本文關(guān)鍵詞：去乙酰化酶SIRT3在草酸鈣腎結(jié)石形成中的作用和機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過動物和細胞實驗檢測草酸鈣晶體作用下腎小管上皮細胞SIRT3的表達變化,及其對氧化應(yīng)激和細胞凋亡的影響,闡明SIRT3對草酸鈣腎結(jié)石形成的影響及機制。方法構(gòu)建草酸鈣腎結(jié)晶小鼠模型,設(shè)置實驗組和陰性對照組,Von Kossa染色檢測小鼠腎臟鈣鹽沉積情況。通過兩組小鼠腎臟組織的基因表達譜分析和文獻回顧,篩選出差異表達關(guān)鍵基因Sirt3,并用q PCR和Western blot實驗驗證其表達水平。免疫組化檢測兩組小鼠腎臟組織SIRT3蛋白表達,HE染色和TUNEL實驗檢測兩組小鼠腎臟組織凋亡的情況,檢測兩組小鼠腎臟組織活性氧的含量,ELISA實驗檢測兩組小鼠血液和尿液中肌酐、尿素氮以及中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白水平。構(gòu)建草酸鈣腎結(jié)晶細胞模型(TCMK-1細胞),分別用0μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、1000μg/ml濃度的一水草酸鈣晶體刺激細胞24小時、48小時及72小時,流式細胞儀檢測細胞凋亡和壞死率的變化,檢測細胞ROS含量的變化,Western blot檢測細胞SIRT3蛋白表達的變化。通過質(zhì)粒過表達細胞SIRT3,設(shè)置對照組細胞,使用1000μg/ml濃度的一水草酸鈣晶體刺激細胞72小時后,檢測細胞活性氧的含量,流式細胞儀檢測細胞凋亡和壞死率。結(jié)果成功構(gòu)建草酸鈣腎結(jié)晶小鼠模型,實驗組的12只小鼠均成功誘導(dǎo)出腎臟結(jié)晶。基因芯片分析結(jié)果顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠和對照組間共有2425個差異表達基因,q PCR驗證部分基因表達差異,結(jié)果顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟組織內(nèi)Sirt3、Nlrp6表達下調(diào),Il 1beta、Nfκb 1、Stat3、Il 6表達上調(diào);線粒體相關(guān)差異基因篩選顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟組織Sirt3表達顯著降低;Western blot實驗顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟組織內(nèi)SIRT3蛋白表達明顯降低。免疫組化實驗顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎小管上皮細胞SIRT3蛋白表達較對照組顯著降低;HE染色顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟皮質(zhì)和髓質(zhì)細胞呈現(xiàn)明顯損傷及凋亡性改變,TUNEL實驗顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟組織皮質(zhì)(45.6±10.2 vs.12.4±1.6,p0.001)和髓質(zhì)(16.8±3.4 vs.4.6±1.8,p0.001)每高倍鏡視野下平均凋亡細胞數(shù)明顯高于對照組小鼠;Western blot實驗顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟組織SIRT3蛋白表達明顯降低,伴有促凋亡蛋白Bax表達增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2表達降低;ROS檢測顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠腎臟組織中ROS含量明顯高于陰性對照組(41530 RFU vs.16440 RFU,p0.001);小鼠腎功能生化指標(biāo)檢測顯示草酸鈣腎結(jié)晶小鼠血液肌酐值(80.45±31.73 vs.29.72±16.48μmol/L,p0.05)和尿液肌酐值(184.00±116.41 vs.61.38±44.07μmol/L,p0.05)顯著高于對照組小鼠;草酸鈣腎結(jié)晶小鼠血液尿素氮值(30.46±9.44 vs.5.89±2.38 mmol/L,p0.001)和尿液尿素氮值(57.65±21.61 vs.37.76±8.07μmol/L,p0.05)顯著高于對照組小鼠;草酸鈣腎結(jié)晶小鼠血液中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白值與對照組小鼠無顯著差異(273.45±17.45 vs.275.92±30.53 mmol/L,p0.05),而尿液中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白值顯著高于對照組小鼠(239.54±19.42 vs.121.52±34.61μmol/L,p0.001)。在草酸鈣腎結(jié)晶細胞模型中,草酸鈣結(jié)晶誘導(dǎo)的細胞凋亡和壞死、活性氧增加具有濃度和時間依賴性;草酸鈣結(jié)晶下調(diào)TCMK-1細胞SIRT3的表達具有濃度和時間依賴性。過表達SIRT3后,與對照組比較,TCMK-1細胞凋亡率(8.6±0.2%vs.5.3±0.4%,p0.001)、壞死率(18.2±0.6%vs.14.7±0.8%,p0.05)和ROS水平明顯降低(1373RFU vs.530 RFU,p0.05)。結(jié)論草酸鈣腎結(jié)晶通過下調(diào)腎小管上皮細胞去乙酰化酶SIRT3的表達,促進腎小管上皮細胞氧化應(yīng)激水平升高、細胞凋亡和壞死增加,進一步促進草酸鈣晶體在腎臟的沉積。
【關(guān)鍵詞】：草酸鈣結(jié)晶 細胞凋亡 氧化應(yīng)激 SIRT3
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R692.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一部分 草酸鈣腎結(jié)晶小鼠模型的構(gòu)建及基因芯片分析12-25
• 1、材料與方法13-18
• 2、結(jié)果18-23
• 3、討論23-25
• 第二部分 草酸鈣腎結(jié)晶小鼠模型中SIRT3的作用研究25-36
• 1、材料與方法25-28
• 2、結(jié)果28-33
• 3、討論33-36
• 第三部分 草酸鈣腎結(jié)晶細胞模型中SIRT3的作用和機制研究36-46
• 1、材料與方法36-38
• 2、結(jié)果38-43
• 3、討論43-46
• 小結(jié)46-47
• 參考文獻47-51
• 綜述 SIRT3在線粒體氧化應(yīng)激中的調(diào)節(jié)作用51-63
• 參考文獻60-63
• 在讀期間發(fā)表論文情況63-64
• 致謝64

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 萬定榮;草酸鈣結(jié)晶特性與光照及生長時限相關(guān)[J];中國中藥雜志;1990年12期

2 陳壽高;;利用偏光鏡檢識草酸鈣結(jié)晶體[J];基層中藥雜志;1993年02期

3 段荔,歐陽健明;不同種類羧酸鈉對草酸鈣結(jié)晶過程中晶相的影響[J];物理化學(xué)學(xué)報;2003年10期

4 周娜,歐陽健明;二元羧酸對草酸鈣結(jié)晶的調(diào)控作用[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2004年05期

5 張惠敏;歐陽健明;;不同結(jié)構(gòu)物質(zhì)和有機基質(zhì)對草酸鈣晶體生長的促進作用[J];人工晶體學(xué)報;2005年06期

6 朱軍,沈玉華,謝安建,張莉,馬東;瓊脂凝膠體系中草酸鈣晶體的生長研究[J];安徽大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年02期

7 朱軍;沈玉華;謝安建;張莉;高貴珍;;二維瓊脂凝膠體系中過渡金屬離子對草酸鈣晶體生長和周期性沉淀的影響[J];化學(xué)研究與應(yīng)用;2007年05期

8 李偉;張旭;王少剛;施宗偉;居正華;趙聲龍;陳曉竹;;Tamm-Horsfall蛋白對草酸鈣結(jié)晶成核和聚集的影響[J];中華實驗外科雜志;2007年04期

9 鄧穗平;胡鵬;歐陽健明;;二元羧酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與其抑制草酸鈣結(jié)晶能力研究[J];光譜學(xué)與光譜分析;2007年10期

10 萬牡華;王淼;鄧蘭青;歐陽健明;;不同分子質(zhì)量聚乙二醇對一水草酸鈣成核和生長的調(diào)控作用[J];人工晶體學(xué)報;2008年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳村元;歐陽健明;;溫度變化對草酸鈣晶體生長影響的研究進展[A];中國化學(xué)會2005年中西部十五省（區(qū)）、市無機化學(xué)化工學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2005年

2 陳書尚;孫穎浩;高小峰;周鐵;;草酸/一水草酸鈣結(jié)晶對人腎小管上皮細胞的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

3 李士闊;沈玉華;謝安建;光善儀;張慶鳳;李傳浩;;雙連續(xù)微乳液中草酸鈣晶體的成核生長[A];第十四屆全國分子光譜學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

4 夏科;馬豫峰;蔡繼業(yè);;草酸鈣在硫酸軟骨素自組裝膜上周期沉淀的研究[A];全國第七屆掃描隧道顯微學(xué)學(xué)術(shù)會議（STM'7）論文集（一）[C];2002年

5 楊效登;張華勇;徐桂英;;HPCHS調(diào)控CaC_2O_4結(jié)晶的研究[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第5分會場摘要集[C];2012年

6 歐陽健明;袁歡欣;;不同結(jié)構(gòu)氨羧鉀抑制草酸鈣晶體生長及其與分子結(jié)構(gòu)關(guān)系[A];中國化學(xué)會全國第十三屆大環(huán)化學(xué)暨第五屆超分子化學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文選集[C];2006年

7 王淼;歐陽健明;;降解異枝麒麟菜硫酸多糖對尿石礦物草酸鈣生長的抑制作用[A];全國第十四屆大環(huán)化學(xué)暨第六屆超分子化學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文專輯[C];2008年

8 孫丙華;黎承楊;鄧耀良;;體外培養(yǎng)體系中巨噬細胞與草酸鈣晶體相互作用的形態(tài)學(xué)研究[A];第十六屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

9 陳郁璇;王海水;;3-巰基丙酸自組裝膜誘導(dǎo)草酸鈣晶體的成核和生長[A];中國化學(xué)會第十四屆膠體與界面化學(xué)會議論文摘要集-第2分會：溶液中的聚集與分子組裝[C];2013年

10 喬建坤;郭小林;劉繼紅;楊俊;王濤;曾又林;劉波;王少剛;;草酸鈣尿結(jié)石患者腎組織中維生素K依賴羧化酶的表達及意義[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜立經(jīng);談?wù)勈澄镏械牟菟醄N];家庭醫(yī)生報;2007年

2 周國信;方解石對顏料層的作用[N];中國文物報;2014年

3 王明順;有些蔬菜會影響鈣的吸收[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

4 高軍;食用酸菜應(yīng)適量[N];中華合作時報;2002年

5 東衛(wèi);不要經(jīng)常在“夜排檔”就餐[N];工人日報;2000年

6 豐城市湖塘中學(xué) 羅海根;生活中的酸向我們悄悄走近[N];宜春日報;2011年

7 朱本浩;補鈣——方法得當(dāng) 事半功倍[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

8 梅筠;食物搭配不當(dāng)可致病[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

9 博力樂;不該一起吃的食物[N];中國消費者報;2003年

10 紅 光邋;營養(yǎng)攝取須注意不該一起吃的食物[N];大眾科技報;2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 劉永旺;不同硒源對乙二醇誘導(dǎo)的犬草酸鈣尿結(jié)石形成的影響與機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 任志華;草酸降解菌的分離鑒定及其對犬草酸鈣尿結(jié)石的預(yù)防作用與機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 Walaa Ismail Khalil Mohamaden;犬草酸鈣結(jié)石形成機理的研究[D];揚州大學(xué);2013年

4 李霞;微量熱法研究生物大分子及草酸鈣模擬生物礦化[D];武漢大學(xué);2004年

5 李詩燕;磷酸化Osteopontin抑制磷酸鈣和草酸鈣結(jié)晶的動力學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 汪麗;組蛋白去乙�；敢种苿㏒AHA拮抗腎草酸鈣結(jié)晶形成及其機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 吳浩然;VKORC1在草酸鈣結(jié)晶形成中的作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 鐘文婷;富硒乳酸菌對食源性草酸過多犬尿石癥的預(yù)防作用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 程文龍;香蕉（Musa spp.）針晶體內(nèi)蛋白N-末端短肽促進草酸鈣結(jié)晶的動力學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 蘇永康;草酸鈣對體外培養(yǎng)犬腎小管上皮細胞的作用[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 賀俊斌;利用草酸鈣吸附分子對草酸脫羧酶修飾改性的研究[D];廣西民族大學(xué);2016年

7 劉敏;去乙�；窼IRT3在草酸鈣腎結(jié)石形成中的作用和機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

8 王淼;降解海藻多糖對草酸鈣生長、聚集和晶面的影響[D];暨南大學(xué);2009年

9 鄧蘭青;聚合物對草酸鈣尿路結(jié)石的調(diào)控作用[D];暨南大學(xué);2006年

10 姚秀瓊;不同模擬體系中草酸鈣晶體的結(jié)晶及其對尿結(jié)石的化學(xué)模擬[D];暨南大學(xué);2002年

  本文關(guān)鍵詞：去乙�；窼IRT3在草酸鈣腎結(jié)石形成中的作用和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：387312