J];中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué);2006年03期

3 宮建英;中藥配合耳穴電針治療腎虛閉經(jīng)21例[J];湖北中醫(yī)雜志;1997年02期

4 董立娜;耿金鳳;張蕾;;自制排卵丸治療腎虛型排卵障礙性不孕癥216例臨床研究[J];中醫(yī)臨床研究;2011年24期

5 徐珉;顧春曉;李丹顏;黃健玲;;腎虛與不孕癥相關(guān)性淺探[J];新中醫(yī);2008年07期

6 梁曉陽(yáng);李駿暉;梁美芳;吳銀嬌;黃偉欣;;腎虛對(duì)噪聲作業(yè)工人聽(tīng)力的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志;2007年04期

7 曾錦蕙,張玉珍,羅頌平;腎虛不孕癥的中醫(yī)臨床研究進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2001年05期

8 焦桂娥;;自擬補(bǔ)腎活血助孕方治療腎虛不孕癥的療效觀察[J];臨床合理用藥雜志;2010年16期

9 趙明才;;腎虛的研究狀況[J];廣州中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年02期

10 譚幸福;腎虛型婦科病證治舉隅[J];四川中醫(yī);2001年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 熊源清;熊建勇;;“腎虛穴區(qū)”壓診對(duì)腎虛型疾病診斷的臨床意義——(附100例報(bào)告)[A];四診研究論文匯編[C];2000年

2 張梅麗;王永華;蔣金星;;腎虛對(duì)豚鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射及耳蝸肌動(dòng)蛋白的影響研究[A];世界中聯(lián)耳鼻喉口腔專業(yè)委員會(huì)換屆大會(huì)及第三次學(xué)術(shù)年會(huì)暨中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)耳鼻喉科分會(huì)第十七次學(xué)術(shù)交流會(huì)暨廣東省中醫(yī)及中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)耳鼻喉科學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 彭勃;前列腺炎不等于“腎虛”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李淑云;補(bǔ)腎法對(duì)腎虛排卵抑制模型大鼠的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

2 羅頌平;腎主生殖的中醫(yī)理論探討與補(bǔ)腎法防治腎虛生殖障礙的機(jī)理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2005年

3 趙紅艷;腎虛型自然流產(chǎn)蛻膜黃體效應(yīng)、TGF-β1表達(dá)及補(bǔ)腎中藥對(duì)流產(chǎn)大鼠干預(yù)的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 董海軍;雙酚A對(duì)雄性小鼠生殖和睪丸GPER表達(dá)的影響及與腎虛不育的相關(guān)性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 何璇;186例腎虛型保胎病例治療效果的回顧性分析[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

3 郭林凱;自身抗體與腎虛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

4 靳達(dá)明;調(diào)補(bǔ)助孕湯治療腎虛型不孕的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

5 黃力婧;中藥治療腎虛型和腎虛血熱型早期先兆流產(chǎn)的臨床療效觀察[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 孟聰;腎虛型自然流產(chǎn)母胎遺傳易感性的實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

7 任熙;健康受試者與腎虛型抑郁癥患者識(shí)別面部表情的功能影像學(xué)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

8 盧標(biāo)清;腎虛對(duì)聽(tīng)力影響的臨床及實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2000年

9 何姍;益腎導(dǎo)痰湯對(duì)多囊卵巢綜合征性不孕（腎虛痰瘀證）患者中醫(yī)證素的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2011年

10 康欣;滋腎疏肝法配合黃體酮對(duì)腎虛肝郁型早期先兆流產(chǎn)的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：554656