目的:探討TRIP13對膀胱癌的增殖耐藥機(jī)制以及靶標(biāo)藥物的作用機(jī)制。方法:1)通過分析TCGA和GEP數(shù)據(jù)庫中腫瘤患者與正常對照組的臨床數(shù)據(jù)樣本,分析組織表達(dá)、生存曲線,探究TRIP13與腫瘤之間的關(guān)系。2)構(gòu)建TRIP13過表達(dá)以及敲低的T24和J82細(xì)胞株,Western blot檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況;MTT法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力;細(xì)胞周期檢測細(xì)胞生長周期分布;Annexin-V APC/PI雙染法,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況;免疫熒光檢測γH2AX,檢測TRIP13對DNA損傷的影響;Western blot檢測MAD2、RAD50、γH2AX蛋白表達(dá),闡明TRIP13促進(jìn)腫瘤增殖耐藥的機(jī)制。3)應(yīng)用MTT法檢測VCP17和VCP20對腫瘤細(xì)胞活性的影響;使用Annexin-V APC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡情況,同時(shí)用Western blot法檢測凋亡蛋白如PARP、Casepase 3的表達(dá)情況;應(yīng)用細(xì)胞周期檢測細(xì)胞周期分布情況,同時(shí)檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如Cyclin B1;使用TRAP染色探究VCP17和VCP20對破骨細(xì)胞分化的影響,同時(shí)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR,檢測多... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 研究背景
    1. 中醫(yī)對腫瘤的認(rèn)識
    2. TRIP13在腫瘤中的作用
        2.1 TRIP13在細(xì)胞中的生物學(xué)功能
        2.2 TRIP13過表達(dá)與人類腫瘤有關(guān)
        2.3 TRIP13異常表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生
        2.4 TRIP13升高促進(jìn)腫瘤進(jìn)展
        2.5 TRIP13導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性降低
        2.6 靶向TRIP13可能是治療腫瘤的一個(gè)前景
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一: TRIP13促進(jìn)腫瘤增殖及耐藥機(jī)制探究
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.2 試劑配制
            1.3 主要耗材
            1.4 細(xì)胞株及培養(yǎng)條件
        2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2 質(zhì)粒制備及抽提
            3.3 細(xì)胞構(gòu)建
            3.4 細(xì)胞增殖毒性檢測
            3.5 免疫印跡(Westem-Blot)
            3.6 細(xì)胞周期檢測
            3.7 細(xì)胞凋亡檢測
            3.8 細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)
            3.9 γH2AX免疫熒光
            3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.1 TRIP13過表達(dá)與膀胱癌預(yù)后不良相關(guān)
            4.2 敲低TRIP13抑制T24和J82細(xì)胞株生長并誘導(dǎo)凋亡
            4.3 過表達(dá)TRIP13促進(jìn)T24和J82細(xì)胞株生長
            4.4 高表達(dá)TRIP13增強(qiáng)T24和J82細(xì)胞株的耐藥性
            4.5 TRIP13通過抑制SAC信號和DNA損傷起到致癌作用
        5 討論
    實(shí)驗(yàn)二: 新型小分子靶向化合物作用機(jī)制研究
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.2 主要耗材
            1.3 化合物
            1.4 細(xì)胞株及培養(yǎng)條件
            1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1 小鼠皮下MM移植瘤模型的建立
            3.2 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)
            3.3 細(xì)胞核蛋白和漿蛋白提取
            3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3.5 骨髓瘤小鼠模型的建立
            3.6 免疫印跡(Western-Blot)
            3.7 細(xì)胞增殖毒性檢測
            3.8 細(xì)胞周期檢測
            3.9 細(xì)胞凋亡檢測
        4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.1 VCP17、VCP20化合物的來源及結(jié)構(gòu)
            4.2 VCP17、VCP20能抑制腫瘤細(xì)胞的活性
            4.3 VCP17、VCP20能將ARP1和H929細(xì)胞阻滯于G2/M
            4.4 VCP17、VCP20能誘導(dǎo)ARP1和H929細(xì)胞凋亡
            4.5 VCP17、VCP20能抑制NF-κB信號通路
            4.6 VCP17、VCP20能抑制RAW264.7細(xì)胞的分化
            4.7 VCP17、VCP20對多種細(xì)胞因子的影響
            4.8 VCP17、VCP20能抑制小鼠皮下移植瘤的生長
            4.9 VCP17、VCP20在骨髓瘤小鼠模型中的作用
            4.10 VCP17、VCP20聯(lián)合硼替佐米(BTZ)抑制ARP1和H929細(xì)胞的增殖
        5 討論
第三部分 總結(jié)展望
    課題結(jié)論
    不足與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3651725