發(fā)布時(shí)間：2017-06-17 08:37

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)的惡性腫瘤之一,發(fā)病率約占全部腎癌的70-75%。cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB),是細(xì)胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子。它與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的CRE(cAMP response element)序列結(jié)合后,激活靶基因的轉(zhuǎn)錄活性,從而參與調(diào)控細(xì)胞周期、增殖和遷移等多種細(xì)胞功能。新近研究發(fā)現(xiàn),CREB蛋白水平在部分癌組織和細(xì)胞中呈顯著性高表達(dá)。我們的前期研究也發(fā)現(xiàn),阻斷CREB與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的結(jié)合能顯著性抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),和抗癌藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡。由此可見(jiàn),CREB極有可能是機(jī)體內(nèi)的一種原癌基因。然而,CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的作用及其分子機(jī)制尚不清楚。本研究首先檢測(cè)腎癌和癌旁組織、腎上皮細(xì)胞(HK-2)和腎癌細(xì)胞系(ACHN、786-O、OS-RC-2)中pCREB和total CREB(tCREB)的表達(dá)情況;其次,構(gòu)建定點(diǎn)突變133位絲氨酸的重組質(zhì)粒和siRNA轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞系,降低細(xì)胞內(nèi)pCREB水平;第三,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究pCREB與腎癌細(xì)胞增殖的關(guān)系;第四,劃痕和transwell實(shí)驗(yàn)探討pCREB對(duì)腎癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響、以及免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)絲狀偽足在腎癌細(xì)胞遷移中的作用;最后,western blot、生物信息學(xué)和chip實(shí)驗(yàn)分析pCREB介導(dǎo)腎癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),pCREB在腎癌組織及腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)顯著性高于癌旁組織和HK-2細(xì)胞;降低pCREB水平后,腎癌細(xì)胞的體外生長(zhǎng)和裸鼠成瘤能力顯著性被抑制;在降低腎癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的同時(shí),伴隨著MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)的減少、以及絲狀偽足的消失。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),pCREB通過(guò)調(diào)控EMT相關(guān)蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Fibronectin)的表達(dá)影響腎癌轉(zhuǎn)移。有趣的是,pCREB水平高低并不影響Vimentin的蛋白表達(dá)和纖維排列。生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),Fibronectin啟動(dòng)子區(qū)域存在CRE序列,而Vimentin的啟動(dòng)子區(qū)僅含有CRE-BP結(jié)合位點(diǎn);chip實(shí)驗(yàn)證實(shí)了pCREB能直接結(jié)合Fibronectin基因,而不調(diào)控Vimentin基因。由此可見(jiàn),降低pCREB水平能抑制腎癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。其抑制轉(zhuǎn)移的機(jī)制是通過(guò)改變細(xì)胞骨架微絲纖維的重排和調(diào)控上皮間質(zhì)化相關(guān)蛋白的表達(dá)。然而,與間質(zhì)化有關(guān)的vimentin不參與此過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：CREB 細(xì)胞骨架 上皮間質(zhì)化 腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線(xiàn)11-13
• 1.1 研究?jī)?nèi)容11-12
• 1.2 技術(shù)路線(xiàn)12-13
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法13-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.1.1 組織標(biāo)本13
• 2.1.2 細(xì)胞株13
• 2.1.3 裸鼠13
• 2.1.4 主要試劑13-15
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-26
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16
• 2.2.2 慢病毒系統(tǒng)包裝實(shí)驗(yàn)16-19
• 2.2.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA19-20
• 2.2.4 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)20
• 2.2.5 裸鼠皮下注射實(shí)驗(yàn)20
• 2.2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)20-22
• 2.2.7 劃痕實(shí)驗(yàn)22-23
• 2.2.8 Transwell實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.9 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.10 Chip實(shí)驗(yàn)23-25
• 2.2.11統(tǒng)計(jì)分析25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-37
• 3.1 在腎癌組織和細(xì)胞系中pCREB被顯著性上調(diào)26
• 3.2 降低pCREB水平抑制腎癌發(fā)生26-29
• 3.3 降低pCREB水平抑制腎癌細(xì)胞的遷移和侵襲29-33
• 3.4 pCREB水平減少抑制腎癌細(xì)胞絲狀偽足的形成33
• 3.5 CREB介導(dǎo)的腎癌細(xì)胞遷移并不通過(guò)Vimentin調(diào)控33-37
• 4 討論37-40
• 5 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 附錄A 綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 在學(xué)研究成果52-53
• 致謝53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳曉敏;郭俊明;樂(lè)東海;夏天;李克強(qiáng);;上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化:腫瘤轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：457802