本文關(guān)鍵詞：miR-155在糖尿病腎病發(fā)病中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的近年來,隨著全球范圍內(nèi)糖尿病發(fā)病率的不斷增加,在西方國家,糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)已成為導(dǎo)致終末期腎臟病(End-stage renal disease,ESRD)的首要病因,也是引起糖尿病患者死亡的主要原因。在我國,這一比例也在逐年遞增。腎小球肥大是DN最為突出的早期表現(xiàn),系膜基質(zhì)增多、系膜區(qū)增寬,細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)異常積聚及由此導(dǎo)致的腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化是DN進展的關(guān)鍵特征。然而,迄今為止,DN的發(fā)病機制仍不完全清楚,現(xiàn)有的治療手段尚不足,因此,探討DN的發(fā)病機制、尋找DN新相關(guān)致病基因,將對臨床預(yù)防、診斷和治療DN具有重要意義。micro RNA(miRNA)是人類新近發(fā)現(xiàn)的一類長約21~24bp的內(nèi)源性、非編碼單鏈小RNA,通過與靶mRNA的3'端非翻譯區(qū)(3'-UTRs)序列配對互補結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平引起靶mRNA降解和(或)蛋白翻譯抑制而參與生物體的多種生理及病理過程。血清、血漿、尿液等多種體液中發(fā)現(xiàn)的miRNA是細胞外miRNA的特殊存在方式,具有體液循環(huán)中的穩(wěn)定性、細胞間的穿梭性以及不同組織來源的特異性等特點,使得體液miRNA有望作為一種新的生物標(biāo)志物,從而有助于疾病的早期診斷、臨床療效及預(yù)后狀況的評估。目前,已有大量的研究報道,多種miRNA與DN的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。然而,其參與DN發(fā)病的具體病理機制尚不十分明確,仍需有待于進一步研究。在課題組前期研究中,通過miRNA芯片、RT-PCR等方法對2型DN患者血清miRNA表達譜分析發(fā)現(xiàn),miR-155在DN患者血清中的表達水平顯著異常,提示miR-155可能與DN發(fā)病有關(guān)。應(yīng)用生物信息學(xué)方法,并結(jié)合文獻檢索發(fā)現(xiàn)miR-155的目標(biāo)靶基因為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子-1(ETS1),后者在基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)參與基質(zhì)調(diào)控中起關(guān)鍵性作用。為此,本研究選擇糖尿病腎病背景下的db/db小鼠,通過動態(tài)觀察miR-155及其靶基因ETS1在DN小鼠血清或腎組織中的表達變化,以探討DN發(fā)展過程中miR-155與ETS1和腎組織病理學(xué)特征的關(guān)系。研究對象和方法選取4周齡的2型糖尿病腎病db/db小鼠(實驗組),同周齡db/m小鼠(對照組)作為實驗動物對象,分別檢測各組、各時段小鼠血清mir-155、腎組織mir-155和靶基因ets1的動態(tài)表達變化,并明確分析mir-155與腎組織病理學(xué)特征和臨床生化指標(biāo)的相關(guān)性。1.生化指標(biāo)檢測每周監(jiān)測小鼠的隨機血糖,在4、8、12、16周齡時,隨機抽取對照組和模型組小鼠各5只,記錄各組小鼠體重(bw),留取血標(biāo)本和24h尿液,并檢測血肌酐(scr)、尿素氮(bun)和24h尿蛋白量(uae)變化。2.腎臟組織形態(tài)學(xué)觀察通過he、pasm和masson染色,光鏡下觀察各組小鼠腎組織的病理學(xué)改變,以明確db/db小鼠dn的病理進展過程。3.mir-155和ets1mrna的表達采用實時熒光定量rt-pcr法檢測兩組小鼠血清mir-155、腎組織mir-155和靶基因ets1表達的動態(tài)變化。4.ets1蛋白的表達采用免疫組織化學(xué)染色法觀察靶蛋白ets1在各組、各時段小鼠腎臟組織的表達和分布情況。研究結(jié)果1.db/db小鼠生化指標(biāo)變化4周齡db/db小鼠出現(xiàn)肥胖,bw增加(p0.05),而glu、scr、bun及uae水平雖有所升高,但與db/m對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。8周齡時,db/db小鼠bw、glu、scr和bun均明顯增高(p0.05,p0.01),并出現(xiàn)了蛋白尿,說明此時db/db小鼠已發(fā)生dn。此后,隨周齡的增加,db/db小鼠glu、scr、bun及uae水平進一步增高(p0.05,p0.01)。2.db/db小鼠腎組織病理改變he、pasm和masson染色顯示,不同周齡的db/m小鼠腎小球及系膜區(qū)未見明顯異常改變。db/db小鼠4周齡時,其腎臟未見明顯異常,8周齡后,出現(xiàn)腎小球肥大、系膜細胞增多,伴毛細血管基底膜增厚。達16周齡時,可見腎小球與bowman囊的壁層有黏連,出現(xiàn)病變腎小球系膜基質(zhì)增生和硬化,伴節(jié)段性腎小管擴張、萎縮、腎間質(zhì)內(nèi)炎性細胞浸潤及纖維化形成。3.db/db小鼠腎組織、血清mir-155表達rt-pcr檢測結(jié)果顯示,與同周齡db/m相比,4周齡db/db小鼠的腎臟mir-155水平未見明顯變化(p0.05),8周齡小鼠腎組織mir-155表達顯著高于同周齡的db/m小鼠,隨周齡的延長,mir-155表達明顯升高(p0.05)。與腎臟中的表達結(jié)果相一致,8,12,16周齡db/db小鼠血清mir-155的表達均高于同周齡的db/m小鼠,且隨周齡的延長,mir-155表達亦逐漸升高(p0.05),而同周齡db/m小鼠則無明顯變化。4.db/db小鼠腎組織ets1mrna表達與同周齡db/m小鼠相比,8、12及16周齡db/db小鼠腎臟ets1mrna表達明顯降低,且隨周齡的增加,ets1mrna的表達呈下降趨勢(p0.05)。5.db/db小鼠腎組織ETS1蛋白表達免疫組化染色顯示,ETS1主要定位于腎小球內(nèi)皮細胞、足細胞和腎小管上皮細胞。與同周齡db/m小鼠比較,4周齡db/db小鼠腎臟中ETS1表達量未見明顯差異,但8周齡db/db小鼠腎組織ETS1表達減弱。隨周齡的增加,ETS1表達染色呈減弱趨勢。6.db/db小鼠血清miR-155表達與生化指標(biāo)的相關(guān)性相關(guān)性分析顯示,db/db小鼠血清miR-155表達,分別與Scr、BUN、UAE的水平呈明顯相關(guān)性。結(jié)論1.miR-155在db/db小鼠血清和腎組織中表達增高,并且隨DN的進展,miR-155水平呈進行性升高。提示miR-155可能參與了DN的發(fā)病機制,血清miR-155有可能作為DN早期診斷的篩查指標(biāo)。2.db/db小鼠腎組織中ETS1mRNA和蛋白的表達降低,其表達水平隨DN的進展呈下降趨勢。提示miR-155可能通過調(diào)控ETS1而參與DN的發(fā)生、發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 micro RNA miR-155 db/db小鼠 ETS1
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-11
• 前言11-15
• 實驗動物、儀器及試劑15-17
• 1 實驗動物15
• 2 主要實驗儀器15-16
• 3 主要藥物及試劑16-17
• 實驗方法17-27
• 1 實驗動物飼養(yǎng)及分組17
• 2 實驗動物標(biāo)本采集及處理17
• 3 各項生化指標(biāo)的檢測17
• 4 腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察17-19
• 4.1 蘇木精-伊紅（HE）染色18
• 4.2 過碘酸-六胺銀（PASM）染色18-19
• 4.3 Masson染色19
• 5 RT-PCR法檢測腎組織和血清miR-155的表達19-23
• 5.1 miRNA的提取及純化19-21
• 5.2 Poly(A)加尾和逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA21-22
• 5.3 RT-PCR反應(yīng)22-23
• 6 RT-PCR法檢測腎組織ETS1mRNA的表達23-25
• 6.1 腎組織總RNA的提取及純化23
• 6.2 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA23-24
• 6.3 RT-PCR反應(yīng)24-25
• 7 免疫組織化學(xué)法檢測腎組織ETS1蛋白的表達25-26
• 8 統(tǒng)計學(xué)分析26-27
• 實驗結(jié)果27-35
• 1 一般情況觀察27
• 2 db/db小鼠生化指標(biāo)的變化27-28
• 3 db/db小鼠腎組織的病理改變28-30
• 4 db/db小鼠腎組織和血清miR-155的表達30-32
• 4.1 提取RNA濃度和純度的檢測30
• 4.2 腎組織miR-155的表達30-31
• 4.3 血清miR-155的表達31-32
• 5 db/db小鼠腎組織ETS1mRNA的表達32-33
• 6 db/db小鼠腎組織ETS1蛋白的表達33
• 7 db/db小鼠血清miR-155的表達與生化指標(biāo)的相關(guān)性33-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-42
• 英文縮寫注釋表42-43
• 文獻綜述43-51
• 參考文獻50-51
• 在校期間的研究成果51-52
• 致謝52

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王玉新,李大啟,李公寶,徐琴君;糖尿病腎病患者血清可溶性白細胞介素6受體檢測[J];上海免疫學(xué)雜志;2001年02期

2 宮雅南,劉冬年,熊玉冰,黃偉文,莊萬江;糖尿病足患者糖尿病視網(wǎng)膜病變分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2001年06期

3 顧芹,宋守君,李向陽,尤傳一;胰激肽原酶腸溶片對早期糖尿病腎病的防治作用[J];中國臨床藥學(xué)雜志;2001年06期

4 曹愛華 ,王瑛 ,李翔;杏丁治療早期糖尿病腎病療效觀察[J];遼寧實用糖尿病雜志;2001年03期

5 ;中藥治療糖尿病腎病新進展[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2001年04期

6 張桂茹;糖尿病腎病85例臨床分析[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2002年02期

7 侯建明 ,林鳳輝 ,張超群;46例2型糖尿病腎病與糖尿病自主神經(jīng)病變的關(guān)系分析[J];福建醫(yī)藥雜志;2002年04期

8 陳文霖;糖尿病飲食[J];醫(yī)療保健器具;2002年Z1期

9 孫力,許玲;2型糖尿病患者糖尿病足的危險因素分析[J];山東醫(yī)藥;2002年35期

10 ;糖尿病腎病診治研究進展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2003年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張星;許筠;蘇建平;張軍;程立志;翟曉麗;;糖尿病腎病的臨床療效對比觀察[A];第十九次全國中醫(yī)腎病學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2006年

2 楊家茂;;糖尿病腎病防治瑣談[A];全國第二屆中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病臨床進展學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

3 丁耀耿;郝桂霞;;糖尿病腎病臨床分析[A];全國第二屆中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病臨床進展學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

4 張文鎧;王志伏;王雪;孫大朋;;糖尿病腎病的治療現(xiàn)狀[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第二十一屆全國中醫(yī)腎病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2008年

5 倪青;;糖尿病腎病的中西醫(yī)結(jié)合研究[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2000年

6 孫怡;李健紅;宗紅燕;;黃芪桂枝五物湯加味治療糖尿病腎病16例[A];第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2000年

7 葉軍;;糖尿病腎病在兒童時期的早期干預(yù)[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

8 杜旭昶;孫志紅;閆春芳;劉彩虹;;疏糖丹治療2型糖尿病50例臨床分析[A];第六次中國中西醫(yī)結(jié)合糖尿病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

9 于世家;任平;馬麗佳;李小娟;鄭曙琴;武明東;劉自力;薛麗輝;;糖尿病住院患者1344例回顧性分析[A];第六次中國中西醫(yī)結(jié)合糖尿病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

10 郝效槐;魏玫都;崔立俊;;中西并蓄治療糖尿病腎病[A];第七次中國中西醫(yī)結(jié)合糖尿病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 向佳;糖尿病中醫(yī)藥防治項目立足社區(qū)[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

2 特約記者 魯海燕;逾八成公眾存在糖尿病高危因素[N];家庭醫(yī)生報;2013年

3 馬明愈;現(xiàn)代生活方式導(dǎo)致 糖尿病發(fā)病率迅速上升[N];中國婦女報;2005年

4 省立醫(yī)院內(nèi)分泌科主任醫(yī)師 侯建明;糖尿病腎病的防治[N];福建科技報;2004年

5 王文絹 范軍星;世界糖尿病日關(guān)注焦點:糖尿病并發(fā)癥[N];健康報;2003年

6 主持人 向紅丁博士;糖尿病腎病須早防早治[N];人民政協(xié)報;2002年

7 華悅;預(yù)防糖尿病，從減肥開始[N];上海中醫(yī)藥報;2004年

8 劉冬梅;肥胖糖尿病第一誘因[N];天津日報;2004年

9 劉燕玲;首部中醫(yī)專病指南定下糖尿病治則[N];健康報;2007年

10 崔昕;中藥防治糖尿病腎病有進展[N];健康時報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王曉杰;組蛋白去乙�；�4特異性促進糖尿病腎病足細胞損傷[D];山東大學(xué);2015年

2 張永;MiR-346在抗TGF-β信號途徑介導(dǎo)的糖尿病腎病發(fā)生和發(fā)展中的作用機制[D];武漢大學(xué);2015年

3 魏鳳江;高尿酸血癥、2型糖尿病及糖尿病微血管病變的群體遺傳學(xué)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 孫士杰;胱抑素C對2型糖尿病視網(wǎng)膜病變預(yù)測價值研究[D];山東大學(xué);2015年

5 魏艷紅;PKCα介導(dǎo)的EGFR降解在糖尿病腎病足細胞損傷中的作用及機制[D];華中科技大學(xué);2015年

6 龍泓竹;益氣養(yǎng)陰通絡(luò)散結(jié)方防治早期糖尿病腎病的臨床及實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 姜e，

本文編號：423708