發(fā)布時(shí)間：2024-12-27 05:22

　　 目的:研究舒尼替尼引起的腎癌細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞自噬的機(jī)制。方法:以腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN細(xì)胞為細(xì)胞模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯環(huán))-2-(4-硫基苯)-2H-四唑鹽復(fù)合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt,MTS]檢測(cè)法觀察舒尼替尼對(duì)ACHN細(xì)胞活性的影響;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)敲降自噬相關(guān)蛋白Beclin1和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3融合蛋白(microtubule associated protein1 light chain 3 fusion protein,LC3)檢測(cè)自噬與舒尼替尼引起的細(xì)胞凋亡。使用電子顯微鏡和熒光顯微鏡觀察在舒尼替尼作用下自噬體的形成;蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)舒尼替尼對(duì)LC3-Ⅱ的積累,自噬相關(guān)信號(hào)通路蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、哺乳動(dòng)物雷帕霉素受體(mammalian target of rapamycin,m TOR)及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly AD...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞和質(zhì)粒
    1.2 藥品和抗體
    1.3 儀器設(shè)備
    1.4 試劑耗材
    1.5 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.6 siRNA干擾
    1.7 細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
    1.8 電子顯微鏡樣品的制備
    1.9 熒光顯微鏡觀察
    1.1 0 蛋白質(zhì)免疫印跡
    1.1 1 MTS檢測(cè)細(xì)胞存活率
    1.1 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 舒尼替尼引起細(xì)胞活性丟失,該作用與細(xì)胞自噬有關(guān)
    2.2 舒尼替尼誘導(dǎo)ACHN細(xì)胞自噬增強(qiáng)
    2.3 舒尼替尼通過抑制Akt/m TOR通路誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞自噬
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本文編號(hào)：4021197