目的:探討男性不育患者精漿外泌體(exosome)中miR-184的水平變化及臨床意義。方法:收集2015～2019年在江蘇省中醫(yī)院、東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院及溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的97例無精子癥患者、96例弱精子癥患者及同期募集的92例正常生育男性精漿標(biāo)本,分離精漿exosome后運用透射電鏡、Nanosight和Western印跡對exosome進行鑒定;運用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測exosome miR-184的水平,統(tǒng)計分析miR-184變化、臨床價值及與精液參數(shù)的相關(guān)性,進一步用生物信息學(xué)方法預(yù)測和分析miR-184靶基因、相關(guān)信號通路及與男性不育關(guān)系。結(jié)果:透射電鏡、Nanosight和Western印跡結(jié)果顯示,精漿中含有大量exosome。qRT-PCR結(jié)果顯示,無精子癥患者精漿exosome miR-184水平顯著低于正常對照[0.227 (0.092, 0.790)vs 0.650 (0.408, 1.061)](P<0.01),弱精子癥患者精漿exosome中miR-184水平顯著高于正常對照[1.176 (0.661, 1.946)vs 0....

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【部分圖文】：

圖1 精漿exosome鑒定

采用TEM技術(shù)對分離的精漿exosome形態(tài)和結(jié)構(gòu)進行鑒定(圖1A),證實精漿中含有大量具有典型結(jié)構(gòu)特征的exosome,呈球形。采用NTA技術(shù)檢測分離的精漿exosome的大小分布和濃度,發(fā)現(xiàn)健康對照組和無精子癥、弱精子癥患者精漿exosome大小均為150nm左右,濃度約為....

圖2 無精子癥、弱精子癥患者及正常對照精漿exosome miR-184水平

運用qRT-PCR技術(shù)對不育患者和正常對照組精漿exosomemiR-184水平檢測結(jié)果顯示,與正常對照組0.650(0.408,1.061)相比,無精子癥患者精漿exosomemiR-184水平顯著降低0.227(0.092,0.790)(降低2.86倍,P<0.....

圖3 miR-184靶基因及參與蛋白通路生物學(xué)信息分析結(jié)果

3種生物信息學(xué)在線數(shù)據(jù)庫TargetScan、miRanda和miRPathDB2.0預(yù)測miR-184可調(diào)控靶基因數(shù)量分別為93、662和2705種,3者共同預(yù)測到的miR-184靶基因為47種(圖3A)。進一步通過Metascape對47種共同預(yù)測的靶基因進行功能注釋和富....

本文編號：4024614