發(fā)布時(shí)間：2024-12-10 03:29

　　目的:鉍相關(guān)的納米材料被廣泛地應(yīng)用于冶金業(yè),化妝品工業(yè)以及醫(yī)療診斷中,與鉍相關(guān)的化合物也常被用于治療細(xì)菌感染引發(fā)的胃腸道疾病。最近,我們前期合成了硫化鉍納米顆粒(BiNP),而且被證明具有很好的CT成像能力,可以作為潛在的CT造影劑。由于有研究表明鉍相關(guān)化合物對(duì)人體健康具有副作用,特別是對(duì)腎臟器官,然而,對(duì)于鉍相關(guān)納米材料的腎毒性研究幾乎沒(méi)有,因此,我們決定以BiNP為例,研究鉍相關(guān)的納米材料對(duì)腎臟的損傷及其相關(guān)機(jī)制。方法及結(jié)果:我們首先制備了BiNP,并且證明能夠增加腫瘤的成像效果,在對(duì)其細(xì)胞毒性的研究中發(fā)現(xiàn),與其它細(xì)胞系相比,BiNP對(duì)人胚胎腎細(xì)胞(HEK293)的毒性尤其明顯。另外,通過(guò)熒光觀察和元素分析發(fā)現(xiàn),BiNP進(jìn)入細(xì)胞存在明顯的濃度和時(shí)間依賴性。而且通過(guò)透射電子顯微鏡和能量色散X射線分析發(fā)現(xiàn)BiNP存在于細(xì)胞質(zhì)中,進(jìn)一步利用溶酶體染料Lysotracker Red染色發(fā)現(xiàn),進(jìn)入細(xì)胞的BiNP最終到達(dá)溶酶體中。利用內(nèi)吞抑制劑研究我們發(fā)現(xiàn)BiNP進(jìn)入細(xì)胞需要ATP和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及高爾基體的參與。通過(guò)小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究BiNP的對(duì)腎臟的損傷。血生化分析結(jié)果顯示肌酐和血尿氮明顯增加...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 硫化鉍納米材料的制備與表征
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 硫化鉍納米顆粒(BiNP)的制備與FITC標(biāo)記
        2.2 BiNP溶液濃度的測(cè)定
        2.3 BiNP電鏡樣品的制備
        2.4 BiNP在不同溶劑中水合粒徑及表面電荷的測(cè)定
        2.5 酸堿度對(duì)BiNP穩(wěn)定性的影響
        2.6 檢測(cè)BiNP體內(nèi)CT成像能力
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BiNP納米材料的合成以及形態(tài)和大小的測(cè)定
        3.2 BiNP納米材料修飾連接異硫氰酸熒光素(FITC)
        3.3 BiNP納米材料水合粒徑以及表面電荷大小的測(cè)定
        3.4 酸堿度對(duì)BiNP納米材料穩(wěn)定性的影響
        3.5 BiNP具有顯著的CT成像能力
    4.討論
    5.小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 硫化鉍納米材料的細(xì)胞毒性以及內(nèi)吞動(dòng)力學(xué)的研究
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 溶液配制
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        2.3 HEK293細(xì)胞攝取BiNP的動(dòng)力學(xué)研究
        2.4 共聚焦顯微鏡觀察
        2.5 透射電子顯微鏡觀察
        2.6 細(xì)胞攝取BiNP的途徑研究
        2.7 BiNP-FITC與溶酶體的共定位
        2.8 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BiNP對(duì)腎細(xì)胞的毒性
        3.2 BiNP細(xì)胞內(nèi)吞動(dòng)力學(xué)以及細(xì)胞內(nèi)吞途徑的研究
        3.3 BiNP在細(xì)胞中的分布
    4.討論
    5.小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三部分 硫化鉍納米材料引起的與自噬相關(guān)的腎損傷及其機(jī)制的研究
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 溶液配制
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2 血樣采集
        2.3 腎臟病理切片制備
        2.4 免疫組織化學(xué)染色
        2.5 單丹黃酰尸胺染色觀察自噬的發(fā)生
        2.6 透射電子顯微鏡觀察自噬的超微結(jié)構(gòu)
        2.7 GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.8 Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.9 細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的檢測(cè)
        2.10 活性氧對(duì)自噬的影響
        2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BiNP引起血生化和腎臟病理學(xué)變化
        3.2 BiNP引發(fā)腎臟發(fā)生自噬
        3.3 自噬在BiNP引發(fā)的急性腎損傷中的作用
        3.4 BiNP誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞發(fā)生自噬
        3.5 BiNP通過(guò)AMPK/mTOR信號(hào)通路引發(fā)自噬
        3.6 活性氧對(duì)BiNP引發(fā)的自噬的影響
    4.討論
    5.小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四部分 關(guān)于靈芝多糖修飾硫化鉍納米材料降低腎毒性并提高免疫力的問(wèn)題探討
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
英文縮寫列表
研究生期間發(fā)表論文以及參與課題
致謝



本文編號(hào)：4015535