本文關(guān)鍵詞：雄激素受體介導(dǎo)的miR-7在前列腺癌去勢治療中發(fā)揮的作用及其機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：前列腺癌(PCa)目前已成為發(fā)達國家男性中最常見的腫瘤,并且其致死率位居第二,而大部分致死原因為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在中國,前列腺癌的發(fā)病率近年來也呈上升趨勢。從20世紀(jì)40年代起,對于無法進行手術(shù)的前列腺癌的標(biāo)準(zhǔn)化治療即為雄激素剝奪治療(ADT),其通過抑制雄激素的產(chǎn)生或者阻斷雄激素與雄激素受體(AR)結(jié)合從而使AR表達下降從而達到治療的目的,然而,大部分病人在18到24個月后就出現(xiàn)治療耐受,即使血清睪酮達到去勢水平,病人的PSA水平仍持續(xù)升高,發(fā)展成為去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)。其主要原因在于AR在被抑制的過程中的質(zhì)和量發(fā)生了變化,然而具體機制尚不明確,引發(fā)人們眾多探索。近年來,非編碼RNA(non- coding RNAs),特別是微小RNA(miR)調(diào)控基因表達研究的興起為該問題的解決提供了新的視角,miR是真核生物中廣泛存在的長約22-25個核苷酸的非編碼RNA分子,通過與靶mRNA特異結(jié)合抑制轉(zhuǎn)錄后基因表達,在調(diào)控細(xì)胞周期、生物體發(fā)育時序等方面起重要作用。在動物體中,個miR通�？梢哉{(diào)控數(shù)十個基因。miR自身的表達也受到轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,而AR本身也是一種轉(zhuǎn)錄因子,因此,了解在發(fā)展成為CRPC的過程中,AR對miR的調(diào)節(jié)情況及其下游的變化有助于人們更加全面的了解AR在前列腺癌發(fā)展成為CRPC過程中的作用。工作目的：初步探索雄激素受體介導(dǎo)的miR-7在前列腺癌去勢抵抗中發(fā)揮的作用,并選擇表皮生長因子受體(EGFR)作為miR-7的下游研究對象,探索miR-7的作用機制。研究方法：(1)通過查閱PROmiRNA數(shù)據(jù)庫,篩選并確定AR作為轉(zhuǎn)錄因子是否調(diào)節(jié)miR-7的表達。(2)收取24例前列腺癌根治性切除組織標(biāo)本,其中術(shù)后免疫組化AR(-)13例,AR(+)11例,用RNAprep pure福爾馬林固定石蠟包埋組織(FFPE)切片總RNA提取試劑盒提取石蠟組織的總RNA,再運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)對AR(-)組和AR(+)組分別進行所選定miR的監(jiān)測,比較兩組間miR的表達,并且分別比較每組內(nèi)癌組織與正常組織間miR的表達差異。(3)選用不含AR表達的前列腺癌細(xì)胞系DU145,對細(xì)胞系以Lipo2000瞬時轉(zhuǎn)染miR-7抑制物(miR-inhibitor)并孵育48-72小時后,使用蛋白質(zhì)免疫印跡(WB)檢測EGFR的表達情況。 (4)用相同的方法轉(zhuǎn)染miR相似物(miR-mimic),以qRT-PCR和WB觀察EGFR下游蛋白Raf的表達情況,對AR介導(dǎo)的EGFR的下游進行初步探索。研究結(jié)果：(1)查閱PROmiRNA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)miR-7前體miR-7-1的啟動子區(qū)具有AR的作用位點。(2)石蠟標(biāo)本中,AR(+)組中,前列腺癌的miR-7表達和正常組織沒有差異(p=0.118),而在AR(-)組中,前列腺癌的miR-7表達明顯低于正常組織(p=0.002)；同時取兩組的正常組織進行比較,AR(+)組和AR(-)組的miR-7表達沒有明顯差異(p=0.278),而將miR-7進行腫瘤/正常組織時,AR(+)組中miR-7的表達則明顯高于AR(-)組(p=0.001)。(3)在DU145細(xì)胞系實驗中,轉(zhuǎn)染miR-7 inhibitor后,WB結(jié)果顯示EGFR的表達明顯上升。(4)在DU145細(xì)胞系轉(zhuǎn)染miR-7 mimic后,qRT-PCR和WB的結(jié)果均顯示raf的rnRNA口蛋白的表達量有明顯下降。結(jié)論：在前列腺癌的去勢治療中,AR的下調(diào)可使miR-7的表達明顯下降,而miR-7在前列腺癌中對EGFR的表達起著抑制作用,并且通過raf影響著前列腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 miR-7 雄激素受體 EGFR raf
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 中英文對照12-13
• 第一章 緒論13-15
• 第二章 組織標(biāo)本中AR對miR-7的調(diào)控作用15-21
• 一、引言15
• 二、材料與方法15-18
• 1、材料15-16
• 2、實驗方法16-18
• 三、實驗結(jié)果18-19
• 四、討論19-20
• 五、結(jié)論20-21
• 第三章：探索miR-7對EGFR及下游表達的影響21-29
• 一、引言21
• 二、材料和方法21-25
• 1、材料21-22
• 2、實驗方法22-25
• 三、實驗結(jié)果25-27
• 四、討論27-28
• 五、結(jié)論28-29
• 全文總結(jié)29-30
• 參考文獻30-32
• 文獻綜述32-38
• 一、雄激素受體32
• 二、MricoRNA32-33
• 三、AR調(diào)節(jié)MricoRNA的表達33-34
• 四、MricoRNA調(diào)節(jié)AR的表達34-35
• 五、總結(jié)與展望35-36
• 參考文獻36-38
• 碩士研究生期間研究成果38-39
• 致謝39-40

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本文編號：390751