目的探討應(yīng)用重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)對解脲支原體(UU)快速分群的檢測方法,并與PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行比較,建立UU快速分群的床旁檢測(POCT)方法。方法采用UU標(biāo)準(zhǔn)菌株、收集的臨床標(biāo)本及陰性質(zhì)控菌株,經(jīng)引物設(shè)計(jì)和菌株、臨床標(biāo)本DNA提取,對UU標(biāo)準(zhǔn)菌株、收集臨床標(biāo)本及陰性質(zhì)控菌株進(jìn)行RPA法、PCR-反向點(diǎn)雜交法分群檢測,通過兩種方法的結(jié)果比較,評價(jià)RPA法檢測UU快速分群試驗(yàn)的可行性。結(jié)果 RPA法成功將UU標(biāo)準(zhǔn)菌株分群;113例臨床標(biāo)本中檢測發(fā)現(xiàn)39例UU感染,其中12例UU為生物Ⅰ群,27例為生物Ⅱ群;陰性質(zhì)控菌株未擴(kuò)增;以上UU標(biāo)準(zhǔn)菌株、臨床標(biāo)本、陰性質(zhì)控菌株經(jīng)過PCR-反向點(diǎn)雜交法分群,結(jié)果與RPA法一致,成功建立UU RPA分群法。結(jié)論 RPA法與PCR-反向點(diǎn)雜交法對UU進(jìn)行分群結(jié)果一致,應(yīng)用RPA法可以簡捷、快速、高效、靈敏地完成UU的分群,獲得致病型UU的診斷結(jié)果。

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【部分圖文】：

圖1 UU-MH支原體分離鑒別管液體培養(yǎng)48h后結(jié)果

在接種培養(yǎng)的24～48h，通過實(shí)驗(yàn)觀察與記錄，發(fā)現(xiàn)UU標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33699和ATCC27815培養(yǎng)基由橙黃色變成紅色，結(jié)合陰性對照的培養(yǎng)管未發(fā)生顏色變化，判斷待測的UU標(biāo)準(zhǔn)菌株陽性培養(yǎng)結(jié)果，見圖1。2.2UUPCR-反向點(diǎn)雜交法分群實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2 常規(guī)PCR-反向點(diǎn)雜交法對UU標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行分群檢測結(jié)果

UU分群的擴(kuò)增產(chǎn)物中生物Ⅰ群為156bp，生物Ⅱ群為150bp，標(biāo)準(zhǔn)菌株、臨床標(biāo)本相應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物見圖3、4；陰性對照菌株（159株）均未見擴(kuò)增，且與UU常規(guī)PCR-反向點(diǎn)雜交法結(jié)果一致，見表2。標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27815和ATCC33699的測序結(jié)果和相應(yīng)菌株的全基因組進(jìn)行bla....

圖3 RPA法檢測UU分群生物Ⅰ群、生物Ⅱ群擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

圖2常規(guī)PCR-反向點(diǎn)雜交法對UU標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行分群檢測結(jié)果圖4RPA法檢測臨床標(biāo)本中UU生物I型擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

圖4 RPA法檢測臨床標(biāo)本中UU生物I型擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

圖3RPA法檢測UU分群生物Ⅰ群、生物Ⅱ群擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖3討論

本文編號：4025125