目的:膀胱癌是泌尿系統(tǒng)癌癥中具有第二位致死性的疾病,也是世界上在男性中第六位常見發(fā)病的惡性腫瘤。然而,在膀胱癌的臨床治療中存在一些不容樂觀的現(xiàn)狀,因此需要人們?nèi)ヌ剿�、發(fā)展治療的新策略。其中腺病毒介導(dǎo)的基因治療在臨床上的應(yīng)用具有顯著提高病人療效的潛在價(jià)值,而且該方法還具備在治療中保留膀胱的可能性。RNF8是一種泛素連接酶,它能促進(jìn)DNA的損傷修復(fù)。RNF8在膀胱癌細(xì)胞中高表達(dá),且這種高表達(dá)能由腺病毒介導(dǎo)的sh RNA處理而逆轉(zhuǎn)。因此,本實(shí)驗(yàn)的目的是探索經(jīng)由腺病毒介導(dǎo)的sh RNA敲低RNF8對膀胱癌的放療效果的獨(dú)特的靶向作用。方法:培養(yǎng)并收獲處于對數(shù)生長期的三種膀胱癌細(xì)胞系T24、BIU87和5637用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)以比較RNF8在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)量,對取自膀胱癌病人的癌組織也通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)比較其RNF8的表達(dá)情況。隨后,應(yīng)用免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)來探測膀胱癌細(xì)胞中內(nèi)源性RNF8的自發(fā)表達(dá)。接下來將膀胱癌細(xì)胞系暴露于2 Gy的X射線輻射中,通過免疫熒光試驗(yàn)來檢測由DNA損傷引起的RNF8和γ-H2AX聚集的電離輻射灶(IRIF)。在膀胱癌細(xì)胞系中運(yùn)用腺病毒介導(dǎo)的sh RNA來敲低RNF8的表...

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 膀胱癌的危害和其治療現(xiàn)狀
    1.2 通過腺病毒靶向治療膀胱癌
    1.3 DNA損傷修復(fù)與腫瘤對基因毒性藥劑的抵抗
    1.4 組蛋白泛素化修飾和DNA損傷修復(fù)中的作用
    1.5 RNF8在DNA損傷修復(fù)中的作用
第二章 材料與方法
    2.1 細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 蛋白免疫印跡（Western blotting）
    2.3 通過腺病毒介導(dǎo)的RNA沉默敲低RNF8
    2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
    2.5 凋亡的免疫細(xì)胞化學(xué)分析
    2.6 吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)復(fù)染色法檢測凋亡
    2.7 免疫熒光試驗(yàn)檢測細(xì)胞核內(nèi)焦點(diǎn)形成
    2.8 BALB/c裸鼠腫瘤種植
    2.9 腫瘤組織的H&E染色
    2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第三章 結(jié)果及討論
    3.1 結(jié)果及分析
        3.1.1 RNF8在膀胱癌細(xì)胞中高表達(dá)并參與DNA損傷應(yīng)答
        3.1.2 RNF8敲低會增強(qiáng)膀胱癌細(xì)胞對放療的敏感性
        3.1.3 RNF8敲低能增加射線引發(fā)的膀胱癌細(xì)胞凋亡
        3.1.4 RNF8敲低會干擾膀胱癌細(xì)胞中DNA損傷修復(fù)通路運(yùn)行
        3.1.5 RNF8敲低會阻礙 53BP1、BRCA1和RAP80在DNA損傷位點(diǎn)募集
        3.1.6 RNF8敲低能在體內(nèi)增強(qiáng)膀胱癌腫瘤放療的效果
    3.2 討論
        3.2.1 基因治療在癌癥治療中的作用
        3.2.2 溶瘤病毒與腺病毒載體
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相互映證
        3.2.4 RNF8敲低對放療增敏作用的可能的端粒機(jī)制
第四章 結(jié)論
第五章 本文局限性
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
英文縮寫表
致謝



本文編號：4025079