本文關(guān)鍵詞：低氧預處理的骨髓間充質(zhì)干細胞對慢性腎衰竭大鼠腎臟的修復作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討低氧預處理的骨髓源性間充質(zhì)干細胞移植對5/6腎切除大鼠腎損傷的修復作用。方法:1、采用密度梯度離心法分離SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow-derivedmesenchymal stem cells,BMSC),倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及生長過程,流式細胞儀檢測其表面標志物進行鑒定,取第3-4代細胞用于實驗。采用混合氣體缺氧小室(1%O2+5%CO2+94%N2)低氧預處理(hypoxic preconditioning,HP)BMSC建立實驗模型。實驗分為3組:正常培養(yǎng)BMSC(對照組)、低氧預處理24h組(低氧24h組)、低氧預處理48h(低氧48h組),通過流式細胞術(shù)Annexin V-FITC/PI檢測低氧預處理后各組細胞的凋亡情況;反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白免疫印跡雜交(Western blot,WB)檢測各組細胞HIF-1α、CXCR4、VEGF的表達情況;比較各組細胞抗凋亡能力和細胞因子的表達。2、采用分階段5/6腎切除術(shù)建立大鼠慢性腎衰竭模型,將動物隨機分為四組:Sham組(假手術(shù)組),Model組(5/6腎切除組),BMSC組(常氧培養(yǎng)BMSC移植組),hp-BMSC組(低氧預處理24h BMSC移植組),各組于5/6腎切除術(shù)后一周后分別經(jīng)陰莖背靜脈注射PBS、PBS、BMSC、hp-BMSC細胞懸液。于注射后1周、3周、6周處死各組大鼠,留取血清和腎組織,檢測血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr),并觀察腎臟病理變化。同時,以Dio綠熒光染料體外標記BMSC,比較常氧培養(yǎng)BMSC和缺氧預處理BMSC移植后向腎臟歸巢的數(shù)量差異。結(jié)果:1、原代細胞呈短梭形、橢圓形,貼壁集落生長,經(jīng)3次傳代后,細胞大小及形態(tài)趨于一致,細胞呈長梭形或放射狀生長。流式細胞術(shù)顯示對照組細胞早期和晚期均未見凋,與常規(guī)培養(yǎng)(對照組)組細胞比較,低氧預處理24h(低氧24h)組細胞早期和晚期凋亡率無明顯差別,隨著細胞缺氧時間的延長,低氧預處理48h(低氧48h)組的早期凋亡、晚期凋亡和總凋亡數(shù)量均顯著增多(P0.05);RT-PCR及WB顯示,與對照組和低氧48h組相比,低氧24h組HIF-lα、CXCR4、VEGF的表達明顯增高(P0.05),而對照組組和低氧48h組比較,HIF-lα、CXCR4、VEGF的表達未見明顯差別。2、在各時間點,Model組大鼠BUN、Scr水平均高于Sham組(P0.05);BMSC組和hp-BMSC組BUN、Scr水平均較Model組降低(P0.05);與BMSC組比較,hp-BMSC組BUN和Scr在第6周降低更顯著(P0.05)。熒光定位顯示在hp-BMSC組存活的BMSC明顯多于BMSC組。細胞移植后,兩組大鼠腎臟病理損傷均較Model組減輕,而hp-BMSC組較BMSC組治療效果更明顯。結(jié)論:低氧預處理的BMSC可提高BMSC抗凋亡能力,并可促進BMSC向受損腎臟組織遷移歸巢、延長細胞在腎臟內(nèi)的定植時間,更有效改善慢性腎衰竭大鼠腎功能和修復受損的腎組織。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 低氧預處理 細胞移植 慢性腎衰竭
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692.5
【目錄】：

• 英文縮略表4-5
• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 第一部分: 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及低氧預處理模型的建立10-30
• 一 材料與方法10-20
• 二 結(jié)果20-30
• 第二部分:低氧預處理骨髓間充質(zhì)干細胞移植對 5/6 腎切除大鼠腎損傷修復能力的影響30-42
• 一 材料與方法30-35
• 二 結(jié)果35-42
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-55
• 綜述55-63
• 參考文獻59-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李秀森,郭子寬,楊靖清,劉曉丹,侯春梅,唐佩弦,毛寧;骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性[J];解放軍醫(yī)學雜志;2000年05期

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  本文關(guān)鍵詞：低氧預處理的骨髓間充質(zhì)干細胞對慢性腎衰竭大鼠腎臟的修復作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：389973