本文關鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腎細胞癌是泌尿系統(tǒng)的惡性腫瘤之一,發(fā)病率約占全部腎癌的70-75%。cAMP反應元件結合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB),是細胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子。它與靶基因啟動子區(qū)域的CRE(cAMP response element)序列結合后,激活靶基因的轉(zhuǎn)錄活性,從而參與調(diào)控細胞周期、增殖和遷移等多種細胞功能。新近研究發(fā)現(xiàn),CREB蛋白水平在部分癌組織和細胞中呈顯著性高表達。我們的前期研究也發(fā)現(xiàn),阻斷CREB與細胞增殖相關基因的結合能顯著性抑制腫瘤細胞的生長,和抗癌藥物誘導的腫瘤細胞凋亡。由此可見,CREB極有可能是機體內(nèi)的一種原癌基因。然而,CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的作用及其分子機制尚不清楚。本研究首先檢測腎癌和癌旁組織、腎上皮細胞(HK-2)和腎癌細胞系(ACHN、786-O、OS-RC-2)中pCREB和total CREB(tCREB)的表達情況;其次,構建定點突變133位絲氨酸的重組質(zhì)粒和siRNA轉(zhuǎn)染腎癌細胞系,降低細胞內(nèi)pCREB水平;第三,體內(nèi)外實驗研究pCREB與腎癌細胞增殖的關系;第四,劃痕和transwell實驗探討pCREB對腎癌細胞遷移和侵襲的影響、以及免疫熒光實驗檢測絲狀偽足在腎癌細胞遷移中的作用;最后,western blot、生物信息學和chip實驗分析pCREB介導腎癌轉(zhuǎn)移的分子機制。結果發(fā)現(xiàn),pCREB在腎癌組織及腎癌細胞系中的表達顯著性高于癌旁組織和HK-2細胞;降低pCREB水平后,腎癌細胞的體外生長和裸鼠成瘤能力顯著性被抑制;在降低腎癌細胞遷移和侵襲能力的同時,伴隨著MMP-2和MMP-9蛋白表達的減少、以及絲狀偽足的消失。進一步研究發(fā)現(xiàn),pCREB通過調(diào)控EMT相關蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Fibronectin)的表達影響腎癌轉(zhuǎn)移。有趣的是,pCREB水平高低并不影響Vimentin的蛋白表達和纖維排列。生物信息學軟件預測發(fā)現(xiàn),Fibronectin啟動子區(qū)域存在CRE序列,而Vimentin的啟動子區(qū)僅含有CRE-BP結合位點;chip實驗證實了pCREB能直接結合Fibronectin基因,而不調(diào)控Vimentin基因。由此可見,降低pCREB水平能抑制腎癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。其抑制轉(zhuǎn)移的機制是通過改變細胞骨架微絲纖維的重排和調(diào)控上皮間質(zhì)化相關蛋白的表達。然而,與間質(zhì)化有關的vimentin不參與此過程。
【關鍵詞】：CREB 細胞骨架 上皮間質(zhì)化 腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 研究內(nèi)容和技術路線11-13
• 1.1 研究內(nèi)容11-12
• 1.2 技術路線12-13
• 2 實驗材料和方法13-26
• 2.1 實驗材料13-16
• 2.1.1 組織標本13
• 2.1.2 細胞株13
• 2.1.3 裸鼠13
• 2.1.4 主要試劑13-15
• 2.1.5 實驗儀器15-16
• 2.2 實驗方法16-26
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)16
• 2.2.2 慢病毒系統(tǒng)包裝實驗16-19
• 2.2.3 瞬時轉(zhuǎn)染siRNA19-20
• 2.2.4 細胞增殖實驗20
• 2.2.5 裸鼠皮下注射實驗20
• 2.2.6 Western blot實驗20-22
• 2.2.7 劃痕實驗22-23
• 2.2.8 Transwell實驗23
• 2.2.9 免疫熒光染色實驗23
• 2.2.10 Chip實驗23-25
• 2.2.11統(tǒng)計分析25-26
• 3 實驗結果26-37
• 3.1 在腎癌組織和細胞系中pCREB被顯著性上調(diào)26
• 3.2 降低pCREB水平抑制腎癌發(fā)生26-29
• 3.3 降低pCREB水平抑制腎癌細胞的遷移和侵襲29-33
• 3.4 pCREB水平減少抑制腎癌細胞絲狀偽足的形成33
• 3.5 CREB介導的腎癌細胞遷移并不通過Vimentin調(diào)控33-37
• 4 討論37-40
• 5 結論40-41
• 參考文獻41-44
• 附錄A 綜述44-52
• 參考文獻49-52
• 在學研究成果52-53
• 致謝53

【參考文獻】

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1 陳曉敏;郭俊明;樂東海;夏天;李克強;;上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化:腫瘤轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控機制[J];中國細胞生物學學報;2013年09期

  本文關鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：457802