目的 雪膽素乙（DHCF）是從雪膽屬植物中分離獲得的葫蘆烷型四環(huán)三萜類化合物。DHCF具有抗炎和抗腫瘤效應(yīng)，但其作用機(jī)制的研究少見。本研究以人前列腺癌細(xì)胞株（LNCaP、DU145、PC3）為研究對象，分析DHCF的抗腫瘤效應(yīng)，探討其作用機(jī)制。 方法 MTS法檢測細(xì)胞增殖狀況；PI染色分析細(xì)胞周期分布；免疫熒光染色檢測細(xì)胞骨架變化；Western Blot法檢測細(xì)胞中特定蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 MTS結(jié)果顯示，DHCF以濃度依賴方式抑制LNCaP、DU145、PC3細(xì)胞株的增殖，對三種細(xì)胞的IC50值分別為5、7、15mol/L。PI染色結(jié)果顯示，DHCF能使三種細(xì)胞的周期阻滯于G2/M期，但只有LNCaP細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰。組織免疫熒光染色結(jié)果顯示，20mol/L的DHCF處理4h后，癌細(xì)胞中G-肌動(dòng)蛋白（actin）表達(dá)量減少，肌動(dòng)蛋白纖絲發(fā)生聚集，形成桿狀結(jié)構(gòu)；但微管的結(jié)構(gòu)變化不明顯。同時(shí)，肌動(dòng)蛋白形成的桿狀結(jié)構(gòu)和Cofilin形成的桿狀結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)共定位，說明這種結(jié)構(gòu)是Cofilin-actin棒。Western Blot結(jié)果顯示，DHCF引起癌細(xì)胞中Cofilin磷酸化水平的明顯降...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
一、前言
    1 雪膽素乙的化學(xué)構(gòu)成
    2 雪膽素乙的相關(guān)研究
        2.1 雪膽素的藥理表現(xiàn)及機(jī)制
            2.1.1 抗炎活性
            2.1.2 抗腫瘤效應(yīng)
            2.1.3 抗 HIV 作用
            2.1.4 肝損傷保護(hù)
            2.1.5 治療胃腸道潰瘍
            2.1.6 臨床應(yīng)用
        2.2 葫蘆烷型四環(huán)三萜的抗腫瘤機(jī)制
            2.2.1 增強(qiáng)機(jī)體對癌癥的免疫應(yīng)答
            2.2.2 腫瘤遷移
            2.2.3 STAT3 信號通路
            2.2.4 MAPK 信號通路
            2.2.5 細(xì)胞骨架
            2.2.6 其他研究
    3 本課題的研究目的和意義
二、實(shí)驗(yàn)材料
    1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
    2 主要試劑
    3 主要儀器
三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    1 三種人前列腺癌細(xì)胞株的培養(yǎng)與傳代
    2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組
    3 檢測雪膽素乙處理下三種細(xì)胞株的藥物敏感性
        3.1 MTS 法
        3.2 細(xì)胞形態(tài)分析
        3.3 PI 染色
        3.4 Western Blot 檢測細(xì)胞凋亡
            3.4.1 細(xì)胞總蛋白的制備
            3.4.2 蛋白定量
            3.4.3 蛋白檢測
    4 雪膽素乙的抗癌機(jī)制探究
        4.1 組織免疫熒光染色
        4.2 Western Blot 檢測細(xì)胞骨架及細(xì)胞周期蛋白
            4.2.1 肌動(dòng)蛋白的制備
            4.2.2 蛋白檢測
            4.2.3 蛋白膜的剝離
    5 統(tǒng)計(jì)分析
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 LNCaP、DU145、PC3 細(xì)胞株對雪膽素乙的藥敏性檢測
        1.1 雪膽素乙明顯抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖
        1.2 雪膽素乙引起細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化
        1.3 雪膽素乙誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞周期阻滯于 G2/M 期
        1.4 雪膽素乙明顯引發(fā) LNCaP 細(xì)胞凋亡
    2 雪膽素乙的抗癌作用機(jī)制
        2.1 雪膽素乙引起 G-actin 減少，肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架發(fā)生明顯的變化
        2.2 雪膽素乙引起 Cofilin 去磷酸化，誘使 Cofilin-actin 棒結(jié)構(gòu)的形成
        2.3 雪膽素乙引起 p21Cip1表達(dá)上調(diào)，Cyclin A 表達(dá)下調(diào)
五、討論
參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄 I 主要溶液配方
附錄 II 英文縮略詞
附錄 III 在校期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3972396