本文關(guān)鍵詞：C-SRC基因?qū)δI癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其臨床意義研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]原癌基因c-Src與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),本課題組前期發(fā)現(xiàn)CXCR4入核與腎癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其入核后可能與c-Src相互作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,本課題旨在利用基因敲減技術(shù)研究慢病毒c-Src shRNA對(duì)腎癌細(xì)胞的影響及其臨床意義,進(jìn)一步完善CXCL12/CXCR4生物軸信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究,為臨床制定腎細(xì)胞癌靶向治療策略提供理論基礎(chǔ)。[研究方法]本課題從以下三個(gè)方面對(duì)研究目的加以驗(yàn)證：1.制備慢病毒介導(dǎo)的c-Src shRNA并利用RT-PCR和Western blot在mRNA、蛋白水平驗(yàn)證基因沉敲減效果；2.體外實(shí)驗(yàn)CCK8細(xì)胞增殖檢測(cè)、Transwel、流式細(xì)胞技術(shù)等驗(yàn)證c-Src基因敲減后腎癌細(xì)胞株增殖活性、侵襲遷移、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等指標(biāo)的變化情況；3.利用免疫組化、組織芯片等技術(shù),檢測(cè)c-Src基因在腎癌組織中的表達(dá)情況,并結(jié)合臨床指標(biāo)及預(yù)后,探討C-SRC基因的臨床意義。[結(jié)果]1、從構(gòu)建的3條慢病毒c-Src shRNA成功篩選出一條敲減效率達(dá)73%的C-SRC shRNA慢病毒,經(jīng)RT-PCR和Western blot驗(yàn)證能顯著抑制A498-EGFP、A498-EGFP-CXCR4細(xì)胞中C-SRC基因的mRNA、蛋白表達(dá),同時(shí)也抑制了CXCR4基因mRNA、蛋白表達(dá)；2、穩(wěn)轉(zhuǎn)A498-EGFP-SRC shRNA和A498-EGFP-CXCR4-SRC shRNA腎癌細(xì)胞株和陰性對(duì)照組相比細(xì)胞的增殖活性及侵襲遷移能力均下降,細(xì)胞周期出現(xiàn)S期阻滯,細(xì)胞凋亡差異不明顯；3、組織芯片標(biāo)本中c-src表達(dá)量與患者的預(yù)后相關(guān),c-src表達(dá)不同患者間生存期存在明顯差異,c-src表達(dá)量高的患者預(yù)后更差。[結(jié)論]c-Src基因敲減后腎癌細(xì)胞的C-SRC基因的mRN A、蛋白表達(dá)降低,同時(shí)伴有CXCR4基因mRNA、蛋白表達(dá)降低,進(jìn)一步論證了CXCR4入核后可能與c-Src存在相互作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,體外實(shí)驗(yàn)表明c-Src基因敲減后腎癌細(xì)胞生物學(xué)活性降低,且組織芯片中c-Src表達(dá)量高的腎癌患者的生存期明顯縮短,因此,c-Src基因有望成為腎癌治療的新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：c-SRC 腎細(xì)胞癌 CXCR4 基因敲減 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-15
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分 慢病毒載體介導(dǎo)的C-SRC shRNA基因的制備及敲減效果的驗(yàn)證15-41
• 一、材料15-16
• 二、方法16-27
• 三、結(jié)果27-38
• 四、討論38
• 五、結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-41
• 第二部分 C-SRC基因敲減后對(duì)人腎癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響41-54
• 一、材料41-42
• 二、方法42-46
• 三、結(jié)果46-52
• 四、討論52
• 五、結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-54
• 第三部分 C-SRC基因在腎癌組織的表達(dá)及與臨床指標(biāo)的關(guān)系54-70
• 一、材料54-56
• 二、方法56-57
• 三、結(jié)果57-67
• 四、討論67-68
• 五、結(jié)論68-69
• 參考文獻(xiàn)69-70
• 文獻(xiàn)綜述70-80
• 參考文獻(xiàn)76-80
• 在讀期發(fā)表論文和參加科研工作情況說明80-81
• 致謝81-82

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 龐霞;李晟磊;趙志華;趙阿紅;張紅新;高冬玲;;食管鱗狀細(xì)胞癌組織中FAK、Paxillin和MMP-9蛋白的表達(dá)及臨床意義[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年14期

2 趙志華;龐霞;李晟磊;趙阿紅;張紅新;高冬玲;;食管鱗狀細(xì)胞癌組織中FAK和paxillin的表達(dá)[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 莢德水;肝細(xì)胞癌基因組拷貝數(shù)畸變區(qū)域內(nèi)相關(guān)基因的功能及分子機(jī)理研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 蔡舟;PEAK1在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床關(guān)系研究[D];中南大學(xué);2013年

3 江雪梅;非受體酪氨酸激酶Src在肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 何衛(wèi)華;粘著斑激酶及肝癌缺失基因-1在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及其意義[D];鄭州大學(xué);2010年

2 仲?gòu)V生;乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中paxillin和caspase-3的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：C-SRC基因?qū)δI癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其臨床意義研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：464915