本文關鍵詞：NFATs-ET1通路在腎癌細胞786O增殖和遷移中的作用及其機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:前期研究發(fā)現(xiàn)具有中度成瘤性的人胚腎細胞(Human Embryonic Kidney 293cell,HEK293細胞)在靜息狀態(tài)下就存在NFATs的活化現(xiàn)象,且導入外源性CHP2基因可促進HEK293細胞中活化T細胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFATs)的活化及內皮素1(endothelin 1,ET1)的表達,促進腫瘤細胞的生長。我們的課題旨在分析不同癌細胞株中NFATs及ET1的表達差異,闡明與腎癌細胞786O增殖和遷移相關的NFATs亞型的種類及其組成性活化狀態(tài),并探討NFATs組成性活化對腎癌細胞786O增殖和遷移的影響及其作用機制。方法:1.通過逆轉錄-聚合酶鏈式反應(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,RT-PCR)技術檢測不同癌細胞株中ET1及NFATs的m RNA表達水平,同時應用蛋白印跡(Western-blot)和核漿分離技術確定腎癌細胞786O和人胚腎上皮細胞HEK293中NFATs的蛋白水平的表達及核、漿分布情況;2.采用細胞計數(shù)和細胞增殖—毒性檢測方法(CCK8)來比較腎癌細胞786O及HEK293細胞增殖能力的差別;3.借助劃痕實驗觀察786O和HEK293細胞的遷移能力的差異;4.使用Ca N-NFAT通路阻斷劑Cs A阻斷鈣調磷酸酶(Ca N)的活性,觀察其對腎癌細胞786O和HEK293細胞的影響(包括ET1和NFATs m RNA和蛋白的表達水平、細胞增殖情況、細胞遷移和侵襲能力以及細胞的凋亡情況)。結果:1.NFATc1,NFATc3和ET1在不同癌細胞株中有表達,但不同癌細胞株中存在顯著差異。2.NFATc1特異性表達于786O細胞中;NFATc3在786O中的表達比HEK293高約3倍,且NFATc3組成性活化程度高于HEK293;ET1特異性表達于HEK293中;3.786O細胞增殖能力明顯大于HEK293,培養(yǎng)72h可見3倍以上差距;4.786O細胞的遷移能力比HEK293細胞強,培養(yǎng)12h即可見顯著差異;5.用環(huán)孢素(Cs A)阻斷鈣調磷酸酶(Ca N)的活性,培養(yǎng)24h后,786O細胞中ET1 m RNA水平的表達下降4倍以上,且NFATc3的入核也有所減少;6.用環(huán)孢素(Cs A)阻斷鈣調磷酸酶(Ca N)的活性,786O細胞的增殖受到明顯抑制,降低1倍左右,而HEK293細胞卻幾乎不受影響;786O的遷移速度也明顯下降,培養(yǎng)12h即可見顯著差異;用Cs A處理72h后,786O細胞的凋亡比例增加1倍,HEK293細胞卻沒有明顯變化;同時,786O細胞的侵襲能力有顯著地下降。結論:NFATc3的表達和組成性活化可能與腎癌細胞786O的增殖和遷移有關;NFATc3可能是通過促進內源性ET1的表達和抑制細胞凋亡兩種途徑促進腎癌細胞786O的增殖和遷移。
【關鍵詞】：腎癌細胞786O 內皮素1 活化T細胞核因子 細胞遷移 細胞增殖
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-18
• 1.1 內皮素（ETs）11-12
• 1.2 鈣調神經(jīng)磷酸酶(calcineurin,CaN)12-14
• 1.3 活化T細胞核因子（nuclear factor of activated T cells，NFATs）14-15
• 1.4 ET1-CaN-NFATs15-18
• 第2章不同腫瘤細胞系中ET1 和NFATs的表達差異18-28
• 2.1 引言18
• 2.2 實驗材料與方法18-26
• 2.2.1 實驗材料18-19
• 2.2.2 不同腫瘤細胞細胞的復蘇19-20
• 2.2.3 細胞培養(yǎng)及傳代20
• 2.2.4 細胞凍存20
• 2.2.5 細胞RNA的提取20
• 2.2.6 RNA濃度測定及鑒定20-21
• 2.2.7 PT-PCR實驗21-23
• 2.2.8 細胞中總蛋白的提取23
• 2.2.9 核漿分離技術提取漿蛋白和核蛋白23
• 2.2.10 蛋白濃度的測定23-24
• 2.2.11 蛋白印跡法即Western Blot檢測目的蛋白的表達24-26
• 2.3 實驗結果26-28
• 2.3.1 不同腫瘤細胞中NFATs和ET1 在mRNA水平的表達26
• 2.3.2 786O和HEK293 中NFATs在蛋白水平的表達和核漿分布26-28
• 第3章 786O與HEK293 在細胞增殖和遷移方面的差異28-31
• 3.1 引言28
• 3.2 實驗材料與方法28-29
• 3.2.1 實驗材料28
• 3.2.2 細胞增殖實驗28
• 3.2.3 CCK8 實驗28-29
• 3.2.4 劃痕實驗29
• 3.3 實驗結果29-31
• 3.3.1 細胞增殖差異29-30
• 3.3.2786O細胞遷移能力大于HEK293 細胞30-31
• 第4章 CsA阻斷CaN通路對 786O細胞的影響31-37
• 4.1 引言31
• 4.2 材料與方法31-33
• 4.2.1 實驗材料31
• 4.2.2 RT-PCR實驗31
• 4.2.3 Western-Blot技術檢測CsA作用后NFATc3 在 786O胞核胞漿中的分布情況31-32
• 4.2.4 CCK8 技術檢測32
• 4.2.5 軟瓊脂實驗32
• 4.2.6 細胞凋亡實驗32-33
• 4.3 實驗結果33-37
• 4.3.1 CsA對ET1 和NFATc3 在mRNA水平表達的影響33
• 4.3.2 CsA對NFATc3 核漿分布的影響33-34
• 4.3.3 CsA對 786O和HEK293 細胞增殖能力的影響34
• 4.3.4 CsA對 786O細胞遷移能力的影響34-35
• 4.3.5 CsA對 786O細胞侵襲能力的影響35-36
• 4.3.6 CsA對 786O細胞凋亡情況的影響36-37
• 第5章 討論37-40
• 第6章 全文總結40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻42-45
• 附錄45-47
• 攻讀學位期間的研究成果47-48
• 綜述48-54
• 參考文獻52-54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Endothelium-specific SIRT1 overexpression inhibits hyperglycemia-induced upregulation of vascular cell senescence[J];Science China(Life Sciences);2012年06期

2 馬建輝;李鳴;張思維;那彥群;陳萬青;;中國部分市縣腎癌及泌尿系其他惡性腫瘤發(fā)病趨勢比較研究[J];中華泌尿外科雜志;2009年08期

  本文關鍵詞：NFATs-ET1通路在腎癌細胞786O增殖和遷移中的作用及其機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：386912