研究背景:膀胱癌是發(fā)病率最高的人類泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,其中以膀胱移行上皮癌最為常見。目前,對于晚期膀胱腫瘤仍缺乏有效的治療方法。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(TRAIL),因其可以特異性地殺傷腫瘤細胞而不傷及正常細胞,故被認為是一種有效的抗腫瘤藥物。然而,膀胱腫瘤細胞可產(chǎn)生對TRAIL的耐藥性。近年來的研究表明,在多種腫瘤細胞系中,穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide)具有增強TRAIL誘導腫瘤細胞凋亡的作用。然而,聯(lián)合應用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯的治療方法尚未被應用于治療膀胱腫瘤,其具體分子機制也有待進一步研究。目的:為證實穿心蓮內(nèi)酯可作為TRAIL的有效增敏劑,可以用來克服人膀胱癌細胞對TRAIL的耐藥。進一步研究穿心蓮內(nèi)酯與TRAIL聯(lián)合應用,增強TRAIL誘導人膀胱癌細胞凋亡能力的分子機制。方法:在生物信息學分析部分,基于TCGA數(shù)據(jù)庫、Oncomine數(shù)據(jù)庫中膀胱上皮癌的mRNA表達數(shù)據(jù),分析目的基因在腫瘤和癌旁正常組織中的表達差異。利用基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA),評估預先定義的基因集與特定表型的相關(guān)程度。在細胞實驗部...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 膀胱癌背景知識
        1.1.1 膀胱癌概況
        1.1.2 膀胱癌治療方法簡介
    1.2 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體的背景知識
        1.2.1 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體與腫瘤的關(guān)系
        1.2.2 TRAIL和其相關(guān)的受體分子
        1.2.3 TRAIL誘導的細胞凋亡信號通路
        1.2.4 細胞對于TRAIL的敏感性和抵抗性
    1.3 穿心蓮內(nèi)酯的背景知識
        1.3.1 穿心蓮內(nèi)酯簡介
        1.3.2 穿心蓮內(nèi)酯的抗腫瘤活性
    1.4 穿心蓮內(nèi)酯與其他藥物的協(xié)同作用
    1.5 結(jié)語與前景展望
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗儀器
    2.2 實驗耗材
    2.3 實驗試劑
    2.4 生物信息學分析方法
        2.4.1 目的基因mRNA表達差異分析
        2.4.2 基因共表達分析部分
        2.4.3 GSEA基因集富集分析
    2.5 體外細胞實驗部分
        2.5.1 細胞培養(yǎng)條件
        2.5.2 MTS法檢測細胞增殖能力
        2.5.3 細胞計數(shù)法檢測細胞增殖能力
        2.5.4 MTS法測定藥物IC50(半數(shù)抑制濃度)值
        2.5.5 MTS法檢測細胞活力
        2.5.6 細胞劃痕實驗
        2.5.7 細胞克隆形成實驗
        2.5.8 BCA法標定蛋白樣品濃度
        2.5.9 免疫蛋白印跡實驗(Western blot assays)
        2.5.10 實時熒光定量PCR實驗
        2.5.11 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率
        2.5.12 細胞轉(zhuǎn)染
    2.6 統(tǒng)計學檢測方法
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 生物信息學分析部分
        3.1.1 mRNA表達差異分析
        3.1.2 單基因的基因集富集分析結(jié)果
        3.1.3 mRNA共表達表達相關(guān)性分析
        3.1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)預測
    3.2 體外細胞實驗部分
        3.2.1 在多種膀胱癌細胞系中TRAIL的IC50值測定
        3.2.2 在多種膀胱癌細胞系中穿心蓮內(nèi)酯的IC50值測定
        3.2.3 在多種膀胱癌細胞系中應用各濃度TRAIL對細胞活力的影響
        3.2.4 在多種膀胱癌細胞系中應用各濃度穿心蓮內(nèi)酯對細胞活力的影響
        3.2.5 聯(lián)合應用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對T24細胞活力的影響
        3.2.6 聯(lián)合應用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對5637細胞和UM-UC3細胞活力的影響
        3.2.7 聯(lián)合應用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對T24細胞增殖能力的影響
        3.2.8 聯(lián)合應用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對T24細胞克隆形成能力的影響
        3.2.9 聯(lián)合應用TRAIL和穿心蓮內(nèi)酯對T24細胞遷移能力的影響
        3.2.10 應用穿心蓮內(nèi)酯可增強TRAIL誘導的T24細胞凋亡
        3.2.11 聯(lián)合用藥誘導T24細胞死亡依賴于半胱天冬酶家族(Caspase family)
        3.2.12 穿心蓮內(nèi)酯通過上調(diào)死亡受體表達量來增強TRAIL誘導的細胞凋亡
        3.2.13 沉默DR4或DR5的基因表達可削弱聯(lián)合用藥對T24細胞的殺傷效果
        3.2.14 在T24細胞中穿心蓮內(nèi)酯上調(diào)DR4和DR5基因的表達依賴于P53基因
        3.2.15 在T24細胞中沉默P53基因的表達可削弱聯(lián)合用藥對細胞活力的抑制
        3.2.16 在T24細胞中沉默P53基因可降低聯(lián)合用藥誘導的細胞凋亡比率
        3.2.17 在T24細胞中穿心蓮內(nèi)酯通過抑制RelA增強TRAIL誘導的細胞凋亡
        3.2.18 抑制NF-κB的活性可增強TRAIL誘導的T24細胞凋亡和細胞活力抑制
        3.2.19 抑制NF-κB通路可提高TRAIL誘導的5637、UM-UC3細胞的凋亡比率
        3.2.20 聯(lián)合應用穿心蓮內(nèi)酯可提高TRAIL誘導的5637、UM-UC3細胞的凋亡比率
    3.3 結(jié)果討論
第4章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介以及攻讀博士期間的科研成果
致謝



本文編號：4039774