目的 觀察高葡萄糖刺激下人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)中PKCδ和p66Shc的mRNA表達(dá)及蛋白磷酸化水平。研究PKCδ對高葡萄糖刺激下HK-2細(xì)胞p66Shc磷酸化及線粒體轉(zhuǎn)位的影響。 方法 1、以HK-2細(xì)胞作為體外觀察的細(xì)胞,采用不同濃度和同一濃度不同時間葡萄糖刺激HK-2細(xì)胞,分別用Real Time PCR和Western Blot技術(shù),檢測PKCδ和p66shc基因及蛋白磷酸化水平。 2、①用PKCδ抑制劑對HK-2細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),用或不用高葡萄糖處理后,采用Western blot和細(xì)胞免疫熒光技術(shù)分析p66Shc蛋白磷酸化水平；②經(jīng)上述方法處理細(xì)胞后,分別提取細(xì)胞漿與線粒體蛋白,用Western blot觀察磷酸化p66Shc蛋白線粒體轉(zhuǎn)位情況。 結(jié)果 1、高葡萄糖刺激下PKCδ和p66Shc的mRNA表達(dá)及蛋白磷酸化水平較對照組明顯增加(P<0.05),且呈劑量和時間依賴。 2、用PKCδ抑制劑Rottlerin處理HK-2細(xì)胞后,與對照組相比,高糖刺激下胞漿和線粒體p66Shc磷酸化水平明顯抑制(#P<0.01)。 結(jié)論 ...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮略詞
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞及來源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞干預(yù)
        2.2.4 基因水平檢測
        2.2.5 腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)中p66Shc、p66Shc phospho-S36蛋白的檢測
        2.2.6 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 不同濃度葡萄糖刺激對HK2細(xì)胞p66Shc和PKCδ的mRNA表達(dá)的影響
    3.2 30mM葡萄糖不同時間段刺激對HK2細(xì)胞p66Shc和PKCSmRNA的影響
    3.3 不同濃度葡萄糖刺激對HK2細(xì)胞p66Shc和PKCδ磷酸化的影響
    3.4 30mM葡萄糖不同時間段刺激對HK2細(xì)胞p66Shc和PKCδ磷酸化的影響
    3.5 PKCδ抑制劑對高葡萄糖作用下HK-2細(xì)胞p66Shc磷酸化及線粒體轉(zhuǎn)位的影響
        3.5.1 Rottlerin對高糖作用下HK-2細(xì)胞p66Shc磷酸化水平的抑制作用
        3.5.2 Rottlerin對高葡萄糖作用下HK-2細(xì)胞p-p66Shc線粒體轉(zhuǎn)位的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間主要研究成果
致謝



本文編號：4016107