本文關(guān)鍵詞：腎康注射液抑制高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是導(dǎo)致終末期腎功能衰竭的主要原因。腎小管間質(zhì)在DN進(jìn)展中扮演了重要角色,近端腎小管上皮細(xì)胞作為最易受損的腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞,在葡萄糖代謝紊亂環(huán)境中極易發(fā)生缺氧,氧化應(yīng)激損傷,表現(xiàn)為先增生后肥大繼而應(yīng)激性衰老。近期大量研究表明,DN早期患者腎組織中便出現(xiàn)衰老腎小管上皮細(xì)胞,同時(shí)在糖尿病早期大鼠模型腎組織中也有大量衰老腎小管上皮細(xì)胞,體外實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)高糖可加速腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老,說(shuō)明腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老是DN腎小管間質(zhì)損傷早期的重要細(xì)胞生物學(xué)事件。研究發(fā)現(xiàn)衰老的腎小管上皮細(xì)胞與腎小管萎縮,腎間質(zhì)炎癥,腎間質(zhì)纖維化,及腎功能密切相關(guān),并且衰老的腎小管上皮細(xì)胞可增加腎臟對(duì)損傷刺激的易感性,抑制正常細(xì)胞增殖從而阻止受損腎臟的修復(fù)。因此腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老在DN進(jìn)展中扮演了重要角色,防治腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老可能是延緩DN進(jìn)展的一個(gè)新策略。經(jīng)典方藥腎康注射液是由黃芪、大黃、丹參和紅花四種中藥組成的復(fù)方制劑。腎康注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20040110),于1999年經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)(YBZ08522004)用于治療慢性腎臟病。經(jīng)過(guò)大量臨床試驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)腎康注射液可明顯降低CKD患者的血肌酐,尿素氮水平,保護(hù)殘余腎功能,具有良好的有效性,安全性和遠(yuǎn)期療效。體內(nèi)外研究均發(fā)現(xiàn)腎康注射液可以顯著抑制腎臟氧化應(yīng)激損傷,抑制腎間質(zhì)纖維化。已有體外研究證明腎康注射液能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)后系膜細(xì)胞肥大和P21表達(dá)等衰老細(xì)胞特征樣改變,提示腎康注射液具有抑制高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞衰老的作用。因此,我們的研究關(guān)注腎康注射液是否具有抑制高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞衰老的作用及機(jī)制。研究方法1.原代腎小管上皮細(xì)胞提取及鑒定1.1取3周齡雄性C57小鼠斷頸處死,無(wú)菌獲取雙腎,去除腎包膜和腎蒂組織,加入II型膠原酶37°消化30min,通過(guò)雙重過(guò)濾(依次通過(guò)250uM和80uM篩網(wǎng)),置入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。1.2利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞ck-18和villin的表達(dá)鑒定腎小管上皮細(xì)胞的純度。2.建立高糖刺激腎小管上皮細(xì)胞衰老模型高糖(30mmol/l)刺激第二代腎小管上皮細(xì)胞72h后(設(shè)等滲透壓甘露醇對(duì)照組、正常糖濃度對(duì)照組)后,觀察細(xì)胞形態(tài)及免疫熒光染色p16、dcr2和sa-β-gal觀察細(xì)胞衰老情況。3.明確腎康注射液能否抑制高糖刺激后腎小管上皮細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)分組:(1)正常對(duì)照組;(2)30mmol/l高糖組;(3)等滲透壓甘露醇組;(4)30mmol/l高糖+50mg/l腎康注射液;(5)30mmol/l高糖+100mg/l腎康注射液;(6)30mmol/l高糖+200mg/l腎康注射液;(7)5mmol/l正常糖+200mg/l腎康注射液。腎康注射液和高糖培養(yǎng)腎小管細(xì)胞72h后,觀察細(xì)胞形態(tài)及免疫熒光染色檢測(cè)各組衰老指標(biāo):sahf、p16、cyclind1、dcr2和sa-β-gal表達(dá)情況。4.探明腎康注射液抑制高糖刺激后腎小管上皮細(xì)胞衰老的機(jī)制實(shí)驗(yàn)分組:(1)正常對(duì)照組;(2)30mmol/l高糖組;(3)等滲透壓甘露醇組;(4)30mmol/l高糖+200mg/l腎康注射液;(5)5mmol/l正常糖+200mg/l腎康注射液;腎康注射液和高糖培養(yǎng)腎小管細(xì)胞72h后,利用試劑盒檢測(cè)各組mda含量和sod活性。利用pcr、westernblot檢測(cè)各組klotho、sirt1、ppar-γ、p66shc以及mtor的表達(dá)水平。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用spss18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x?±s)表示,對(duì)于符合正態(tài)分布的組間比較進(jìn)行單因素方差分析(anova),結(jié)果以p0.05為相差顯著。結(jié)果1.高糖組腎小管上皮細(xì)胞明顯扁平肥大,衰老標(biāo)志p16ink4,sahf,cyclind1,dcr2和sa-β-gal明顯上調(diào),甘露醇作為等滲對(duì)照組并未引起腎小管上皮細(xì)胞衰老。而腎康注射液可以顯著下調(diào)衰老標(biāo)志p16ink4,sahf,cyclind1,dcr2和sa-β-gal的表達(dá),使細(xì)胞形態(tài)趨于正常,具有良好的量效關(guān)系。腎康注射液可以顯著緩解高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞衰老指標(biāo)的表達(dá),說(shuō)明腎康注射液可以抑制高糖誘導(dǎo)后腎小管上皮細(xì)胞的衰老,呈現(xiàn)良好的劑量依耐性。2.高糖組腎小管細(xì)胞mda含量明顯上調(diào)而sod活力明顯下降,而腎康注射液可以顯著下調(diào)mda含量明顯上調(diào)sod活力,提示腎康注射液具有抗氧化應(yīng)激的作用。3.高糖組腎小管細(xì)胞mtor和p66shc促衰老分子表達(dá)上調(diào),klotho,sirt1,ppar-γ抗衰老分子表達(dá)下調(diào),而腎康注射液可以顯著下調(diào)mtor和p66shc促衰老分子,顯著增加Klotho,Sirt1,PPAR-γ抗衰老分子表達(dá)。腎康注射液通過(guò)抑制p66Shc、mTOR的表達(dá),上調(diào)Klotho、Sirt1、PPAR-γ的表達(dá)抑制高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞的衰老。結(jié)論本研究證明了腎康注射液具有抑制高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老的作用,這一作用可能與抗氧化應(yīng)激,抑制p66Shc、m TOR的表達(dá),上調(diào)Klotho、Sirt1、PPAR-γ的表達(dá)有關(guān)。腎康注射液防止高糖誘導(dǎo)的腎小管細(xì)胞應(yīng)激性衰老的作用可作為用于糖尿病腎病治療的新策略。
【關(guān)鍵詞】：腎康注射液 應(yīng)激性衰老 腎小管上皮細(xì)胞 糖尿病腎病
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 1 前言13-15
• 2 研究方法15-21
• 3 結(jié)果21-28
• 4 討論28-30
• 全文結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 文獻(xiàn)綜述 中藥在慢性腎臟病細(xì)胞應(yīng)激性衰老中的研究進(jìn)展35-46
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 研究生期間撰寫(xiě)和發(fā)表的論文46-47
• 致謝47

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 吳雄飛,王東,劉宏,范連慧,金錫御,宋關(guān)斌,吳澤志;腎小管上皮細(xì)胞模擬缺血缺氧時(shí)黏附力的改變[J];中華腎臟病雜志;2001年06期

2 黃全勇,黃巨恩;慶大霉素對(duì)培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞毒性作用的研究進(jìn)展[J];解剖學(xué)研究;2003年01期

3 陳玲,賈汝漢,邱昌建,丁國(guó)華;脫氫抗壞血酸對(duì)高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基的影響[J];中華腎臟病雜志;2005年10期

4 李開(kāi)龍,王建民,趙玲,張建國(guó),何婭妮,楊聚榮,陳林;缺血再灌注損傷后腎小管上皮細(xì)胞的衰老演變及其意義[J];中華腎臟病雜志;2005年10期

5 羅昌霞;張永;張建鄂;李濤;;白蛋白誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2006年05期

6 宋新文;鄧存良;盛云建;陳楓;王明勇;史小玲;;外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡影響研究[J];中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

7 田少江;丁國(guó)華;陳鋮;賈俊亞;梁偉;;表面活性蛋白A調(diào)節(jié)腎小管上皮細(xì)胞巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2的表達(dá)及其機(jī)制的探討[J];中華腎臟病雜志;2006年05期

8 劉麗敏;劉華鋼;黃巨恩;李校X;肖健;;酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)腎小管上皮細(xì)胞存活與增殖的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2007年06期

9 劉華鋼;黃巨恩;劉麗敏;王慧杰;胡文娟;李校X;肖健;;酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)慶大霉素和順鉑所致腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年12期

10 楊汝春;魯盈;朱曉玲;王永鈞;;白介素-1β誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2007年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 于澄釩;黃曉波;許清泉;陳亮;胡衛(wèi)國(guó);王曉峰;;納米細(xì)菌對(duì)腎小管上皮細(xì)胞的損傷作用及晶體滯留的影響研究[A];第十七屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 劉燕;蒲蕾;楊立川;劉先蓉;樊均明;;洛伐他汀對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

3 朱加明;丁小強(qiáng);張曉麗;劉春鳳;;己糖胺通路活化介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞表型和功能的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 李健;李曉玫;王海燕;;低密度脂蛋白誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞活化介導(dǎo)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞生物學(xué)表型變化[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

5 朱吉莉;丁國(guó)華;王學(xué)玉;;血管緊張素Ⅱ通過(guò)抑制蛋白激酶B誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

6 楊曉;張春;鄧安國(guó);朱忠華;;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)積聚中的作用[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

7 張瑜;周建華;;肝素對(duì)腎小管上皮細(xì)胞膜結(jié)合補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的影響及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 楊雅麗;程曉霞;;腎小管上皮細(xì)胞凋亡在腎間質(zhì)纖維化中的作用及其防治的研究進(jìn)展[A];2009全國(guó)時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

9 譚玉莉;黃妍;楊亦彬;;魚(yú)膽汁毒素致腎小管上皮細(xì)胞死亡方式及實(shí)施干預(yù)的試驗(yàn)研究[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

10 喬f^;陳香美;吳鏑;丁瑞;師鎖柱;謝院生;洪權(quán);呂楊;王兆霞;尹忠;;衰老大鼠腎臟缺血/再灌注損傷中腎小管上皮細(xì)胞不同凋亡途徑的研究[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 華紅梅;藥損腎先“知”[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 倪s

本文編號(hào)：423723