目的:研究舒尼替尼引起的腎癌細胞出現(xiàn)細胞自噬的機制。方法:以腎癌細胞系A(chǔ)CHN細胞為細胞模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯環(huán))-2-(4-硫基苯)-2H-四唑鹽復(fù)合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt,MTS]檢測法觀察舒尼替尼對ACHN細胞活性的影響;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)敲降自噬相關(guān)蛋白Beclin1和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3融合蛋白(microtubule associated protein1 light chain 3 fusion protein,LC3)檢測自噬與舒尼替尼引起的細胞凋亡。使用電子顯微鏡和熒光顯微鏡觀察在舒尼替尼作用下自噬體的形成;蛋白質(zhì)免疫印跡檢測舒尼替尼對LC3-Ⅱ的積累,自噬相關(guān)信號通路蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、哺乳動物雷帕霉素受體(mammalian target of rapamycin,m TOR)及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly AD...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞和質(zhì)粒
    1.2 藥品和抗體
    1.3 儀器設(shè)備
    1.4 試劑耗材
    1.5 細胞培養(yǎng)
    1.6 siRNA干擾
    1.7 細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
    1.8 電子顯微鏡樣品的制備
    1.9 熒光顯微鏡觀察
    1.1 0 蛋白質(zhì)免疫印跡
    1.1 1 MTS檢測細胞存活率
    1.1 2 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 舒尼替尼引起細胞活性丟失,該作用與細胞自噬有關(guān)
    2.2 舒尼替尼誘導(dǎo)ACHN細胞自噬增強
    2.3 舒尼替尼通過抑制Akt/m TOR通路誘導(dǎo)腎癌細胞自噬
3 討論



本文編號：4021197