本文關(guān)鍵詞：雄激素受體介導(dǎo)的miR-7在前列腺癌去勢(shì)治療中發(fā)揮的作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：前列腺癌(PCa)目前已成為發(fā)達(dá)國(guó)家男性中最常見(jiàn)的腫瘤,并且其致死率位居第二,而大部分致死原因?yàn)檫h(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在中國(guó),前列腺癌的發(fā)病率近年來(lái)也呈上升趨勢(shì)。從20世紀(jì)40年代起,對(duì)于無(wú)法進(jìn)行手術(shù)的前列腺癌的標(biāo)準(zhǔn)化治療即為雄激素剝奪治療(ADT),其通過(guò)抑制雄激素的產(chǎn)生或者阻斷雄激素與雄激素受體(AR)結(jié)合從而使AR表達(dá)下降從而達(dá)到治療的目的,然而,大部分病人在18到24個(gè)月后就出現(xiàn)治療耐受,即使血清睪酮達(dá)到去勢(shì)水平,病人的PSA水平仍持續(xù)升高,發(fā)展成為去勢(shì)抵抗性前列腺癌(CRPC)。其主要原因在于AR在被抑制的過(guò)程中的質(zhì)和量發(fā)生了變化,然而具體機(jī)制尚不明確,引發(fā)人們眾多探索。近年來(lái),非編碼RNA(non- coding RNAs),特別是微小RNA(miR)調(diào)控基因表達(dá)研究的興起為該問(wèn)題的解決提供了新的視角,miR是真核生物中廣泛存在的長(zhǎng)約22-25個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子,通過(guò)與靶mRNA特異結(jié)合抑制轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá),在調(diào)控細(xì)胞周期、生物體發(fā)育時(shí)序等方面起重要作用。在動(dòng)物體中,個(gè)miR通�？梢哉{(diào)控?cái)?shù)十個(gè)基因。miR自身的表達(dá)也受到轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,而AR本身也是一種轉(zhuǎn)錄因子,因此,了解在發(fā)展成為CRPC的過(guò)程中,AR對(duì)miR的調(diào)節(jié)情況及其下游的變化有助于人們更加全面的了解AR在前列腺癌發(fā)展成為CRPC過(guò)程中的作用。工作目的：初步探索雄激素受體介導(dǎo)的miR-7在前列腺癌去勢(shì)抵抗中發(fā)揮的作用,并選擇表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)作為miR-7的下游研究對(duì)象,探索miR-7的作用機(jī)制。研究方法：(1)通過(guò)查閱PROmiRNA數(shù)據(jù)庫(kù),篩選并確定AR作為轉(zhuǎn)錄因子是否調(diào)節(jié)miR-7的表達(dá)。(2)收取24例前列腺癌根治性切除組織標(biāo)本,其中術(shù)后免疫組化AR(-)13例,AR(+)11例,用RNAprep pure福爾馬林固定石蠟包埋組織(FFPE)切片總RNA提取試劑盒提取石蠟組織的總RNA,再運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)對(duì)AR(-)組和AR(+)組分別進(jìn)行所選定miR的監(jiān)測(cè),比較兩組間miR的表達(dá),并且分別比較每組內(nèi)癌組織與正常組織間miR的表達(dá)差異。(3)選用不含AR表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞系DU145,對(duì)細(xì)胞系以Lipo2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-7抑制物(miR-inhibitor)并孵育48-72小時(shí)后,使用蛋白質(zhì)免疫印跡(WB)檢測(cè)EGFR的表達(dá)情況。 (4)用相同的方法轉(zhuǎn)染miR相似物(miR-mimic),以qRT-PCR和WB觀察EGFR下游蛋白R(shí)af的表達(dá)情況,對(duì)AR介導(dǎo)的EGFR的下游進(jìn)行初步探索。研究結(jié)果：(1)查閱PROmiRNA數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)miR-7前體miR-7-1的啟動(dòng)子區(qū)具有AR的作用位點(diǎn)。(2)石蠟標(biāo)本中,AR(+)組中,前列腺癌的miR-7表達(dá)和正常組織沒(méi)有差異(p=0.118),而在AR(-)組中,前列腺癌的miR-7表達(dá)明顯低于正常組織(p=0.002)；同時(shí)取兩組的正常組織進(jìn)行比較,AR(+)組和AR(-)組的miR-7表達(dá)沒(méi)有明顯差異(p=0.278),而將miR-7進(jìn)行腫瘤/正常組織時(shí),AR(+)組中miR-7的表達(dá)則明顯高于AR(-)組(p=0.001)。(3)在DU145細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)染miR-7 inhibitor后,WB結(jié)果顯示EGFR的表達(dá)明顯上升。(4)在DU145細(xì)胞系轉(zhuǎn)染miR-7 mimic后,qRT-PCR和WB的結(jié)果均顯示raf的rnRNA口蛋白的表達(dá)量有明顯下降。結(jié)論：在前列腺癌的去勢(shì)治療中,AR的下調(diào)可使miR-7的表達(dá)明顯下降,而miR-7在前列腺癌中對(duì)EGFR的表達(dá)起著抑制作用,并且通過(guò)raf影響著前列腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 miR-7 雄激素受體 EGFR raf
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 中英文對(duì)照12-13
• 第一章 緒論13-15
• 第二章 組織標(biāo)本中AR對(duì)miR-7的調(diào)控作用15-21
• 一、引言15
• 二、材料與方法15-18
• 1、材料15-16
• 2、實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-19
• 四、討論19-20
• 五、結(jié)論20-21
• 第三章：探索miR-7對(duì)EGFR及下游表達(dá)的影響21-29
• 一、引言21
• 二、材料和方法21-25
• 1、材料21-22
• 2、實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 四、討論27-28
• 五、結(jié)論28-29
• 全文總結(jié)29-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 文獻(xiàn)綜述32-38
• 一、雄激素受體32
• 二、MricoRNA32-33
• 三、AR調(diào)節(jié)MricoRNA的表達(dá)33-34
• 四、MricoRNA調(diào)節(jié)AR的表達(dá)34-35
• 五、總結(jié)與展望35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 碩士研究生期間研究成果38-39
• 致謝39-40

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周寶永;陳獨(dú)群;余祖虎;張強(qiáng);任瑞;池澤湃;王亞?wèn)|;李彩玲;秦潔;郭新;崔光輝;周亮;桂耀庭;來(lái)永慶;;miR-7在腎癌中的表達(dá)及臨床意義研究[J];中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 方斌斌;姜黃素通過(guò)上調(diào)miR-7抑制人胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2015年

2 成向明;雄激素受體介導(dǎo)的miR-7在前列腺癌去勢(shì)治療中發(fā)揮的作用及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：雄激素受體介導(dǎo)的miR-7在前列腺癌去勢(shì)治療中發(fā)揮的作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：390751