本文關(guān)鍵詞：SPAG9促進(jìn)前列腺癌增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:前列腺癌是常見的泌尿系惡性腫瘤,在歐美發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率居第1位,死亡率居第2位;在我國(guó),雖發(fā)病率低于西方等國(guó)家,但近年來(lái)隨著生活水平及環(huán)境變化,發(fā)病率逐漸升高。前列腺癌目前的治療主要為多模式綜合治療,其中包括手術(shù)切除、放療、內(nèi)分泌治療等,但是于雄激素抵抗,手術(shù)及放療對(duì)于晚期前列腺癌患者療效不顯著。前列腺癌極易復(fù)發(fā)、侵襲和轉(zhuǎn)移,因此積極尋求前列腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物成為前列腺癌早期檢測(cè)、靶向治療和預(yù)防復(fù)發(fā)的關(guān)鍵。精子相關(guān)抗原9(SPAG9),是癌睪丸抗原(CTA)家族成員之一,在睪丸組織中特異性表達(dá)。最近研究表明,在腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中,SPAG9參與并起著重要的調(diào)節(jié)作用。SPAG9主要是作為支架蛋白,能夠輔助活化JNK信號(hào)通路,從而促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移,抑制腫瘤凋亡等。JNK信號(hào)通路的活化對(duì)于腫瘤的促進(jìn)均有報(bào)道。由此推測(cè),在腫瘤中,SPAG9表達(dá)上調(diào),可改變?cè)械幕蛘{(diào)節(jié)模式,促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等。本研究主要探討SPAG9對(duì)前列腺癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響。方法1、采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)人前列腺癌臨床標(biāo)本SPAG9表達(dá)水平,并分析其與前列腺癌患者年齡、GS評(píng)分、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、血PSA值等病理學(xué)參數(shù)的相關(guān)性。2、采用Western blot技術(shù)檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞中SPAG9表達(dá)水平,選擇高表達(dá)細(xì)胞系進(jìn)行干擾,低表達(dá)細(xì)胞系進(jìn)行過(guò)表達(dá);3、構(gòu)建SPAG9過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及干擾質(zhì)粒,PC3過(guò)表達(dá)及DU145干擾后,采用q RT-PCR和Western blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞SPAG9的表達(dá)變化;4、CCK-8檢測(cè)SPAG9對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的影響;5、流式細(xì)胞術(shù)以及Western blot技術(shù)檢測(cè)SPAG9對(duì)前列腺癌細(xì)胞周期的影響;6、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染SPAG9對(duì)前列腺癌細(xì)胞體外遷移能力的影響;采用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察SPAG9對(duì)前列腺癌細(xì)胞體外遷移能力的影響;7、采用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)體內(nèi)驗(yàn)證SPAG9對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的影響;8、采用Western blot技術(shù)檢測(cè)SPAG9對(duì)MAPK信號(hào)通路中ERK、JNK以及P38蛋白的變化。結(jié)果1、免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在人前列腺癌標(biāo)本中,癌組織SPAG9高表達(dá),相對(duì)于癌旁組織低表達(dá);統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),SPAG9的表達(dá)水平與臨床GS評(píng)分、前列腺癌分期顯著相關(guān)(P0.05);2、蛋白水平證實(shí),PC3細(xì)胞中SPAG9表達(dá)最低,相反,在DU145細(xì)胞中表達(dá)最高;3、在PC3細(xì)胞中,真核表達(dá)SPAG9后,其RNA和蛋白均上調(diào),證實(shí)真核質(zhì)粒構(gòu)建成功;相反,在DU145細(xì)胞中干擾SPAG9后,其RNA、蛋白均下調(diào),說(shuō)明干擾質(zhì)粒篩選成功;4、CCK-8法實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,SPAG9促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖;5、過(guò)表達(dá)SPAG9后,加快PC3的細(xì)胞周期,相反,干擾SPAG9后,DU145細(xì)胞周期明顯被阻滯;蛋白水平證實(shí),其周期蛋白CDK2及Cyclin D表達(dá)增加。6、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,PC3細(xì)胞過(guò)表達(dá)SPAG9后,穿膜能力明顯高于對(duì)照組;DU145細(xì)胞干擾SPAG9后,穿膜能力低于對(duì)照組;劃痕實(shí)驗(yàn)同樣說(shuō)明,PC3細(xì)胞過(guò)表達(dá)SPAG9后,細(xì)胞遷移能力高于對(duì)照組;7、裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,干擾SPAG9后,腫瘤的增殖能力低于對(duì)照組;8、在PC3細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)SPAG9后,磷酸化JNK、ERK及P38蛋白表達(dá)均上調(diào),相反,DU145干擾SPAG9后,磷酸化JNK、ERK及P38蛋白表達(dá)均下調(diào)。說(shuō)明,SPAG9活化了JNK、ERK及P38信號(hào)通路。結(jié)論1、SPAG9在前列腺癌組織中高表達(dá),可能作為早期診斷及預(yù)后的指標(biāo);2、SPAG9促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為;3、SPAG9可能通過(guò)ERK、JNK及P38信號(hào)通路發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：SPAG9 前列腺癌 增殖 細(xì)胞周期 侵襲轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 SPAG9與前列腺癌密切相關(guān)12-18
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器12-14
• 2.2 結(jié)果14-16
• 2.3 討論16-17
• 2.4 結(jié)論17-18
• 第三章 SPAG9促進(jìn)前列腺癌增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的功能學(xué)實(shí)驗(yàn)研究18-35
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-21
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法21-28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-33
• 3.4 討論33-34
• 3.5 結(jié)論34-35
• 第四章 SPAG9促進(jìn)前腺癌增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究35-38
• 4.1 主要實(shí)驗(yàn)材料35
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法35
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-36
• 4.4 討論36-37
• 4.5 結(jié)論37-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述 JNK信號(hào)通路對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展42-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 碩士在讀期間以第一作者發(fā)表的論文情況52-53
• 致謝53

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 孫濤;JIP3和JIP1分別調(diào)節(jié)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)和TrkB順軸突轉(zhuǎn)運(yùn)的研究[D];山東大學(xué);2013年

2 黃鑫;小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂細(xì)胞極性建立、紡錘體組裝和染色體排列的研究[D];廈門大學(xué);2014年

3 李凱;促紅細(xì)胞生成素對(duì)大鼠臂叢神經(jīng)根性撕脫傷后脊髓神經(jīng)元保護(hù)的作用及其分子機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 何小琴;Axin1在小鼠卵母細(xì)胞成熟中的作用[D];廈門大學(xué);2014年

2 陳鑫;缺氧微環(huán)境下微管相關(guān)蛋白4對(duì)人表皮細(xì)胞遷移能力影響及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：SPAG9促進(jìn)前列腺癌增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：353346