本文關(guān)鍵詞：piRABC參與膀胱癌發(fā)生發(fā)展機制初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:膀胱癌是全世界高發(fā)的惡性腫瘤之一。2012年的數(shù)據(jù)顯示,全球有429,800的膀胱癌新發(fā)病例和165,100的膀胱癌死亡病例,其中男性新發(fā)病例和死亡病例數(shù)約為女性的三倍。膀胱癌在男性中的發(fā)病率位居第六,在腫瘤導(dǎo)致的死亡中位居第九位。而在我國,膀胱癌居男性泌尿生殖系惡性腫瘤發(fā)病率第一位,居中國惡性腫瘤發(fā)病率第八位。而且,隨著我國工業(yè)化、城鎮(zhèn)化和人口老齡化的持續(xù)加速,膀胱癌的發(fā)病率和死亡率均有逐年上升的趨勢。2003-2007年,全國32個腫瘤登記地區(qū)統(tǒng)計膀胱癌發(fā)病率在不同地區(qū)和不同性別中均呈上升趨勢,膀胱癌死亡率也有比較明顯的上升趨勢。PIWI蛋白相互作用RNA(PIWI-interacting RNA,pi RNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼小RNA,它具有多種重要的生物學(xué)功能,已經(jīng)成為一個新的研究熱點。pi RNA最早是在哺乳動物的睪丸組織中發(fā)現(xiàn)的,它的長度一般是24~32個核苷酸,特異性地與PIWI蛋白結(jié)合發(fā)揮作用。自從pi RNA發(fā)現(xiàn)以來,科學(xué)家們對其研究進展迅速,已發(fā)現(xiàn)其在胚胎發(fā)育、生殖干細胞分化、表觀遺傳學(xué)調(diào)控、維持DNA完整性等方面有重要作用。pi RNA作為一類重要的參與生物學(xué)功能調(diào)節(jié)的小分子,人們除了研究其在生殖細胞系中的功能,也開始關(guān)注其與多種疾病比如癌癥之間的關(guān)聯(lián)。最近已有多篇研究報道了pi RNA與癌癥的發(fā)生發(fā)展有著密切的聯(lián)系,提示了pi RNA在參與調(diào)控癌癥發(fā)生發(fā)展中的過程中發(fā)揮了重要的作用。方法:本研究選取三對膀胱癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織,用于pi RNA芯片研究。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,q RT-PCR)技術(shù)驗證膀胱癌組織中相關(guān)pi RNA的表達水平。然后設(shè)計和合成篩選出的pi RNA的類似物,并用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)入膀胱癌細胞中,分別采用CCK-8(Cell Counting Kit 8,細胞增殖檢測試劑盒)實驗、軟瓊脂克隆形成實驗和流式細胞術(shù)等方法觀察其是否影響膀胱癌細胞的表型。在此基礎(chǔ)上,通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測pi RNA潛在的靶基因,并通過熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測相關(guān)pi RNA與靶基因3’UTR(untranslated regions,非翻譯區(qū))區(qū)的結(jié)合能力。同時采用q RT-PCR法,Western blot(免疫印跡實驗)和ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay,酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng))檢測pi RNA靶基因在膀胱癌組織和膀胱癌患者外周血中的水平。結(jié)果:按照fold change≥2,P≤0.05,篩選得到197個差異表達的pi RNA(106個上調(diào),91個下調(diào))。在這197個pi RNA中,pi R-60152的fold change最大,所以我們選擇pi R-60152作為研究對象。因其與膀胱癌相關(guān),所以我們命名其為pi RABC(pi RNA associated with bladder cancer,pi RABC)。然后采用q RT-PCR技術(shù)在25對膀胱癌組織中檢測pi RABC的表達水平,pi RABC在膀胱癌組織中低表達(P=0.003),和芯片結(jié)果一致。在CCK-8和軟瓊脂克隆形成實驗中,轉(zhuǎn)染pi RABC類似物顯著地抑制了膀胱癌細胞的增殖和克隆形成。流式細胞術(shù)顯示,轉(zhuǎn)染pi RABC類似物顯著增加膀胱癌細胞的凋亡率。為了進一步揭示pi RABC影響細胞增殖的機制,我們通過生物信息學(xué)預(yù)測其潛在的靶基因—TNFSF4(tumor necrosis factor superfamily member 4,腫瘤壞死因子超家族成員4)。熒光素酶報告基因?qū)嶒炋崾緋i RABC和TNFSF4的3’UTR區(qū)有結(jié)合。通過q RT-PCR法、Western blot和ELISA實驗檢測,TNFSF4在膀胱癌組織和膀胱癌患者血清中均呈現(xiàn)低表達,和pi RABC在膀胱癌組織中的表達水平一致。結(jié)論:在膀胱癌中,pi RABC呈顯著下調(diào),而且能影響膀胱癌細胞的增殖、克隆形成和凋亡。pi RABC可能和TNFSF4 3’UTR區(qū)結(jié)合來調(diào)控膀胱癌的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 piRNA TNFSF4 分子機制
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-28
• 結(jié)果28-38
• 討論38-41
• 小結(jié)41-42
• 參考文獻42-47
• 綜述47-65
• 參考文獻57-65
• 附錄65-73
• 附錄一、主要縮略詞中英文對照65-66
• 附錄二、膀胱癌組織中差異表達的piRNA66-72
• 附錄三、攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論著72-73
• 致謝73-74

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1 青云;英國科學(xué)家辨別出與膀胱癌有關(guān)的基因[J];中國處方藥;2004年08期

2 ;特殊激素可導(dǎo)致男性患膀胱癌幾率升高[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年11期

3 肖建利;張麗芳;劉巧莉;;白花蛇舌草治療膀胱癌1例[J];臨床合理用藥雜志;2009年08期

4 丁虹彬，余雪軒;培養(yǎng)膀胱癌細胞的新方法[J];南京醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1994年01期

5 張曉峰;劉訓(xùn)勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

6 孫宏志,凡杰,唐孝達;自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對膀胱癌細胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

7 章小平,楊紅枚,魯功成;膀胱癌穩(wěn)定表達多藥耐受相關(guān)蛋白亞克隆的生物學(xué)特征[J];中華實驗外科雜志;2000年03期

8 漆少廷,徐錫坤,王心如;膀胱癌的分子生物學(xué)研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊;2000年04期

9 章小平,楊紅枚,魯功成;流式細胞儀在膀胱癌多藥耐受研究中的應(yīng)用[J];臨床泌尿外科雜志;2000年09期

10 楊莉,汪少娟,楊業(yè)金,陳忠,吳燕麗;抗腫瘤藥對膀胱癌細胞產(chǎn)生的免疫抑制因子作用的影響[J];藥物流行病學(xué)雜志;2000年03期

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1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e

本文編號：403878