本文關(guān)鍵詞：低氧預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)慢性腎衰竭大鼠腎臟的修復(fù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討低氧預(yù)處理的骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)5/6腎切除大鼠腎損傷的修復(fù)作用。方法:1、采用密度梯度離心法分離SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derivedmesenchymal stem cells,BMSC),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)過(guò)程,流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定,取第3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。采用混合氣體缺氧小室(1%O2+5%CO2+94%N2)低氧預(yù)處理(hypoxic preconditioning,HP)BMSC建立實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。�?shí)驗(yàn)分為3組:正常培養(yǎng)BMSC(對(duì)照組)、低氧預(yù)處理24h組(低氧24h組)、低氧預(yù)處理48h(低氧48h組),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI檢測(cè)低氧預(yù)處理后各組細(xì)胞的凋亡情況;反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白免疫印跡雜交(Western blot,WB)檢測(cè)各組細(xì)胞HIF-1α、CXCR4、VEGF的表達(dá)情況;比較各組細(xì)胞抗凋亡能力和細(xì)胞因子的表達(dá)。2、采用分階段5/6腎切除術(shù)建立大鼠慢性腎衰竭模型,將動(dòng)物隨機(jī)分為四組:Sham組(假手術(shù)組),Model組(5/6腎切除組),BMSC組(常氧培養(yǎng)BMSC移植組),hp-BMSC組(低氧預(yù)處理24h BMSC移植組),各組于5/6腎切除術(shù)后一周后分別經(jīng)陰莖背靜脈注射PBS、PBS、BMSC、hp-BMSC細(xì)胞懸液。于注射后1周、3周、6周處死各組大鼠,留取血清和腎組織,檢測(cè)血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr),并觀察腎臟病理變化。同時(shí),以Dio綠熒光染料體外標(biāo)記BMSC,比較常氧培養(yǎng)BMSC和缺氧預(yù)處理BMSC移植后向腎臟歸巢的數(shù)量差異。結(jié)果:1、原代細(xì)胞呈短梭形、橢圓形,貼壁集落生長(zhǎng),經(jīng)3次傳代后,細(xì)胞大小及形態(tài)趨于一致,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或放射狀生長(zhǎng)。流式細(xì)胞術(shù)顯示對(duì)照組細(xì)胞早期和晚期均未見凋,與常規(guī)培養(yǎng)(對(duì)照組)組細(xì)胞比較,低氧預(yù)處理24h(低氧24h)組細(xì)胞早期和晚期凋亡率無(wú)明顯差別,隨著細(xì)胞缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),低氧預(yù)處理48h(低氧48h)組的早期凋亡、晚期凋亡和總凋亡數(shù)量均顯著增多(P0.05);RT-PCR及WB顯示,與對(duì)照組和低氧48h組相比,低氧24h組HIF-lα、CXCR4、VEGF的表達(dá)明顯增高(P0.05),而對(duì)照組組和低氧48h組比較,HIF-lα、CXCR4、VEGF的表達(dá)未見明顯差別。2、在各時(shí)間點(diǎn),Model組大鼠BUN、Scr水平均高于Sham組(P0.05);BMSC組和hp-BMSC組BUN、Scr水平均較Model組降低(P0.05);與BMSC組比較,hp-BMSC組BUN和Scr在第6周降低更顯著(P0.05)。熒光定位顯示在hp-BMSC組存活的BMSC明顯多于BMSC組。細(xì)胞移植后,兩組大鼠腎臟病理?yè)p傷均較Model組減輕,而hp-BMSC組較BMSC組治療效果更明顯。結(jié)論:低氧預(yù)處理的BMSC可提高BMSC抗凋亡能力,并可促進(jìn)BMSC向受損腎臟組織遷移歸巢、延長(zhǎng)細(xì)胞在腎臟內(nèi)的定植時(shí)間,更有效改善慢性腎衰竭大鼠腎功能和修復(fù)受損的腎組織。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 低氧預(yù)處理 細(xì)胞移植 慢性腎衰竭
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692.5
【目錄】：

• 英文縮略表4-5
• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 第一部分: 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及低氧預(yù)處理模型的建立10-30
• 一 材料與方法10-20
• 二 結(jié)果20-30
• 第二部分:低氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì) 5/6 腎切除大鼠腎損傷修復(fù)能力的影響30-42
• 一 材料與方法30-35
• 二 結(jié)果35-42
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 綜述55-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：低氧預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)慢性腎衰竭大鼠腎臟的修復(fù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：389973