男性不育受遺傳、環(huán)境等多因素影響。70%以上的男性不育病因不明，即使在已知病因的男性不育中，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，因此男性不育診治有其復(fù)雜性與特殊性。其中異常的表觀遺傳修飾可能是促使男性不育的一個(gè)機(jī)制。DNA甲基化標(biāo)志，是印記基因的一個(gè)關(guān)鍵修飾。在精子形成過(guò)程中，經(jīng)歷原始生殖細(xì)胞甲基化的廣泛擦除和受精后精原細(xì)胞甲基化的重新建立。印記基因DNA甲基化異常與男性不育有關(guān)。 為研究DNA甲基化與男性不育的關(guān)系，我們比較了正常生育男性與少弱畸形精子癥患者父系印記基因H19DMR及母系印記基因MEST DMR DNA甲基化差異。首先對(duì)所研究標(biāo)本進(jìn)行精液常規(guī)分析和精子形態(tài)分析，密度梯度離心法提純精液，然后提取精液基因組DNA并進(jìn)行亞硫酸氫鹽處理。利用PCR體外擴(kuò)增并將純化后的PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體連接及酶切驗(yàn)證，并對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序和DNA甲基化程度差異分析。結(jié)果表明，所有正常生育男性H19DMR DNA是高甲基化的，甲基化率為100%，少弱畸形精子癥患者DNA甲基化水平顯著下降，甲基化率為93.05%，結(jié)果比較有顯著性差異（P＜0.01），同時(shí)在少弱畸形精子癥患者中CpG位點(diǎn)1、CpG...

【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一部分 引言
    一、 男性不育的概念及其相關(guān)研究進(jìn)展
    二、 基因組印記研究概況
        （一） 基因組印記概念及發(fā)現(xiàn)
        （二） 基因組印記的相關(guān)理論
        （三） 基因組印記與甲基化
        （四） 基因組印記與動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育
    三、 本文研究的內(nèi)容和意義
        （一） 立題依據(jù)
        （二） 本文研究的內(nèi)容和意義
第二部分 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
        （一） 研究對(duì)象及分組
        （二） 主要試劑
        （三） 實(shí)驗(yàn)儀器
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        （一） 精液樣本的處理
        （二） 精液提純
        （三） 精子 DNA 提取
        （四） 精子 DNA 甲基化修飾
        （五） DNA 擴(kuò)增
        （六） PCR 產(chǎn)物驗(yàn)證
        （七） PCR 片段回收
        （八） 連接
        （九） 轉(zhuǎn)化
        （十） 質(zhì)粒 DNA 的小量提取
        （十一）酶切驗(yàn)證
        （十二）PCR 產(chǎn)物克隆測(cè)序
        （十三）統(tǒng)計(jì)分析
第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    一、 MEST 基因 DMR PCR 擴(kuò)增
    二、 H19 基因 DMR PCR 擴(kuò)增
    三、 MEST 基因 DMR 陽(yáng)性克隆鑒定
    四、 H19 基因 DMR 陽(yáng)性克隆鑒定
    五、 H19 基因 DMR 和 MEST 基因 DMR CpG 位點(diǎn)整體甲基化狀態(tài)分析
        （一） H19 DMR CpG 各位點(diǎn)甲基化狀態(tài)的點(diǎn)狀圖
        （二） H19 DMR CpG 位點(diǎn)整體甲基化狀態(tài)分析
        （三） MEST DMR CpG 各位點(diǎn)甲基化狀態(tài)點(diǎn)狀圖
        （四） MEST DMRCpG 位點(diǎn)整體甲基化狀態(tài)分析
    六、 H19 DMR 和 MEST DMR CpG 各位點(diǎn)平均甲基化率比較分析
        （一） H19 DMR CpG 各位點(diǎn)平均甲基化百分率比較分析
        （二） MEST DMR CpG 各位點(diǎn)甲基化百分率比較分析
第四部分 討論
    一、 H19 DMR 甲基化異常是人類精子形成缺陷的一個(gè)生物標(biāo)志
    二、 MEST 甲基化異常與中國(guó)男性精子形成異常無(wú)關(guān)
第五部分 主要結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝
學(xué)期間公開(kāi)發(fā)表論文及著作情況



本文編號(hào)：3896179